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牡荆苷对大鼠脓毒症致急性务必参照以下格式在稿件中补充完整基金项目5项信息(缺一不可!)。务必参照以下格式在稿件中补充完整基金项目5项信息(缺一不可!)。例:国家自然科学基金委员会重大课题(90209003):PMS肝气逆证受体基因表达及其非线性动力学特征;负责人:乔明琦。(其中立项部门:国家自然科学基金委员会;项目类型:重大课题;编号:90209003;名称:PMS肝气逆证受体基因表达及其非线性动力学特征;负责人:乔明琦。)许慧课题基金:国家中医药管理局全国中医药创新骨干人才项目(国中医药人教函〔2019〕128号);湖南中医药大学校级科研基金项目(2019XJJJ109)第一作者课题基金:国家中医药管理局全国中医药创新骨干人才项目(国中医药人教函〔2019〕128号);湖南中医药大学校级科研基金项目(2019XJJJ109)第一作者:许慧,副主任医师,硕士,主要从事重症医学相关研究。通信作者:张慧明,副主任医师,主要从事围产医学相关的研究,E-mail:nyxuh123@126.com。收稿日期:2022-09-08修回日期:2022-12-12基金项目:国家中医药管理局全国中医药创新骨干人才项目(国中医药人教函〔2019〕128号);湖南中医药大学校级科研基金项目(2019XJJJ109)通讯作者:张慧明,副主任医师,主要研究方向:围产医学相关的研究。(1.长沙市第四医院(湖南长沙410006);2.衡阳市中医医院(湖南衡阳421001);3.南华大学衡阳医学院附属第一医院(湖南衡阳421001)[摘要]:目的:探讨牡荆苷(Vitexin)对大鼠脓毒症(Sepsis)致急性肾损伤的保护作用及机制。方法:采用盲肠结扎穿法(CLP)制备大鼠脓毒症模型,再将造模成功的大鼠分为模型组(Sep组)、牡荆苷低剂量组(Vit-L组)、牡荆苷高剂量组(Vit-H组)和高剂量牡荆苷+PGC-1α特异性抑制剂组(Vit-H+SR-18292组),另设置假手术组(sham组),每组10只。腹腔注射给药,1次/d天,连续3d。Elisa天。ELISA法检测血肌酐(SCrScr)、血尿素氮(BUN)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1(KIM-1)水平;HE染色观察肾组织病理学变化;比色法检测肾脏组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;qRT-PCR法检测肾组织线粒体DNA(mtDNA)的拷贝数;Westernblot法检测肾组织中PGC-1α、NRF-1和TFAM等蛋白表达水平。结果:与sham组比较,Sep组大鼠肾组织损伤严重,血清中Scr、BUN、NGAL、KIM-1含量和肾组织中MDA含量均显著升高(P<<0.05),而肾组织中SOD活性、mtDNA含量以及PGC-1α、NRF-1和TFAM蛋白表达水平均显著降低(P<<0.05);与Sep组比较,Vit-H组大鼠肾组织损伤明显改善,血清中Scr、BUN、NGAL、KIM-1含量及肾组织中MDA含量显均著降低(P<<0.05),肾组织中SOD活性、mtDNA含量以及PGC-1α,NRF-1和TFAM蛋白表达水平均显著升高(P<<0.05),而Vit-L组大鼠上述各指标无显著差异(P>>0.05)。与Vit-H组比较,SR-18292干预可显著抑制牡荆苷对脓毒症大鼠急性肾损伤的改善作用。结论:牡荆苷对大鼠脓毒症致急性肾损伤具有保护作用,其机制与上调PGC-1α表达,促进肾脏线粒体生物合成,减少线粒体氧化应激损伤有关。[关键词]:牡荆苷;脓毒症;急性肾损伤;线粒体生物合成;氧化应激[中图分类号]R363.2:R285.5ProtectiveeffectEffectandmechanismMechanismofvitexinVitexinonacutekidneyinjuryinducedAcuteKidneyInjuryInducedbysepsisSepsisinratsRatsXUHui1,JIANGFenghua2,ZHANGHuiming3.1DepartmentofCriticalCareMedicine,TheHuiming3(1.theFourthHospitalofChangsha,Changsha410006,China;2DepartmentofAnesthesiology,2.HengyangHospitaloftraditionalTraditionalChinesemedicineMedicine,Hengyang421001,China;3DepartmentofObstetrics,The3.theFirstAffiliatedHospital,HengyangMedicalSchool,UniversityofSouthChina,Hengyang421001,China.)