血流感染实验室诊断新方法

血流感染实验室诊断新方法第一页，共六十五页，编辑于2023年，星期一二血流感染与诊断金标准一微生物与人体感染三全自动血培养技术与临床的联系提纲第二页，共六十五页，编辑于2023年，星期一一微生物与人体感染第三页，共六十五页，编辑于2023年，星期一人类共生微生物（正常菌群）：宿主生命早期建立并持续终生，相互受益。微生物与人体宿主的关系病原菌：能引起疾病的微生物寄居位置改变、免疫低下、平衡失调等共生微生物与病原菌都是人体广义的“感染微生物”，感染结果由微生物与人体之间相互作用的复杂结果来决定。第四页，共六十五页，编辑于2023年，星期一感染微生物毒力

因子的强弱感染结局人体特异性防御机制的强弱错综复杂的相互作用

严重感染：大范围疾病体征慢性感染：病态体征或不表现病态全部清除：痊愈三种结局事实上，只有很少的微生物能使人体致病！第五页，共六十五页，编辑于2023年，星期一

●外毒素和内毒素：

外毒素是微生物对数生长期分泌的热稳定蛋白质，内毒素是革兰氏阴性菌外膜上毒性脂质部分，引起发热、发疹、恶心呕吐、多器官损害与衰竭等全身症状；

●粘附：如肠致病性大肠杆菌；

●动力：如细菌的鞭毛；

●血清抗性：抗补体对脂多层的溶解，常引起全身性感染；

●荚膜：抗吞噬，如新型隐球菌；

●细胞内生存：抗吞噬，如鼠弓形体；

●酶：能水解宿主细胞组织；

●摄取铁的机制：产生溶血素，如流感嗜血杆菌；

●抗原变异：引起宿主免疫交叉反应，自身免疫反应；

……

了解一下微生物毒力因子第六页，共六十五页，编辑于2023年，星期一

●初级防御：

完善的屏障体系（皮肤、粘膜、纤毛、粘液等）、皮肤脂肪酸积聚、PH高或低、氧张力、正常菌群营养和细胞膜结合位竞争、酶及酸等；

●次级防御：

补体、溶菌酶、血液与淋巴液中噬菌素、吞噬细胞、抗体等体液免疫与细胞免疫；

……

了解一下人体防御机制第七页，共六十五页，编辑于2023年，星期一

微生物感染中，血流感染常造成严重的后果，死亡率达到32%-54%，

及早明确诊断，便于合理用药和分析提示预后…

微生物与人体感染第八页，共六十五页，编辑于2023年，星期一二血流感染与诊断金标准第九页，共六十五页，编辑于2023年，星期一血流感染血败血症（septicemia）

菌血症(bacteremia）

脓毒血症（fyemia）

真菌血症（fungemia）泛指是指病原菌及其毒素侵入血流所引起的一类临床综合征。病程

中常有炎症介质的激活和释放，引起高热、寒战、心动过速

呼吸急促、皮疹和神志改变等一系列临床症状，严重者可引

起休克、DIC和多器官功能衰竭，死亡率较高。第十页，共六十五页，编辑于2023年，星期一血流感染流行病学资料全球：1800万病例美国：确诊病例130万欧洲和日本：确诊病例190万每年治疗费用：167亿美金－美国67亿美金－欧洲导致死亡病种排名第十位每年导致大约40万人死亡败血症在10年间增加了139％非心内ICU病区最常见的死亡病因在130万病例中，有78万例发生在ICU病区CritCareMed2001;29:1303-10杀手第十一页，共六十五页，编辑于2023年，星期一感染病原体统计数据儿童感染第十二页，共六十五页，编辑于2023年，星期一老年>70岁休克重大创伤昏迷既往抗生素史机械通气留置导管免疫抑制药物急性肾功能不全延长ICU时间血流感染易感因素第十三页，共六十五页，编辑于2023年，星期一病原体因素：超级细菌、耐药菌株病人因素：基人础疾病严重、免疫功能低下、伤口污染、内毒素和菌群移位等医源性因素：*机体的天然屏医疗手段破坏障*镇静*各种侵入性镇痛药物对呼吸道感染的影响*抑酸剂*抗生素滥用操作境因环素：ICU长期滞留血流感染易感因素第十四页，共六十五页，编辑于2023年，星期一院内获得性感染：入院48小时后，多由致病力强、耐药的微生物引起

