细胞工程第6章胚胎工程

ICSI:Intracytoplasmicsperminjection

卵母细胞胞浆内单精子显微注射（ICSI）又称“第二代试管婴儿”，是在体外受精-胚胎移植基础上发展起来的显微受精技术，通过直接将精子注射入卵母细胞胞浆内，来达到助孕目的，在治疗男性不育症上有着十分美好的前景。

当前第1页\共有90页\编于星期四\21点ICSI当前第2页\共有90页\编于星期四\21点当前第3页\共有90页\编于星期四\21点ICSI的特点正常受精率高，多精受精率低精子浓度、形态对受精无影响当前第4页\共有90页\编于星期四\21点类似:着床前基因诊断(第三代)是从4-8细胞期胚胎中吸取1-2个卵裂球进行染色体和/或基因诊断，选择染色体和/或基因正常的胚胎移植回子宫腔。主要适用于遗传性疾病的种植前诊断，如果女方年龄较大（超过35岁）应进行筛查，选择染色体正常的胚胎移植。

当前第5页\共有90页\编于星期四\21点fluorescencein-situhybridization(FISH)

当前第6页\共有90页\编于星期四\21点PreimplantationGeneticDiagnosis(PGD)

当前第7页\共有90页\编于星期四\21点

第三代与第二代相近，只是要对卵裂球进行“胚胎种植前的遗传学诊断”，挑选出无遗传性疾病基因的胚胎移植入母体子宫，它适用于患有某种遗传性疾病的夫妻。当前第8页\共有90页\编于星期四\21点例如有一位母亲是血友病基因的携带者，她自己虽然不发病，但是，她的两个儿子都是血友病患者，接连不幸夭折。这位悲伤的母亲来到试管婴儿中心，要求给她做试管婴儿。医生考虑到她的情况，决定给她做“第三代”试管婴儿。当前第9页\共有90页\编于星期四\21点随后就是取卵、人工授精等等步骤。当受精卵分裂到4-8个细胞时，取出其中的一个细胞进行诊断：对于胚卵是XY型，将来能发育为男子的就淘汰了；而胚卵是XX型（即将来发育为女儿）的则进行移植。试验成功了，一个健康的女婴来到人间。按照遗传学法则，这个女婴虽然和她妈一样，也是血友病基因的携带者，但不会发病，将是一个“健康”的女孩。当前第10页\共有90页\编于星期四\21点

可见，“第三代”试管婴儿是优生的保证。它把妇科的产前诊断，提前到胚胎尚未着床时，这对于患有遗传病或有遗传疾病倾向的妇女、高龄孕妇是很有必要的。当前第11页\共有90页\编于星期四\21点PGD技术的难点胚胎细胞活检单细胞诊断技术当前第12页\共有90页\编于星期四\21点试管婴儿技术视频当前第13页\共有90页\编于星期四\21点4种质资源的低温冷冻保存精子冷冻卵母细胞冷冻胚胎冷冻睾丸、卵巢组织冷冻生殖干细胞冷冻PreservingYourAbilitytoHaveChildren——Cryobank

当前第14页\共有90页\编于星期四\21点哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

英国生物学家Polge（1949）意外发现的甘油在精子低温冷冻中有很好的保护作用，拉开了低温生物学新的一幕。人类生殖助孕、家畜繁殖和生物多样性保护

23年后，Whittingham(1972)用慢速冷冻方法首次成功地把8-细胞的小鼠胚胎在-196°C冷冻保存，而且由冻胚获得了后代。Rall和Fahy（1985）首次使用一种无冰晶的超快速的冷冻方法—玻璃化冷冻法，成功冷冻了小鼠胚胎。

当前第15页\共有90页\编于星期四\21点Howareembryosfrozen?