【Abstact】Abstact:Objective:ToinvestigatetheprotectiveeffectandmechanismofVitexinonacutekidneyinjuryinducedbySepsisinrats.
Methods:Theratsepsismodelwaspreparedbycaecalligation(CLP),andtheratsweredividedintomodelgroup(Sepgroup),vitexinlow-dosegroup(Vit-Lgroup),vitexinhigh-dosegroup(Vit-Hgroup)andHighdosevitexinwithPGC-1αspecificinhibitorgroup(Vit-H+SR-18292group).Inaddition,theshamoperationgroup(Shamgroup)wasset,with10patientsineachgroup.Intraperitonealinjectionwasgivenonceadayforconsecutive3days.Serumcreatinine(SCrScr),bloodureanitrogen(BUN),neutrophilgelatinase-associatedlipidcarrierprotein(NGAL)andkidneyinjurymolecule1(KIM-1)weredetectedbyElisaELISA.HistopathologicalchangesofkidneywereobservedbyHEstaining.Thecontentofmalondialdehyde(MDA)andtheactivityofsuperoxidedismutase(SOD)inrenaltissuesweredeterminedbycolorimetry.ThecopynumberofrenalmitochondrialDNA(mtDNA)wasdetectedbyqRT-PCR.TheexpressionlevelsofPGC-1α,NRF-1andTFAMinrenaltissuesweredetectedbyWesternblot.Results:Comparedwithshamgroup,thekidneytissueofratsinSepgroupwasseverelydamaged,andthecontentsofScr,BUN,NGALandKIM-1inserumandMDAcontentinkidneytissueweresignificantlyincreased(P<0.05).TheSODactivity,mtDNAcontentandtheproteinexpressionlevelsofPGC-1α,NRF-1andTFAMinkidneytissueweresignificantlydecreased(P<0.05).ComparedwithSepgroup,thekidneyinjuryinVit-Hgroupwassignificantlyimproved,Scr,BUN,NGAL,KIM-1contentsinserumandMDAcontentinkidneytissueweresignificantlydecreased(P<0.05),TheSODactivity,contentsofmtDNAandPGC-1αinkidneytissueweresignificantlydecreased(P<0.05).TheproteinexpressionlevelsofNRF-1andTFAMweresignificantlyincreased(P<0.05),whiletherewerenosignificantdifferencesintheaboveindexesinVit-Lgroup(P>>0.05).ComparedwithVit-Hgroup,SR-18292significantlyinhibitedtheameliorativeeffectofvitexinonacutekidneyinjuryinsepticrats.Conclusion:Vitexinhasaprotectiveeffectonacutekidneyinjuryinducedbysepsisinrats,anditsmechanismisrelatedtoup-regulationofPGC-1αexpression,promotionofmitochondrialbiosynthesisandreductionofmitochondrialoxidativestressdamage.【Keywords】vitexin;sepsis;acuteKeywords:Vitexin,Sepsis,Acutekidneyinjury;
mitochondrial,Mitochondrialbiosynthesis;oxidative,Oxidativestress脓毒症(Sepsis)是指由细菌等病原微生物感染所引起机体的全身性炎症反应,进而造成机体多器官功能障碍,其中急性肾损伤(AcuteKidneyInjurykidneyinjury,AKI)就是脓毒症的常见并发症之一[1]。当AKI发生时,患者将会出现尿量减少,尿素氮、血清肌酐水平明显升高等症状,严重时还会导致肾功能衰竭[2]。研究发现,脓毒症致AKI发生的主要影响部位是肾小管,而肾小管上皮细胞富含线粒体,故肾小管线粒体功能障碍是AKI发生发展的重要标志[3]。线粒体是动物细胞中负责细胞能量代谢、细胞氧化还原/钙稳态和调节细胞凋亡的重要细胞器[4]。线粒体的结构一旦发生病变,ATP的合成功能将会受到影响,也会进一步导致肾小管上皮细胞出现凋亡[5]。过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(peroxisomePeroxisomeproliferatoractivatedreceptorgammacoactivator1α,PGC-1α)在线粒体的生物合成过程中其中重要的调控作用,其激活后可通过调控下游核呼吸因子1和2(NRF-1和NFRF-2),促进线粒体转录因子A(TFAM)的转录与表达,进而增强线粒体的生物合成,、减少线粒体氧化应激损伤,、改善线粒体功能障碍[6]。牡荆苷(Vitexin)是一种黄酮苷类化合物,广泛分布于自然界植物中,具有抗氧化、抗癌、降压、抗炎和解痉等多种药理作用[7]。研究显示,牡荆苷通过调节线粒体动力学失衡引起的线粒体功能障碍,减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤[8];Yang等[9]研研究显示,牡荆苷通过Epac1-Rap1信号调节线粒体功能障碍减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤。然而,牡荆苷是否可通过介导PGC-1α调控线粒体功能改善脓毒症致AKI目前尚不明确。因此,本研究通过构建大鼠脓毒症致AKI模型,探讨牡荆苷对脓毒症致AKI的作用机制,为临床治疗脓毒症致AKI提供参考依据。1材料与方法1.1实验动物、试剂和仪器70只健康雄性SPF级SD大鼠,8周龄,体质量180~~220g,购自上海斯莱克实验动物有限公司,动物生产许可证号:SCXK(沪)2017-0005。饲养温度22~~24℃,相对湿度为45%~%~60%,昼夜12h交替饲养3d3天,自由饮水和摄食。动物伦理审批号:CSSDSYY-LLSC-KYXM-2022-5-69;牡荆苷购自成都普思生物科技股份有限公司,批号:20210428;中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1(KIM-1)的ELISA试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司;SR-18292-PGC-1α抑制剂购自美国MedChemExpress公司;HE染色试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司;丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒均购自北京索莱宝科技有限公司;InvitrogenTRIzol试剂购自美国ThermoFisher公司;逆转录试剂盒购自日本TaKaRa公司;PGC-1α、NRF-1、TFAM和GAPDH抗体购自美国CST公司;HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和BCA蛋白浓度测定试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司;ECL显影试剂盒购自美国GE公司;高速冷冻离心机购自德国Eppendorf公司;石蜡切片机购自德国Leica公司;荧光定量扩增PCR仪器购自美国ABI公司;全自动蛋白电泳仪购自美国Bio-Rad公司。