凝聚胺交叉配血标准操作规程及偶氮检测.AZO检测

凝聚胺交叉配血标准操作规程一、目的：为规范交叉配血试验的技术操作，保证临床输血安全有效，特制定本规程。二、适用范围适用于输血科进行交叉配血试验三、职责输血科技术人员负责交叉配血试验。四、测定原理：红细胞表面带有大量的负电荷，凝聚胺是一种高效价阳离子季胺盐多聚物，溶解后产生较多正电荷，可以中和红细胞表面的唾液酸带有的负电荷，使红细胞之间的距离减少。若是未被抗体致敏的红细胞，加入悬浮液它具有中和凝聚胺的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体所致敏，则会被凝聚胺凝集，凝块就不会散开，试验结果为阳性。五、试剂及材料(一)聚凝胺试剂盒(合肥天一生物技术研究所)成分：低离子介质溶液、聚凝胺溶液、重悬液、阴性及阳性对照液；保存条件：2~8℃贮存2年，试剂盒打开使用后可置于室温(二)材料：玻璃试管、微量移液器、离心机、载玻片、显微镜等六、标本要求：(一)抽取受血者抗凝（抗凝剂为EDTA.K2）静脉血2-3ml（注意核对病人信息）,在3000r/min条件下离心5分钟备用。(二)标本保存：血液样本必须密封，2~8℃保存7天。(三)用于交叉配血必须是2~8℃保存3天以内的标本。七、操作程序：(一)将受血者红细胞配成3%盐水悬液，鉴定ABO血型及Rh血型。(二)将供血者血样配制3%红细胞悬液，鉴定ABO血型及Rh血型。(三)取洁净小试管2支，1支标明受血者血清（PS）+供血者细胞（DC）或“主侧”；另1支标明供血者血清（DS）+受血者细胞(PC)或“次侧”。（四）主侧管：受血者血清100ul+供血者红细胞悬液50ul。次侧管：供血者血清100ul+受血者红细胞悬液50ul。各加低离子介质溶液0.6ml，混匀后静置1分钟，再各加聚凝胺溶液2滴，静置15s。(五)混合均匀后，在1000g条件下离心15s，然后倒掉上清液。(六)轻轻侧动试管里的细胞扣，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。(七)最后加入重悬液2滴，轻轻转动试管混合，并同时观察结果，必要时在显微镜下观察结果。八、结果判定：(一)阴性：60秒内凝块散开，代表由聚凝胺溶液引起的非特异性凝集，配血结果相合。(二)阳性：60秒内凝块不散开，代表红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。(三)如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。九、注意事项：(一)若病人血浆（血清）含肝素，须多加双倍量的聚凝胺溶液以中和肝素。(二)冬季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集反应，影响结果判断。(三)加入血清量应严格按照操作方法，多加血清会提高离子强度，降低致敏效果。(四)抗原抗体比例适当。偶氮检测，AZO检测东莞市诺特检测机构，专业第三方检测机构.更多检测项目请咨询：郭生N14362-1：2012欧盟偶氮测试新标准检测服务含有禁用偶氮染料的纺织品在与人体长期接触的过程中，染料可能被皮肤吸收，并在人体内扩散，这些染料在人体正常代谢所发生的生化反应条件下，可能发生还原反应分解出致癌芳香胺，并经过活化作用改变人体的DNA结构，引起人体病变或诱发癌症。检测纺织品中是否含有可还原致癌芳香胺的偶氮染料，是目前纺织品服装国际贸易中最基本的安全技术要求。欧盟委员会已于2002年颁布第2002/61/EC号指令，禁止使用一类含有“芳族胺”（aromaticamines）的偶氮染料。欧洲标准化委员会制定了如下标准：

ENl4362-1：2003纺织品——检验由偶氮染料释出的芳族胺--第一部分：在无须提取的情况下测试产品是否含有某类偶氮染料；

ENl4362-2：2003纺织品——检验由偶氮染料释出的芳族胺--第二部分：提取纤维以测试产品是否含有某类偶氮染料。欧盟各国必须采用这些标准检验进口纺织品、皮革产品以及含有纺织品和皮革产品的其他产品（如玩具）是否含有被禁的偶氮染料。新的欧盟偶氮染料检测方法EN14362-1:2012纺织品——关于偶氮染料的特定芳香胺的检测方法-第一部分将于2012年8月生效，届时将撤回已实施8年的EN14362:2003。EN14362-1:2012整合了原EN14362-2003的part1和part2，并提供了更清晰的样品准备指引，修改了部分测试程序。与上一版相比的改动如下：1.新旧标准主要的区别表1