当前第16页\共有90页\编于星期四\21点acontrolledratefreezer

当前第17页\共有90页\编于星期四\21点精液冷冻1950年英国科学家Polge和Smith采用卵黄和甘油作保护剂，用干冰作冷源进行精液的冷冻，解冻后授精成功，开创了世界人工授精的新世代。如今，发达国家的全部奶牛和绝大多数肉牛采用冻精输精。精液冷冻保存成为最可靠的保存方法。当前第18页\共有90页\编于星期四\21点精液冷冻卵黄当前第19页\共有90页\编于星期四\21点器官冷冻??当前第20页\共有90页\编于星期四\21点器官冷冻保存???大鼠卵巢冷冻保存已经获得成功

Nature杂志报告了大鼠卵巢在－196℃液氮中冷冻保存，冻融后再移植的卵巢恢复了排卵和内分泌功能，并成功受孕。

睾丸组织冷冻已经获得成功器官冷冻仍处于实验研究阶段

人体器官如果能冷冻保存，移植手术就从容多了当前第21页\共有90页\编于星期四\21点人体冷冻更不现实

当前第22页\共有90页\编于星期四\21点冷冻保存当前第23页\共有90页\编于星期四\21点迈克尔·杰克逊曾将自己的精子存放于世界各地的精子银行里

当前第24页\共有90页\编于星期四\21点英国科学家用冷冻２１年的精子育出健康男婴

长期冷冻的精子仍具有很强的活力，这将为那些接受长期癌症治疗、但又担心会丧失生育能力的年轻人带来希望。

当前第25页\共有90页\编于星期四\21点25年前，这名男孩的父亲当时只有17岁，但不幸患上睾丸癌。治疗医生告诉他，癌症治疗的结果很可能会导致他不能生育。于是建议他，取出自己的一些精子进行冷冻保存，如果他治疗后真的不能生育，可以让他的妻子接受人工授精。于是，这名年轻男子取出了自己的一些精子，分装在放有液氮的5个小瓶子里，5个小瓶子被冷冻在医院的冰柜里。

冷冻21年的精子育出健康男婴当前第26页\共有90页\编于星期四\21点

到1992年，这个已经30岁的男子痊愈出院。但他已经在治疗过程中失去了生育能力。这名男子的妻子立即想起了丈夫在治疗前存放在医院的5瓶精子。但是，也许是老天在开玩笑。这对夫妇努力了3年，解冻了其中4瓶精子，丈夫的精子还是不能跟妻子的卵子结合。2000，他们鼓足勇气，在医生的帮助下，将最后1瓶精子放入了试管。丈夫的精子与妻子的卵子终于顺利结合了，而且长成了胚胎。这个来之不易的胚胎被医生小心翼翼地植入妻子的子宫，2002年，该男子的妻子生下了一个7斤多重的健康男婴。

当前第27页\共有90页\编于星期四\21点5性别控制性别控制的意义：1）遗传疾病的预防2）提高生产效率性别控制的途径：1）胚胎性别鉴定2）X、Y-精子分选当前第28页\共有90页\编于星期四\21点动物的性别决定性染色体与性别决定Y染色体性别决定区基因SRY环境对性别的影响当前第29页\共有90页\编于星期四\21点Y染色体性别决定区基因SRY睾丸决定因子（testisdeterminingfacter,TDF)是哺乳动物的Ｙ染色体上的一个性别的遗传控制因子。Y染色体性别决定区基因（sexdeterminingregionoftheY,SRY）性别决定是涉及多个基因的级联调控过程当前第30页\共有90页\编于星期四\21点当前第31页\共有90页\编于星期四\21点SRY尽管胚胎一形成，其性别实际上就决定了，但是此时胚胎的性别还看不出来，其性腺是原始的性腺，在胚胎6－8周后还要经过性分化过程。造一个人需要3万个基因，决定一个男性却只有一个基因——在Y染色体上的性别决定基因SRY。SRY在胚胎的性分化过程中刺激原始性腺向睾丸方向发育，然后这个最初的睾丸就开始分泌雄激素，刺激男性胚胎整个向男性化的方向发展当前第32页\共有90页\编于星期四\21点SRY如果没有SRY这个基因刺激的话，原始性腺就会自然而然地向卵巢方向发育，然后卵巢分泌雌激素，刺激女性胚胎开始发育女性的性征。正是性腺产生的激素造就了我们看到的男女两性之间的差别。