1.2动物模型制备及分组采用盲肠结扎穿刺法(CLP)构建大鼠脓毒症模型[10],即大鼠术前12h禁食,正常供水,采用腹腔注射10%水合氯醛0.3mL/·100g-1进行麻醉,对腹部皮肤进行常规消毒后划取一个长约2cm的切口,逐层打开腹腔,分离盲肠并于肠远端20mm处用3-0丝线结扎。取20mL针头于结扎线下5mm处贯穿盲肠1次,然后放置一条宽约2mm的橡皮筋贯通盲肠以防针孔闭合。将术后的盲肠放回腹部并缝合切口。术后于背部皮下按5mL/·100g-1注射生理盐水补充体液,整个手术在10min内完成,术后自由进食饮水。术后6~~12h,大鼠出现呼吸急促、寒战、高热、尿少、萎靡少动等情况表明造模成功[11]。同时,术后24h内监控造模成功大鼠脑电图变化,排除脑电图异常大鼠,以确保无脓毒症脑病的发生。将造模成功的大鼠随机分为模型组(Sep组)、牡荆苷低剂量组(Vit-L组)、牡荆苷高剂量组(Vit-H组)和高剂量牡荆苷+PGC-1α特异性抑制剂组(Vit-H+SR-18292组),另设置假手术组(sham组),每组10只。根据前期急性毒性试验确定半数致死量(LD50)值,再按照LD50的1/50~~1/20的剂量进行摸索,确定Vit-L组、Vit-H组大鼠分别给予腹腔注射7.5mg/·kg-1、30mg/·kg-1牡荆苷;Vit-H+SR-18292组大鼠在腹腔注射30mg/·kg-1牡荆苷后,再注射45mg/·kg-1SR-18292;sham组和Sep组给予注射等量的生理盐水。,每天1次,连续3天。1.3ElisaELISA检测SCrScr,BUN,NGAL及KIM-1取各组大鼠静脉血5mL,3000r/·min-1离心10min,取上清,根据ELISA试剂盒操作说明检测大鼠血清中血肌酐(SCrScr)和血尿素氮(BUN)及中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子1(KIM-1)。1.4HE染色观察肾组织病理学变化取适量的肾组织用4%多聚甲醛固定48h,将固定好的组织经过脱水、透明、浸蜡等过程后制成石蜡切片;二甲苯脱蜡10min;无水乙醇洗去二甲苯5min并重复1次;95%,80%%乙醇各脱水l0min,自来水洗lmin;苏木素染色4min,自来水洗2min;1%盐酸酒精分化20s,自来水洗2min;1%稀氨水返蓝30s30s;伊红染色90s90s;80%,95%乙醇各脱水10s10s,无水乙醇脱水5min;二甲苯透明10min并重复1次;中性树胶封片。在光学显微镜下观察肾组织病理学变化。1.5肾脏组织中MDA及SOD活性大鼠处死后,用预冷的PBS将肾脏组织冲洗干净,在冰浴条件下剪碎后进行匀浆,收集匀浆液于4℃,4000℃,4000r/·min-1条件下离心15min,取离心上清,按试剂盒说明书分别检测MDA和SOD含量。1.6qRT-PCR法检测肾组织线粒体DNA(mtDNA)的拷贝数取肾脏组织8.0~~8.5g,在冰浴条件下将组织剪碎并匀浆,12000r/·min-1离心10min收集上清,按上述条件对上清再次进行离心,沉淀即为粗线粒体。向沉淀物中加入1mLTRIzol和0.2mL氯仿,剧烈振荡15秒s,室温放置3分钟min后使样品分层,移去上层水相,加0.3mL无水乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA,室温放置3分钟3min,4℃12000r/·min-1离心5分钟min,移去上清,用含10%乙醇的0.1M1mol·L-1柠檬酸钠洗涤DNA沉淀,每用1mL1mLTRIzol加入1mL柠檬酸钠,室温放置30分钟min,4℃℃12000r/·min-1离心5分钟min,弃上清,重复一1次,用75%乙醇再洗一遍DNA沉淀,室温放置晾干DNA10分钟min,用8mMmmol·L-1NaOH溶解DNA。参照qRT-PCR试剂盒说明书反应体系进行qRT-PCR反应。