新旧标准的区别

新标准旧标准标准号EN14362-1:2012EN14362-1:2003EN14362-2:2003方法选择依据纤维的种类和分散染料是否使用纤维的种类方法选择直接法萃取法混合法直接法萃取法未使用分散染料染色的天然纤维和人造纤维使用分散染料染色的纺织品纺织品使用氯苯萃取后未完全褪色天然纤维人造纤维复合人造纤维具体如下：新标准将原EN14362-2003中的直接法和萃取法整合在一个标准中，即EN14362-1:2012。对于测试方法的选择，旧标准是依据纤维的种类进行选择，新标准则基于纤维的性质及分散染料是否使用，即只有用到分散染料的纺织品，才用萃取法。实际情况中一些合成材料，氯苯萃取后是不完全褪色的，新标准则对此种情况，采用混合分析方法。关于新标准中混合法：先对样品进行萃取，把萃取后的样品用适当溶剂（如：正戊烷或MTBE）冲洗并使其干燥后剪成小碎片，加入到用甲醇溶解的萃取液中一起还原裂解。2.关于取样：若产品某些部分（如标签，缝纫线，小尺寸刺绣）的质量达不到测试质量（1g），尽可能的收集相同部分。若总质量低于0.5g，这种材料被次要成分，具有很大不确定度。质量低于0.2g的样品不需要分析。印花可以连同底部一起称重，即印花不需要从基材中分离。白不表示颜色，故白色的样品不需要测试。3.颜色混测原则：允许最多三种颜色的混测，纺织品相同部位三混，相同种类纤维三混或纺织品相同工序的部分三混，每种颜色质量要求大致相等并使样品总质量为1g。如果混测结果介于5mg/kg~30mg/kg之间，则各颜色要分开测试，因为单独一种颜色测试样品的结果可能超过30mg/kg。4.测试方法的微调：新标准中规定，氯苯回流好后，萃取液需冷却到室温后，再从萃取装置中分离，其目的在于防止偶氮染料的损失。新标准应用直接法进行操作时，需先在样品加入甲醇，旧标准则无规定。新标准在过硅藻土柱前，需加入10%的NaOH溶液并用力振荡，其目的在于提高回收率，因为裂解的芳香胺在碱性条件下更稳定。新标准在过柱时，叔丁基甲醚的加入方式略有不同，叔丁基甲醚加入的次序是10，10，60，旧标准则是10，10，20，40。5.影响胺的检测和定量的原因新标准在条歀9.4中特别说明了影响胺的检测和定量的重要原因，若将叔丁基甲醚萃取液蒸干可能导致胺的流失，此外，若例行工作发生延迟，由于某些胺（如2,4-二氨基甲苯、2,4-二氨基苯甲醚）不稳定，会使得其无法被检出。6.4-氨基偶氮苯的确定：新标准在附录C规定了4-氨基偶氮苯的测试方法（EN14362-3：2012），4-氨基偶氮苯在EN14362-1：2012的实验条件下会分解成苯胺和1,4-苯二胺，但1,4-苯二胺的检出限和回收率不好，通常只能检出苯胺，因此，若有苯胺有检出，就需要测试4-氨基偶氮苯。7.各种纺织材料中使用染料的类型（附录D）新标准中提供了各种纺织材料中使用染料的类型（附录D），只有使用分散染料的纺织品需要进行萃取。并给出了判断样品是否使用分散染料的方法，如果分散染料在沸腾的氯苯中提取20min，萃取溶剂有颜色的，则说明样品使用了分散染料。8.不使用硅藻土进行液液萃取的程序（附录E）：新标准提供了一个不使用硅藻土进行液液萃取的方法并制定了详细的操作流程。但当萃取的结果在5mg/kg~100mg/kg之间的，需使用标准方法（硅藻土过柱进行液液萃取的方法）重新测试。9.特定芳香胺的检测方法（附录F）：新标准提供了一个从染料中直接检测芳香胺的方法。原理同直接法，但测试样品则是染料，测试方法中跳过了萃取过程，即在样品中加入甲醇，然后进行还原裂解，分离和浓缩，定性和定量，核查程序和评估。诺特检测作为国内知名的第三方检测机构，是国内领先的质量安全服务机构，及时关注法规更新信息和提供专业的测试服务，解读欧盟偶氮测试新标准EN14362-12012旨在为顾客提供专业、客观、全面的质量解决方案，提升其产品在全球的竞争力。欧盟纺织品中偶氮染料测试方法EN14362:2012欧盟纺织品中偶氮染料新测试方法（EN14362-1:2012）于2012年8月正式生效，另一部分纺织品中4-氨基偶氮苯的测试方法（EN14362-3:2012）也已发布，并将在2012年12月31日生效。偶氮染料可以分解成4-氨基偶氮苯，而EN14362-1:2012及之前的EN14362-1&2:2003的还原条件会将4-氨基偶氮苯进一步还原分解成苯胺和1,4-苯二胺。这两种芳香胺也可能来自于其它偶氮染料，因此对4-氨基偶氮苯的确认测试通常使用德国官方方法§64LFGBB82.02-9。EN14362-3:2012发布后，欧盟将拥有官方的纺织品中4-氨基偶氮苯测试方法。至此，欧盟官方对于纺织品中偶氮染料的检测方法已经完整，EN14362:2012包括以下部分：·EN14362-1:2012纺织品—来自偶氮染料的特定芳香胺的检测方法—第一部分：通过抽提和不抽提检测偶氮染料的使用。·EN14362-3:2012纺织品—来自偶氮染料的特定芳香胺的检测方法—第三部分：可能释放4-氨基偶氮苯的偶氮染料的检测。EN14362-1:2012整合了