当前第33页\共有90页\编于星期四\21点圣经中的描述完全弄颠倒了。不是女人来自男人的肋骨，而是正好相反。如果真有什么亚当的话，那他也是来自夏娃的肋骨。

当前第34页\共有90页\编于星期四\21点出问题了当前第35页\共有90页\编于星期四\21点同性恋

homosexuality

Gay/Lesbian是人性的一种自然流露

当前第36页\共有90页\编于星期四\21点性逆转公鸡下蛋黄鳝先雌后雄当前第37页\共有90页\编于星期四\21点哺乳动物性别控制的途径

1）胚胎性别鉴定(1)细胞学方法(2)生化微量分析法--→与X相关的酶(3)免疫学方法

a,细胞毒性分析法b,间接免疫荧光法c,胚囊形成抑制法(4)分子生物学方法

2）X、Y-精子分选当前第38页\共有90页\编于星期四\21点胚胎性别鉴定当前第39页\共有90页\编于星期四\21点胚胎性别鉴定当前第40页\共有90页\编于星期四\21点X、Y-精子分选Y精子的F小体精子的重量→沉降法,离心沉降法精子运动→电泳法精子的耐酸碱性→化学药品处理法精子表面H-Y抗原→免疫学分离法DNA含量差别→流式细胞分选法当前第41页\共有90页\编于星期四\21点X、Y-精子分选当前第42页\共有90页\编于星期四\21点流式细胞仪工作原理当前第43页\共有90页\编于星期四\21点当前第44页\共有90页\编于星期四\21点X、Y-精子分选当前第45页\共有90页\编于星期四\21点操作步骤当前第46页\共有90页\编于星期四\21点X、Y-精子分选当前第47页\共有90页\编于星期四\21点X、Y-精子分选当前第48页\共有90页\编于星期四\21点能否找到X、Y-精子表面特异抗原？当前第49页\共有90页\编于星期四\21点辅助生殖技术的伦理问题

EthicalIssueson

AssistedReproductiveTechnologies当前第50页\共有90页\编于星期四\21点人工授精的伦理学问题主要是异源授精问题，即使用的精子并非来源于丈夫。当前第51页\共有90页\编于星期四\21点潘朵拉盒子：谁是父亲？人工授精解决男性不育问题，如果男方不能受精或精子数量过低，需要求助于第三者捐赠精子，用他的精子给女方授精，称为供体人工授精(DI,donorinseminaiton)谁是孩子的父亲？是供精者，还是女方丈夫当前第52页\共有90页\编于星期四\21点异源授精出现的主要问题1、割裂了生儿育女与传统婚姻的纽带2、导致近亲繁殖的危险3、精子的商品化4、优生工程有喜有忧5、谁是孩子的父亲？当前第53页\共有90页\编于星期四\21点欧洲最多产捐精男子拥有46名儿女

当前第54页\共有90页\编于星期四\21点案例1：精子库的孩子(双盲操作)