反应体系为50μL,其中SYBRGreen超混合液25μL,10倍浓缩PCR缓冲液(含2mmol/LMg2+)5μL,dNTP(每种dNTP2.5mmol5mmol/L)4μL,上游、下游引物(10mmol/L)1μL,DNA模板1μL,加ddH2O补足至50μL。qRT-PCR引物由金斯瑞生物科技有限公司设计并合成,mtDNA片段上游引物:5'5’-CACTTTCCACACAGACATCA-3'3’,mtDNA片段下游引物:5'5’-TGGTTAGGCTGGTGTTAGGG-3'3’,GAPDH上游引物:5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3',5’-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3’,下游引物:5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3',5’-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’,循环条件:95℃30s,55℃30s、72℃30s循环,于72℃充分延伸10min。反应结束后,PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳,验证扩增产物。以GAPDH作为内参,采用2-ΔΔCt法进行计算。根据标准曲线确定mtDNA拷贝数。1.7Westernblot检测肾组织中PGC-1α、NRF-1、TFAM蛋白表达水平称取大鼠肾组织50mg,加入1mL1mL含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液,采用均浆器匀浆5min后,4℃、12000r/·min-1条件下离心15min收集上清,采用BCA试剂盒对上清中的蛋白浓度进行测定。根据测定的蛋白含量,取相应的样品与缓冲液混合孵育,之后吸取等量的蛋白样品进行凝胶电泳,以半干转膜法转将蛋白转至PVDF膜。经BSA封闭后加入兔抗大鼠PGC-1α(1:1000),NRF-1(1:1000)、TFAM(1:1000)与GAPDH抗体(1:1000)在4℃孵育过夜,以GAPDH作为内参,TBST洗涤3次,在室温条件下加入HRP标记山羊抗兔IgG二抗(1:10000)并孵育2h,ECL显影,采用ImageJ软件对蛋白质印记实验结果进行半定量分析。1.8统计学分析采用SPSS20.0统计学软件对实验数据进行分析,符合正态分布的计量数据以均数±均值±标准差(±x±s)表示,多组间样本数据比较采用单因素方差分析,两两样本数据之间的比较采用SNK-q检验。以P<<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1HE染色HE染色结果显示,sham组大鼠肾组织结构完整,无充血以及炎性细胞浸润;Sep组大鼠肾小球大小不一,充血明显,肾小管上皮细胞间有明显组织间隙和水肿,肾小管周围有大量炎性细胞浸润;Vit-H组大鼠肾组织中肾小管肿胀及空泡变性均有效得到改善,炎性细胞浸润及组织间隙水肿得到有效缓解;Vit-L组大鼠肾组织损伤较Sep组无明显改善。Vit-H+SR-18292组大鼠肾组织损伤较Vit-H组又显著加重。见图1。ABCABCDEA:sham组大鼠肾组织未见异常;B:Sep组大鼠肾小管上皮细胞间有组织间隙(黑色箭头)和空泡(蓝色箭头);C:Vit-L组肾小管上皮细胞间有组织间隙(黑色箭头)和空泡(蓝色箭头);D:Vit-H组肾小管上皮细胞间少量组织间隙和水肿(黑色箭头);E:Vit-H+SR-18292组大鼠肾小管上皮细胞间有组织间隙(黑色箭头)和空泡(蓝色箭头)ABCABCDE图1肾脏组织HE染色(×200)Fig.1HEstainingofkidneytissue(×200)注:A:sham组大鼠肾组织未见异常;B:Sep组大鼠肾小管上皮细胞间有组织间隙(黑色箭头)和空泡(蓝色箭头);C:Vit-L组肾小管上皮细胞间有组织间隙(黑色箭头)和空泡(蓝色箭头);D:Vit-H组肾小管上皮细胞间少量组织间隙和水肿(黑色箭头);E:Vit-H+SR-18292组大鼠肾小管上皮细胞间有组织间隙(黑色箭头)和空泡(蓝色箭头)。