还原叶酸载体基因多态性与儿童ALL易感性的关系研究

还原叶酸载体基因多态性与儿童ALL易感性的关系研究

杨丽华

余晶

王斌南方医科大学珠江医院儿科中心研究背景急性淋巴细胞白血病（acutelymphoblasticleukemia，ALL）为最常见的儿童恶性肿瘤，约占25-30%

病毒感染基因环境病因？现普遍认为，ALL的发生为基因-环境相互作用所致理化因素遗传素质暴露于相同危险环境因素的儿童,其ALL发病的差异是由遗传易感性（susceptibility）来决定的危险环境

CancerCancer-free基因多态性Susceptibility:Metabolism,DNAdamage&repair…RFC5-MeTHF图1.叶酸代谢途径Dhillonetal.MutatRes2009;665:1-6叶酸代谢相关基因的多态性

影响细胞的叶酸代谢

干扰正常DNA合成和甲基化ALL？（Reducedfolatecarrier,

RFC）还原叶酸载体还原叶酸载体基因RFC1位于21q22.2-q22.3,编码一个含591个氨基酸的完整的膜蛋白,包含12个跨膜区(transmembranedomain，TMD)还原叶酸载体分生结构第2外显子第80位核苷酸具有高频率的A

→G多态可引起第27位密码子His→Arg多态性①与正常人群的血浆叶酸和同型半胱氨酸水平有关②可能影响儿童ALL的遗传易感性、疗效、预后等特性研究目的了解在健康儿童和ALL白血病儿童中RFC180位点基因型分布特征探讨RFC1A80G多态性与儿童ALL易感性之间的关系研究对象

ALL组

45例，2008.10-2010.2儿科和血液内科住院的初治ALL儿童。男28例，女17例，年龄1-16岁，中位年龄5.53岁。

对照组

70例，同期门诊体检健康儿童。男45名，女25名，年龄1-14岁，中位年龄5.31岁。两组均为华南地区出生汉族儿童

研究方法1.采集外周静脉血，抽提基因组DNA2.PCR扩增3.DNA片段大小检测及回收纯化4.DNA测序5.统计学处理结果500bp400bp300bp200bp150bp100bp50bp140bp

M1234567图2RFC1基因第2外显子含80片段PCR产物2%琼脂糖凝胶电泳M：Marker1-7：分别为ALL标本1-7A

BC图2

RFC1基因第2外显子含80片段的测序图A.野生型(His27His)：CACB.杂合子突变型(His27Arg)：CNC(N代表A/G杂合)

C.纯合子突变型(Arg27Arg)：CGC组别GGGAAAχ2P观察值期望值观察值期望值观察值期望值ALL组76.42021.21817.40.1340.71对照组1820.64034.71214.61.6031.21表1RFC180基因型分布及Hardy-Weinberg平衡检验拟合优度χ2检验结果：两组人群均符合H-W遗传平衡(df=2，P>0.05)，说明这两个研究人群来自大的群体，不存在明显的自然选择、迁移等因素对遗传平衡的影响组别例数 基因型频率GGAGAAALL组457（15.6）20（44.4）18（40.0）*对照组7018（25.7）40（57.1）12（17.1）*ALL组与对照组相比，χ2=7.633，P=0.02表2两组RFC1基因80位点基因型频率分布表3两组RFC基因80位点G、A等位基因频率分布组别例数等位基因频率

GAALL组4534（37.8）56(62.2)*对照组7076（54.3）64(45.7)*ALL组与对照组相比，χ2=5.983，P=0.01两组RFC180各种基因型频率的分布差异具有统计学意义两组RFC180等位基因A频率差异具有统计学意义

基因型ALL组（%）对照组（%）OR值（95%CI）OR值*（95%CI）GG7（15.6）18（25.7）1.001.00GA20（44.4）40（57.1）1.29（0.46-3.58）1.23（0.44-3.46）AA18（40.0）12（17.1）3.86（1.24-12.04）4.15（1.29-13.38）AG+AA38(84.4)52(74.3)1.88（0.71-4.95）1.87（0.71-4.93）表4RFC180多态性与儿童ALL易感性的logistic回归分析*OR*（95%CI）经过年龄和性别校正在调整了年龄、性别因素后，携带RFC180AA基因型的儿童较80GG携带者患ALL的风险增加4.15倍讨论（1）华南地区汉族健康儿童的RFC180A等位基因频率为45.7%

中国南方人群47.9%美国健康儿童62%英国健康儿童59%ReltonCL,

etal2004裴丽君2004deJongeR,

etal2009RFC1A80G多态性频率特征在不同种族或地域的人群间有不同差异讨论（2）

RFC180AA可显著性增加儿童ALL的患病风险一方面，位于TMD1内的组氨酸碱性相对较弱，可改变RFC转运功能，引起叶酸摄取率

以及甲硫氨酸循环中的Hcy，致使该循环转甲基能力

（Whetstineetal,2001）另一方面，含RFC180A等位基因的个体的淋巴细胞微核率较其它基因型者明