R是个女孩，到22岁母亲去世时告诉她，她是用精子库的精子出生的。她就执意要寻找她的“生身”父亲。她找到了母亲的病历，知道精子提供者是妇科医生在医学院的同学。她购买了医学院的年鉴，在学生照片中找到了一位与她相象的男学生，认为他就是她的父亲。打听到这个现在已经50多岁的人在另一城市当神经科医生。她给他打电话，但对方一知道她干什么后就立即挂断电话。她一连打了三次，每次都得鼓起勇气。但都被回绝。最后一次，他还甚至要报警。当前第55页\共有90页\编于星期四\21点案例1(续)她向单位请了几天假，到那个城市去找他。找到了他家，见到他妻子。他妻子答应帮她，因为她太像她女儿了。但是他坚决不肯见她。她只好离开，一路上不断哭泣，觉得自己就出生在一个人多余的几滴精液中，在她的出生中没有人考虑过对孩子的感情。她对“精子库”非常痛恨。问题：对人工授精的孩子应不应该在他/她成年时告诉他/她真相？为什么？供精者是孩子的“生身父亲”吗？为什么？是否应该满足孩子寻找其供精父亲的愿望？根据以上讨论，是否应该在人工授精管理办法中增加些什么？当前第56页\共有90页\编于星期四\21点为了防止捐精者后代出现近亲婚配，卫生部规定一个捐精者最多使5名妇女受孕。并且要求供者与受者夫妇保持“互盲”、供者与实施人类辅助生殖技术的医务人员保持“互盲”、供者与后代保持“互盲”；同时供精者必须与精子库签订知情同意书，捐精者与所生的后代无任何权利和义务。

当前第57页\共有90页\编于星期四\21点案例2：代理母亲

N市一对医生夫妇S结婚12年没有孩子。女方患多发性硬化症，不能怀孕。1985年找到一代理母亲，她生过两个孩子，失业。由代理母亲生出孩子后将孩子给他们。1986年3月27日孩子M出生。代理母亲后悔。出院3天孩子交S夫妇抚养。S夫妇负担代理母亲怀孕期间一切费用，孩子交回时再给一笔费用。但不到24小时，代理母亲来要求将孩子带回住一周。S夫妇同意了。代理母亲拒绝接受费用，把孩子留了5周。S夫妇状告法院，带法警去领孩子。代理母亲带着孩子从楼上窗户逃走。S夫妇雇了侦探花了3个半月发现孩子在代理母亲的南方娘家。S将孩子夺回，由S夫妇监护。当前第58页\共有90页\编于星期四\21点案例2(续)法院花了6周时间审查此案，在M一周岁时做出判决：代理合同有效，中止代理母亲与M的关系。代理母亲不服上诉高等法院。1998年2月3日在M两岁时判决：(1)代理母亲不合法；(2)M已经由S夫妇监护两年，为孩子利益计，监护权判给他们；(3)代理母亲仍是M的合法母亲，可以每周有探视权。问题：M的母亲究竟是谁？亲子关系应该如何认定？孩子出生后引起的争夺孩子的纠纷应该如何解决？代理母亲商业化是否应该？为避免这种种纠纷，代理母亲是否应该全面禁止？

当前第59页\共有90页\编于星期四\21点代孕是否合法?

代孕是否合法是做试管婴儿中伦理争论焦点。在体外受精-胚胎移植中，接受移植的小胚胎、并生下足月婴儿的妇女，并不一定必须是婴儿的生物学母亲（提供卵子的人），一位代孕母亲就可以代替之。当前第60页\共有90页\编于星期四\21点

代孕母亲，顾名思义它是指出借或出租自己的子宫代替他人生育后代的妇女。代孕母亲根据契约可以提供自己的卵子，通过体外受精，然后再将小胚胎植入自己的子宫，或者是将他人在体外受精后发育的小胚胎移植入自己的子宫，经过足月怀胎后将所生下的孩子交给契约方收养，代孕母亲从此以后不再与孩子有任何往来，即代孕母亲不参与抚养孩子的活动。代孕是否合法?当前第61页\共有90页\编于星期四\21点

1985年，理查德和她的妻子贝弗利通过代理孕母生下一名女婴，取名特莎。可是事过不久，他们就分居了，为了争夺孩子的抚养权，他们闹上了法庭。与此同时，代理母亲玛丽也提出了孩子的监护权问题，理由是她不忍心看着孩子在一个破碎的家庭中受罪。1990年，就在法院裁决理查德享有对孩子的监护权几个小时之后，贝弗利在房间中开枪将其前夫打死，她本人也被判决11年有期徒刑。案例3当前第62页\共有90页\编于星期四\21点代孕广告