2.2各组大鼠血清Scr、BUN、NGAL和KIM-1含量与sham组比较,Sep组大鼠血清中Scr、BUN、NGAL和KIM-1含量显著升高(P<<0.05);与Sep组比较,Vit-H组大鼠血清中Scr、BUN、NGAL和KIM-1含量显著降低(P<<0.05),Vit-L组大鼠上述各指标无显著差异(P>>0.05);与Vit-H组比较,Vit-H+SR-18292组大鼠血清中Scr、BUN、NGAL和KIM-1含量显著升高(P<<0.05)。见表1。表1各组大鼠血清Scr、BUN、NGAL和KIM-1含量的比较(x±s,n=10)Tab.1ComparisonofthecontentsofScr,Bun,NgalandKIM-1inserumofratsineachgroup(±s,n=10)组别Scr(umol/μmol·L-1)BUN(mmol/·L-1)NGAL(ng/·L-1)KIM-1(ng/·L-1)Sham组5.10±±0.372.18±±0.634.58±±0.2125.24±±0.15Sep组22.92±±0.95a11.85±±1.27a7.07±±0.33a93.88±±1.93aVit-L组20.96±±1.5110.44±±1.426.85±±0.3087.59±±3.74Vit-H组6.60±±0.72b3.08±±0.44b4.71±±0.15b37.01±±1.09bVit-H+SR-18292组17.55±±1.35c8.94±±0.27c6.54±±0.19c71.40±±1.61c注:与sham组比较,aP<<0.05;与Sep组比较,bP<<0.05;与Vit-H组比较,cP<<0.05.。2.3各组大鼠肾脏组织中MDA及SOD活性与sham组比较,Sep组大鼠肾组织中MDA含量显著升高(P<<0.05),SOD活性显著降低(P<<0.05);与Sep组比较,Vit-H组大鼠肾组织中MDA含量显著降低(P<<0.05),SOD活性显著升高(P<<0.05),Vit-L组大鼠肾组织中MDA含量及SOD活性无显著差异(P>>0.05);与Vit-H组比较,Vit-H+SR-18292组大鼠肾组织中MDA含量显著升高(P<<0.05),SOD活性显著降低(P<<0.05)。见表2。表2各组大鼠肾脏组织中MDA含量及SOD活性比较(x±s,n=10)Tab.2comparisonofMDAcontentandSODactivityinrenaltissuesofratsineachgroup(±s,n=10)组别MDA(U/·mg-1)SOD(mmol/·mg-1)Sham组4.18±±0.1632.08±±1.82Sep组17.95±±0.43a9.55±±0.59aVit-L组16.93±±0.8710.13±±1.03Vit-H组5.22±±0.39b31.66±±1.68bVit-H+SR-18292组12.32±±0.33c19.44±±1.06c注:与sham组比较,aP<<0.05;与Sep组比较,bP<<0.05;与Vit-H组比较,cP<<0.05.。2.4各组大鼠肾组织线粒体DNA(mtDNA)的拷贝数与sham组比较,Sep组大鼠肾组织mtDNA拷贝数显著降低(P<<0.05);与Sep组比较,Vit-H组大鼠肾组织mtDNA拷贝数显著升高(P<<0.05),Vit-L组大鼠肾组织mtDNA拷贝数无显著差异(P>>0.05);与Vit-H组比较,Vit-H+SR-18292组大鼠肾组织mtDNA拷贝数显著降低(P<<0.05)。见图2。图2各组大鼠肾组织mtDNA的拷贝数注:与sham组比较,aP<<0.05;与Sep组比较,bP<<0.05;与Vit-H组比较,cP<<0.05.。图2各组大鼠肾组织mtDNA的拷贝数Fig.2ThemtDNAcopynumberofkidneytissueineachgroup2.5各组大鼠肾组织中PGC-1α、NRF-1、TFAM蛋白表达水平与sham组比较,Sep组大鼠肾组织中PGC-1α、NRF-1与TFAM等蛋白表达水平显著降低(P<<0.05);与Sep组比较,Vit-H组大鼠肾组织中PGC-1α、NRF-1与TFAM等蛋白表达水平显著升高(P<<0.05),Vit-L组无显著差异(P>>0.05);与Vit-H组比较,Vit-H+SR-18292组大鼠肾组织PGC-1α、NRF-1与TFAM等蛋白表达水平显著降低(P<<0.05)。见图3。注:与sham组比较,aP<0.05;与Sep组比较,bP<0.05;与Vit-H组比较,cP<0.05.