致病微生物：细菌（90％）、真菌、病毒、支原体、衣原体等ICU常见致病微生物：阳性球菌感染增加、真菌感染增多铜绿假单胞不动杆菌金葡菌真菌不同感染部位常见致病菌：尿路：大肠杆菌、肠球菌伤口：葡萄球菌、大肠杆菌呼吸系统；G-多见，近年球菌增多腹腔感染：多混有厌氧菌长期应用抗生素：真菌感染，念珠菌（白念）多见，近来曲霉菌等其它真菌感染增加血流感染常见病原体第十五页，共六十五页，编辑于2023年，星期一血流感染常见病原体感染源、感染途径：外源性感染：交叉感染内源性感染：自身感染第十六页，共六十五页，编辑于2023年，星期一血流感染病原体流行病学资料革兰氏阳性菌感染呈上升趋势特别是葡萄球菌和肠球菌广谱耐药菌株（VRE、MRSA/MRSE、VISA/VRSA）真菌血症呈上升趋势（特别是假丝酵母菌）革兰氏阴性菌感染没有变化厌氧菌/混合感染呈下降趋势分枝杆菌血症呈上升趋势儿科感染中凝固酶阴性葡萄球菌感染升高医院获得性感染升高第十七页，共六十五页，编辑于2023年，星期一第十八页，共六十五页，编辑于2023年，星期一ICU获得性感染肺炎47%下呼吸道感染18%血流感染12%泌尿道感染18%其他5%欧洲ICU感染流行病学调查：

10038例ICU患者有4501例发生感染(44.8%)Spenceretal.ClinMicrobiolInf,1997,3:S21.第十九页，共六十五页，编辑于2023年，星期一内科ICU常见感染的部位心血管5%眼耳鼻喉3%肺炎30%皮肤软组织3%血流16%尿路30%胃肠道5%下呼吸道6%RichardsM,etal.Epidemiology,prevalence,andsitesofinfectionsinintensivecareunits.SeminarsinRespiratoryandCriticalCareMedicine.2003;24(1):3-22第二十页，共六十五页，编辑于2023年，星期一外科ICU常见感染的部位心血管4%眼耳鼻喉3%肺炎33%皮肤软组织3%血流13%尿路18%胃肠道4%手术切口15%下呼吸道6%RichardsM,etal.Epidemiology,prevalence,andsitesofinfectionsinintensivecareunits.SeminarsinRespiratoryandCriticalCareMedicine.2003;24(1):3-22第二十一页，共六十五页，编辑于2023年，星期一ICU感染但ICU获得的感染占所有医院获得性感染的45%ICU的医院感染率比一般病房高5~10倍ICU的耐药菌分离率高，感染难治……第二十二页，共六十五页，编辑于2023年，星期一血流感染诊断金标准

____正确的血培养血流感染诊断方法第二十三页，共六十五页，编辑于2023年，星期一PCT分子生物技术荧光原位杂交技术血流感染其他诊断方法第二十四页，共六十五页，编辑于2023年，星期一血培养查病原菌对诊断以下疾病很重要:-菌血症、败血症、真菌血症等

-感染性心内膜炎

-临床不明原因感染

-假体植入后感染(人工关节、人工瓣膜)-脉管导管相关性菌血症

-化脓性关节炎

-肺炎、脑炎-分枝杆菌感染……血培养检测的意义第二十五页，共六十五页，编辑于2023年，星期一根据培养结果：选择正确的抗感染治疗方案

调整经验治疗方案

判断感染性疾病的类型评价疗效及预后正确采取感染控制措施是否隔离减少院内感染

血液及无菌体液是最有意义的病原学检测标本。血培养检测的意义第二十六页，共六十五页，编辑于2023年，星期一血液

腹腔液

腹膜透析液

滑液

……

血培养范围—所有“无菌”体液标本胸腔液

脑脊液

心包液

导管液……

第二十七页，共六十五页，编辑于2023年，星期一传统手工培养

不足：培养时间长；培养技术落后，阳性率低；结果判断不易（溶血？浑浊？）；盲种等开放式操作容易污染；易漏检和误检等；全自动化培养

全面解决手工培养的所有问题！！血培养诊断方法连续侦测、非浸入性检测技术

（最大限度的降低污染机会和操控人员被感染可能性）

全自动血培养是诊断血流感染最先进的方法！第二十八页，共六十五页，编辑于2023年，星期一全自动血培养技术

与临床的联系第二十九页，共六十五页，编辑于2023年，星期一全自动血培养检测原理第三十页，共六十五页，编辑于2023年，星期一所有细菌呼吸产生能量有氧呼吸无氧呼吸产生不同量CO2