“不想生小孩、生不出小孩不用发愁，可以让人帮你代孕，解决你的生理难题。”代孕者规定必须在32岁以下，157厘米以上，身体健康，无遗传疾病基因，无流产历史，无深度近视，生过一个健康小孩的离异女性优先。严格拒绝风月场所从业女性和社会混混女。而且对代孕志愿者进行了“级别和收入划分”。当前第63页\共有90页\编于星期四\21点代孕者收入参考●初中学历，容貌较好者补偿6万●高中学历，容貌较好者补偿7万●大专学历，容貌较好者补偿9万●本科学历，容貌较好者补偿10万●各方面条件非常优越者补偿10万以上注：须测试智商。学历仅作参考，须与智商成正比当前第64页\共有90页\编于星期四\21点无风险包成功套餐

1.保证两年内孩子出生，违约全额退款。需求方只需要取卵取精及最后接小孩，其他事务均由本站打理！2.不论何种原因，怀孕期间的所有风险均由本站承担。例如：流产、难产、死亡等。3.总价99万，确保是男孩。首付9万元，怀孕3个月付20万，怀孕7个月付20万，最后交接付50万。4.要求：男方年龄小于60周岁，女方年龄小于40周岁。当前第65页\共有90页\编于星期四\21点最高产的代孕母亲

英国赫特福德郡41岁的妇女卡罗尔·霍洛克过去曾替9对不孕夫妇先后生下了12名“代孕宝宝”，成为英国“最高产的代孕母亲”。令人惊讶的是，尽管卡罗尔所生的“代孕宝宝”已经多得足够组建一支足球队，但她竟打算再当一次“代孕妈妈”。当前第66页\共有90页\编于星期四\21点

现在国内外都出现了一些身体状况良好的有钱贵妇，为了避免生育痛苦或者为了维持自己苗条体形而雇用穷人为其生育，你对这种现象有什么看法？代孕是否合法?当前第67页\共有90页\编于星期四\21点当前第68页\共有90页\编于星期四\21点加拿大女子为儿媳代孕生下孙女

儿子、儿媳、身怀六甲的婆婆、公公

当前第69页\共有90页\编于星期四\21点代孕是否合法?1、你对代孕母亲是怎么看的?你认为其是否合法？2、如果你认为合法，对于其中可能出现的问题，比如说孩子的归属问题，待孕母亲面临的危险问题，你认为该如何解决？