图3各组大鼠肾组织中PGC-1α、NRF-1、TFAM蛋白表达水平比较Fig.3ComparisonofPGC-1α,NRF-1,TFAMproteinexpressioninrenaltissuesofratsineachgroup注:与sham组比较,aP<0.05;与Sep组比较,bP<0.05;与Vit-H组比较,cP<0.05。3讨论脓毒症是重症监护病房(ICU)中AKI的最常见病因,高达60%的脓毒症患者会出现AKI,AKI的发生也会导致其他器官衰竭从而增加死亡率[12]。目前,临床多采用静脉注射抗生素及利尿剂的方式对AKI进行治疗,但并不能有效地降低患者的死亡率。因此,探索新的治疗药物,对缓解患者肾损伤保护肾功能具有重要意义。许多血液和尿液生物标志物已被证明可以预测AKI的发生,例如血浆或尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、尿肾损伤分子1(KIM-1)、金属蛋白酶-2(TIMP-2)和胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)的尿组织抑制剂[13,-14]。Scr与BUN可作为肾功能评价的标志物,Scr可直接反映早期肾损伤程度,而BUN可间接反映肾脏的排泄能力[15]。本研究中,造模72h后大鼠血清中Scr、BUN、NGAL和KIM-I水平显著升高,肾组织损伤明显,说明脓毒症大鼠表现出急性肾损伤。采用30mg/·kg-1牡荆苷干预后脓毒症大鼠血清中Scr、BUN、NGAL及KIM-1含量显著降低,肾组织损伤显著改善,说明牡荆苷干预对大鼠脓毒症致急性肾损伤具有保护作用。线粒体是细胞内进行能量代谢和转换的重要细胞器,参与调节细胞内氧化应激生理过程[16]。多项研究显示,机体产生的过多的氧自由基可以破坏线粒体膜结构的完整性,造成线粒体功能异常,诱导组织细胞凋亡[17,-18]。SOD在维护机体内环境稳态方面发挥重要作用,而MDA是体内脂质氧化的重要产物,过量MDA的产生会加剧细胞膜的损伤[19]。本研究显示,模型组大鼠在经30mg/·kg-1牡荆苷干预后肾组织中MDA水平降低,SOD活性增强,表明牡荆苷可降低脓毒症致AKI大鼠肾组织中氧化应激水平,减小对肾组织的损伤。王治宝等[20]研究也发现,牡荆苷具有提高小鼠血清及组织SOD、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性和降低小鼠组织MDA含量的作用,提示牡荆苷可能通过降低肾脏组织中氧化应激水平而改善脓毒症大鼠AKI。肾脏是人体内线粒体含量第二丰富的器官,线粒体功能障碍与肾功能异常显著相关[21]。ElisabethC与参考文献不一致,请核实并修改。(需要引用源文献)研究得出脓毒症与脓毒症-AKI患者肾脏线粒体DNA损伤和线粒体肿块减少有关[22]。PGC-1α是线粒体生物合成过程中关键的调控因子,其通过与NRFs结合,作用于线粒体转录因子TFAM的启动子,进而促进mtDNA的转录和复制,刺激线粒体增殖,减少线粒体氧化应激损伤,改善线粒体功能障碍[23]。本研究结果显示,Sep组大鼠肾脏组织中mtDNA拷贝数及PGC-1α、NRF-1和TFAM蛋白表达水平显著降低,表明脓毒症致AKI大鼠肾组织中线粒体功能异常,而模型组大鼠经牡荆苷干预后肾组织中mtDNA拷贝数及PGC-1α、NRF-1和TFAM蛋白表达水平显著增加。SR-18292是一种PGC-1α的抑制剂,它可以促进PGC-1α乙酰化,抑制糖异生基因的表达。当Vit-H组大鼠经SR-18292干预后PGC-1α、NRF-1和TFAM蛋白表达水平高于Sep组和Vit-L组,而与sham组无显著差异,说明了牡荆苷的作用靶点可能非单一的PGC-1α。研究表明,牡荆苷可以通过调控Nrf2/ARE通路来减轻急性脑缺血再灌注大鼠氧化应激反应所致的损伤[24]。牡荆苷还可通过抑制Bax的过度表达、调控凋亡信号通路,对因大脑缺血缺氧所造成的神经损伤可起到保护作用[25]。与参考文献不一致,请核实并修改。(需要引用源文献)综上所述,牡荆苷可呈剂量依赖性降低脓毒症致AKI大鼠的NGAL,、KIM-I,、Scr及BUN表达水平,增强SOD活性,降低MDA水平,降低肾脏组织中氧化应激水平而改善脓毒症大鼠AKI,增加肾组织中PGC-1α、NRF-1及TFAM蛋白表达水平,促进线粒体生物合成,进而改善肾损伤。本研究尚处于初步研究阶段,关于脓毒症AKI的发病机制及牡荆苷对急性肾损伤的保护机制还待进一步研究。参考文献:车倩,肖东.脓毒症相关急性肾损伤的研究进展[J]..