被“3D”

传感膜捕捉发酵

细菌生长代谢与3D传感膜第三十一页，共六十五页，编辑于2023年，星期一“3D”传感技术“3D”传感膜捕捉

三种代谢途径产生CO2报阳性（避免漏检）第三十二页，共六十五页，编辑于2023年，星期一该技术源于欧嘉隆公司，分为色原法和荧光法传感技术，现分别为梅里埃公司和BD公司所持有；列入我国“863”计划内项目；“好培养”公司是我国唯一全面掌握色原法和荧光法技术的公司；“3D”传感技术第三十三页，共六十五页，编辑于2023年，星期一四川好培养生物工程有限公司简介四川好培养生物工程有限公司是由留学英美等国的中外学子和国内资深专家共同创建的中外高新技术合作企业。注册于四川雅安国家农业科技园，专业从事探针、传感新技术与新材料在微生物领域的应用研究和产品开发。公司总部和研发中心设在成都高新区生命科技园，技术转化与产品生产基地设在雅安国家农业科技园。第三十四页，共六十五页，编辑于2023年，星期一全自动3D血培养瓶系列色原法荧光法第三十五页，共六十五页，编辑于2023年，星期一优质的血培养瓶除能提高检出率外，还能给采血、运送、实验室人员提供足够的安全防护！至少包括以下要素：“真正”的3D传感膜，全面捕捉CO2

，避免漏检；“全封闭”式采血、运送及培养设计，保护医护人员自身安全；优质富含生长因子的培养基；精确配比的瓶内气体环境；临床使用便捷，保存方便、材质优良、轻便不碎、便于开盖操作的瓶体设计；全面中和抗生素等影响细菌生长的毒素，提高检出率；优质血培养瓶六要素第三十六页，共六十五页，编辑于2023年，星期一优质血培养瓶要素之一

真正“3D”传感膜，符合欧盟技术质量标准！第三十七页，共六十五页，编辑于2023年，星期一根据“血培养安全防护”要求：

血培养中的病原菌可能通过呼吸道或直接接触污染操作人员、实验室人员的皮肤、眼或者粘膜引起感染……有实验室获得感染的风险……优质血培养瓶要素之二暴露的穿刺点解决办法？第三十八页，共六十五页，编辑于2023年，星期一专利ZL201320313947.9

安全盖

密封环取下安全盖消毒内胶塞挥干后采血盖上安全盖

送检、培养注意：透明的安全头盖不要扔，采血完后全程盖上！优质血培养瓶要素之二解决办法：安全头盖第三十九页，共六十五页，编辑于2023年，星期一优质培养基按“细胞培养”要求配制；无“抗”优质动物原料；

富含需氧菌、厌氧菌、真菌

生长因子；优质血培养瓶要素之三第四十页，共六十五页，编辑于2023年，星期一精确配比的瓶内气体环境

需氧瓶：10%CO2+90%O2厌氧瓶：10%CO2+90%N2

优质血培养瓶要素之四第四十一页，共六十五页，编辑于2023年，星期一优质血培养瓶要素之五临床使用便捷性室温保存，稳定保质期长；FDA认证的医药高分子材质瓶体，高强度、高透明度、高气密性、环保材质；“可旋盖”设计，便于阳性瓶放气及转种；第四十二页，共六十五页，编辑于2023年，星期一

中抗需氧、厌氧、小儿瓶能全面中和吸附抗生素、补体等影响细菌生长的毒素……SPS:0.35%含量的SPS能中和血液中的补体，提高检出率；吸附剂能有效吸附移除血液中及培养基中潜在抗菌素，如残留抗生素、补体，溶菌酶，转铁蛋白，Gamma-球蛋白，过氧化物及高温高压消毒而产生的附产物。优质血培养瓶要素之六第四十三页，共六十五页，编辑于2023年，星期一采用优质的血培养瓶基础规范的临床标本采集(采集时间、

采血量、组合)关键提高检出率第四十四页，共六十五页，编辑于2023年，星期一血培养临床操作规范参考标准：中华人民共和国卫生行业标准

《临床微生物实验室血培养操作规范》20120424报批起草单位：中国科学院北京协和医院卫生部临检中心香港医院管理局玛丽医院第四十五页，共六十五页，编辑于2023年，星期一参考资料：