当前第70页\共有90页\编于星期四\21点胚胎的地位为什么要冷冻胚胎？每重复一次这样的手术，不但给受术的妇女带来又一次痛苦，而且也增加了本来就已经较高的医疗费用支出。因此，每次手术时都要尽可能多取几枚卵子，让它们在体外受精，这样不仅可以提高卵子受精的成功率，而且多余的胚胎可以很方便的用低温冷冻的方法长时间的保存起来，这样就可以保证当胚胎植入母体子宫失败后，却仍然还有冷冻的胚胎继续供移植。当前第71页\共有90页\编于星期四\21点1、冷冻的胚胎找不到委托人怎么办？该如何处理？2、男女分手冷冻胚胎怎么办？3、委托人意外死亡冷冻胚胎怎么办？冷冻胚胎的难题当前第72页\共有90页\编于星期四\21点外婆是妈妈1984年Karen因患病摘除子宫。她和丈夫非常想要孩子，想利用无血缘关系的代理母亲，但又担心孩子生出后她不肯交出。Karen的母亲48岁，愿意代劳。于是1987年1月Karen用激素刺激卵巢，排出11个卵，与丈夫精子在试管受精，2天后4个胚胎植入母亲子宫。1987年10月1日三胞胎出生。当前第73页\共有90页\编于星期四\21点一个孩子可以有五个父母！供精、供卵、体外受精、代理母亲技术相结合，一个孩子可以有五个父母！两个父亲：供精者、养育者三个母亲：供卵者、代理母亲(代孕者)、养育者谁应该是孩子的父母？当前第74页\共有90页\编于星期四\21点双胞胎互助治疗不育1947年双胞胎兄弟Terry和Tim出生。后来发现Tim没有睾丸。Tim29岁时结婚，靠激素可以过正常性生活，但不能生孩子。而Terry已经有3个孩子。医生建议将Terry一个睾丸移植到Tim阴囊内，以治疗Tim的不育。哥俩都同意。1977年5月17日手术很成功，Tim射出的精子数量正常。1980年3月25日Tim的妻子生出一个男孩。谁是孩子的父亲？当前第75页\共有90页\编于星期四\21点亲姐妹互助治疗不育浙江大学医学院将妹妹一个卵巢成功地移植到因病摘除卵巢的姐姐体内。姐姐没有孩子，打算用移植过来的妹妹卵巢排出的卵通过与丈夫同房生出一个孩子。那么，这个孩子的母亲应该是谁？他或她是否应该有两个母亲？如果万一以后姐妹不和，打起官司，孩子应该属谁？当前第76页\共有90页\编于星期四\21点用流产胎儿生殖细胞治疗不育1993年英国科学家宣布有可能使用取自流产胎儿的原始卵来治疗不育。这种卵也可以在体外受精，然后转移到缺乏有活力的卵的不育妇女；也可以直接将卵巢移植到妇女体内发育成熟，产生卵。用这种办法产生的孩子母亲是个流产胎儿。是否应该做？当前第77页\共有90页\编于星期四\21点用女尸卵治疗不育女性尸体为不育妇女提供另一个卵子来源。死后捐赠她们的卵巢供她人使用。很快有可能从尸体收集尚未成熟的卵，使之在体外成熟和受精，然后转移到不育妇女体内。用这种办法产生的孩子母亲是女尸。这是否应该做？当前第78页\共有90页\编于星期四\21点处女生子辅助生殖技术开始用于非不育者英国圣公会女牧师LesleyNorthrup身体健康，未婚，通过人工授精生出一个男孩，受到责难。但她错在哪里？通奸，婚外性行为？将男人排除在外？将上帝排除在外？当前第79页\共有90页\编于星期四\21点同性恋生子两个女同性恋者A和B。她们想要一个孩子，可以采取人工授精技术将供体的精子注射入A的子宫内，自然受孕，生出孩子；或用体外受精办法将供体精子和A的卵在试管受精，再将胚胎移植到B的子宫内。生出的孩子共同抚养。是否允许？当前第80页\共有90页\编于星期四\21点Herland&Hisland设想经过许多年后一群极端的女性主义者想要表示女性的独立，没有男性也行，广泛利用核转移技术创造许许多多女孩，建立了一个排斥男性的女儿国Herland。一群极端的男性主义者具有同样的理念，用同样技术，建立了一个排斥女性的男儿国Hisland。那时世界会怎样？这两个国家会老死不相往来？还是会和平共处？还是会打世界大战？当前第81页\共有90页\编于星期四\21点选择没有遗传病的孩子一对黑人夫妇均为镰形细胞症的携带者。他们想要一个健康孩子，但又由于宗教信仰关系不愿意在产前诊断后进行人工流产。医生将他们的精子和卵分别取出后进行体外受精。在获得8个细胞的胚胎后检查其细胞是否带有镰形细胞症的基因。发现有细胞完全健康时，将它植入妻子的子宫，结果分娩出一个完全健康的孩子。当前第82页\共有90页\编于星期四\21点定做基因经过改良的孩子人类一些疾病与基因有关，通过改变基因可以治疗疾病，称“基因治疗”。现在全世界有3000余病人在做基因治疗的试验。人类一些特征也与基因有关，能否通过在基因商店购买意中基因，改变