新疆医学,2021,51(3):341-344.RONCORoncoC,GRAMMATICOPOULOSGrammaticopoulosS,ROSNERRosnerM,etal.Oliguria,creatinineandotherbiomarkersofacutekidneyinjury[J]..ContribNephrol,2010,164:118-127.[3]HaLLHallAM,SCHUHSchuhCD.Mitochondriaastherapeutictargetsinacutekidneyinjury[J]..CurrOpinNephrolHypertens,2016,25(4):355-362.[4]WANGWangSF,CHENChenS,TSENGTsengLM,etal.Roleofthemitochondrialstressresponseinhumancancerprogression[J]..ExpBiolMed,2020,245(10):861-878.[5]SCHIFFERTA,GUSTAFSSONSchifferTA,GustafssonH,PALMPalmF.Kidneyoutermedullamitoch-ondriamitochondriaaremoreefficientcomparedtowithcortexmitochondriaasastrategytosustainATPproductioninasuboptimalenvironment[J]..AmJPhysiolRenalPhysiol,2018,315(3):F677-F681.[6]王慧婷,,张岩晨,,徐梦怡,,等.能量代谢关键调控因子PGC-1α的研究进展[J]..生理学报,2020,72(6):804-816.[7]BABAEIBabaeiF,MOAFIZADMoafizadA,DARVISHVANDDarvishvandZ,etal.Reviewoftheeffectsofvitexininoxidativestress-relateddiseases[J]..FoodSciNutr,2020,8(6):2569-2580.[8]XUEXueW,WANGWangX,TANGTangH,etal.Vitexinattenuatesmyocardialischemia/reperfusioninjuryinratsbyregulatingmitochondrialdysfunctioninducedbymitochondrialdynamicsimbalance[J]..BiomedPharmacother,2020,124:109849.[9]YANGYangH,XUEH,XueW,DINGDingCJ,etal.Vitexinmitigatesmyocardialischemia/reperfusioninjuryinratsbyregulatingmitochondrialdysfunctionviaEpac1-Rap1signaling[J]..OxidMedCellLongev,2021,(11):1-172021:9921982.[10]叶艺峰,胡淑辉,陈彦青,等.右美托咪定对脓毒症大鼠急性肾损伤的影响:与肾组织HMGB1mRNA的关系[J]..中华麻醉学杂志,2018,38(6):763-765.[11]周明明,蒋正英,李蕊,等.白藜芦醇对脓毒血症所诱导大鼠心肌损伤的保护作用及其机制研究[J]..免疫学杂志,2018,34(12):1053-1058.[12]刘可心,杨定位.急性肾损伤的流行病学研究现状[J]..中华临床医师杂志,(电子版),2019,13(3):221-224.[13]VAARAVaaraS.T,BHATRAJUBhatrajuP.K,STANSKIStanskiN.L,etal.Subphenotypesinacutekidneyinjury:aAnarrativereview[J]..CritCare,2022,26:(1):251./10.1186/s13054-022-04121-x[14]TAOTaoX,CHENL,ChenC,LUOB,LuoWH,etal.CombiningrenalcellarrestanddamagebiomarkerstopredictprogressiveAKIinpatientwithsepsis[J]..BMCNephrol,2021,22(1):415.[15]王敏佳,徐靓.脓毒症急性肾损伤患者血清尿调节
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