第四十六页，共六十五页，编辑于2023年，星期一当怀疑血流感染或脓毒症时，应常规行血培养怀疑患者有血流感染的症状有：不明原因的发烧(≥38℃)或体温过低(36℃)白细胞增多（＞10.0*109/L,特别是“核左移”时），粒细胞减少（＜3.0*109/L）休克，寒颤，僵直皮肤粘膜出血、昏迷、多器官衰竭、血压降低C反应蛋白、降钙素原（PCT）、1,3-D-葡萄糖升高严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染…)心率异常加快、呼吸频率加快等生命体征改变≤采血指征第四十七页，共六十五页，编辑于2023年，星期一推荐在寒战或高热高峰前后采集用抗菌药物之前采集采血时间03060时间(分钟)体温血培养采血时机细菌浓度第四十八页，共六十五页，编辑于2023年，星期一采血量采血量是影响结果的关键因素成人一份标本2个培养瓶（需氧＋厌氧），每瓶8－10ml，共20ml；要求至少采两份标本，即40ml。儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量＜1％总血量下，一般为1－3ml新生儿0.5ml采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床90％以上的感染为需氧菌或兼性需氧菌感染血液与培养基比为1:5~1:10

血培养物每增加一毫升，真性菌血症成年人微生物的检出率增加3％第四十九页，共六十五页，编辑于2023年，星期一采血量第五十页，共六十五页，编辑于2023年，星期一注意：“双瓶双侧”原则；每位患者采血最少2套，3套更好初发患者，绝不能只采1套标本，血量不足和只做一瓶的，很难解释所得结果；

第五十一页，共六十五页，编辑于2023年，星期一采血顺序血量充足患者：先采厌氧瓶，后采需氧瓶血量不足患者：先足量采需氧瓶，后采厌氧瓶采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床90％以上的感染为需氧菌或兼性需氧菌感染第五十二页，共六十五页，编辑于2023年，星期一采血间隔时间同时或短时间内采集2－3套血培养，因为体内巨噬细胞吞噬系统会在15～30min内清除掉进入人体内的细菌可疑急性心内膜炎患者要立即取血作血培养，30分钟内完成3套血培养的采集，采集后立即进行抗菌药的经验治疗。如果24小时内报告阴性，则继续采集2套血培养。可疑的亚急性心内膜炎患者每间隔30分钟至1h采集1套，连续采集3套标本。如果24小时内报告阴性，则继续采集2套血培养。

第五十三页，共六十五页，编辑于2023年，星期一血培养采集

消毒一步法：0.5%葡萄糖酸洗必泰作用30s（不适用于小于2个月的新生儿），或70%异丙醇消毒后自然干燥。三步法：75%酒精消毒待干30s—1-2%碘酊30s或10%碘伏60s，划圈直径3cm以上—75%酒精脱碘或75%酒精消毒62s，挥干不可接触。采集组合（双侧双瓶原则）混匀送检第五十四页，共六十五页，编辑于2023年，星期一关于采血的一些问题1、血培养采血建议从外周静脉采，不建议采动脉血，为什么？

——对检出结果无明显差异，但动脉穿刺危险性较大2、常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置取血，为什么？

——污染菌或定植菌的可能性较大，除非怀疑CRBSI3、如果需要从导管处取血，初段血或导管内的补液是否需要弃去？为什么？

——不能弃去，以便于判断污染菌、定植菌或病原菌4、如果用注射器采血，采好后注入血培养瓶之前是否需要更换针头？为什么？

——无需更换，对提升阳性率无统计差异，增加了针刺伤的几率第五十五页，共六十五页，编辑于2023年，星期一血培养的采集：无菌操作洗手、皮肤充分消毒血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、凝血等其它标本要高。所以要最先采集血培养标本。污染率的指标是<3%

降低血培养污染率第五十六页，共六十五页，编辑于2023年，星期一操作注意事项皮肤、内胶塞消毒要充分挥发干；使用前检查培养瓶是否打开过，是否过期；正确采集血量后，混匀；及时送检上机，切勿冷藏或冷冻；注意安全防护，避免获得性感染；采血：不宜从静脉导管或静脉留置口取血；若从导管设施取血，必需同时静脉取血，以求对比和解释；不要弃去初段血，不用抗凝剂冲洗；不主张换针头入瓶。第五十七页，共六十五页，编辑于2023年，星期一一般细菌培养5d真菌培养14d分枝杆菌42d特殊病例需与临床沟通延长培养时间如新型隐球菌等需大于5d，多数酵母菌5d内可检出。培养时间第五十八页，共六十五页，编辑于2023年，星期一阳性