第一章革兰氏阳性球菌

第二篇细菌学各论夏春教授当前第1页\共有40页\编于星期五\21点陆承平主编当前第2页\共有40页\编于星期五\21点嗜水气单胞菌研究猪链球菌当前第3页\共有40页\编于星期五\21点自我介绍教授、博士、硕士生共25名。（已毕业研究生12人）当前第4页\共有40页\编于星期五\21点主要研究1主要组织相容性复合体I3动物基因工程干扰素4疾病诊断与防治技术基础研究应用基础2功能基因的克隆与鉴定(MHCI)（结合我国养殖业需要的应用基础）当前第5页\共有40页\编于星期五\21点策略连续性独立性科、属、种的特性重要致病性细菌：

培养特性、致病机制及诊断方法

鉴别诊断致病菌融会贯通、举一反三当前第6页\共有40页\编于星期五\21点第一章革兰氏阳性球菌微球菌科链球菌科消化菌科微球菌科葡萄球菌、链球菌科链球菌引起化脓性炎症。当前第7页\共有40页\编于星期五\21点在公共卫生及兽医临床上具有重要意义。当前第8页\共有40页\编于星期五\21点第一节葡萄球菌属

（Staphylococcus）广泛存在于自然界、空气、水、土壤、人及动物体表、天然孔道等多数是不致病的腐物寄生菌。葡萄球菌能引起皮肤黏膜、多种组织器官的化脓性炎症，是最常见的化脓性球菌，还可引起败血症，有的可引起食物中毒、毒性休克综合征等疾病。当前第9页\共有40页\编于星期五\21点一、生物学性状（一）形态与染色1，球形或略呈椭圆形，直径0.5-1.2μm,平均0.8μm2，典型的排列呈葡萄串状，在脓汁或液体培养基中生常呈双球或短链状3，无鞭毛、无芽胞，幼龄培养物可见荚膜，革兰氏染色阳性。4，青霉素等药物的影响下可诱导成L型。当前第10页\共有40页\编于星期五\21点1，营养要求不高，在普通基础培养基上生长良好。2，兼性厌氧或需氧。3，最适生长温度为37℃，pH为7.44，肉汤培养基37℃，24h呈均匀混浊生长，管底稍有沉淀。5，普通琼脂平板上形成圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明菌落，直径1-2mm。菌落起初呈白色，随后因种不同发展成金黄色、白色或柠檬色。6，部分菌株形成β溶血.（二）培养特性当前第11页\共有40页\编于星期五\21点触酶阳性、多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。致病菌株能分解甘露醇。(三)生化反应当前第12页\共有40页\编于星期五\21点1,葡萄球菌A蛋白(SPA)存在于细菌细胞壁的一种表面蛋白，90%以上的金黄色葡萄球菌菌株有此抗原。SPA是一种单链多肽，与胞壁肽聚糖共价结合.可与人、豚鼠、小鼠、犬、猪、貂等多种哺乳动物的IgGFc片段结合。2,多糖抗原

具有型特异性，存在于细胞壁。（四）抗原结构当前第13页\共有40页\编于星期五\21点根据色素、生化反应等不同，分为金黄色葡萄球菌(S.aureus)表皮葡萄球菌(S.epidermidis)腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)（五）分类与分型当前第14页\共有40页\编于星期五\21点分类─────────────────────────────────主要性状金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生性葡萄球菌─────────────────────────────────菌落色素金黄色白色白色或柠檬色血浆凝固酶+--甘露醇发酵+--溶血素+--耐热核酸酶活性+--磷壁酸核糖醇型+-（甘油型）+（兼有）磷壁酸甘油型-++嗜菌体分型多数能不能不能蛋白A（SPA）+--致病性强弱或无无─────────────────────────────────当前第15页\共有40页\编于星期五\21点凝固酶阳性菌株凝固酶阳性菌株3，分型（1）血清学分型玻片凝集4个组，30多个亚型（2）嗜菌体分型2，根据有无凝固酶当前第16页\共有40页\编于星期五\21点二、致病性葡萄球菌的毒力因子包括毒素、酶和荚膜、胞壁肽聚糖等。

1.葡萄球菌溶血素(staphylolysin)主要是α溶血素一种异质性蛋白质，不耐热，生物学活性广泛，对多种哺乳动物红细胞有溶血作用。对白细胞、血小板、肝细胞、成纤维细胞、血管平滑肌细胞等均有损伤作用。α溶血素是一种外毒素，具有良好的抗原性，经甲醛脱毒后可制成类毒素。2.杀白细胞素(leukocidin)称为Panton—Valentine(PV)杀白细胞素，只攻击中性粒细胞和巨噬细胞。当前第17页\共有40页\编于星期五\21点3.肠毒素(enterotoxin)按抗原性不同，分为A、B、C1、C2、C3、D、E和F8个血清型。除F型现改名为TSST-1，可引起TSS外，均可引起急性胃肠炎即呕吐为主要症状的食物中毒。4.表皮剥脱毒素(efoliativetoxin,exfoliatin),引起剥脱性皮炎。具有抗原性，可被甲醛脱毒成类毒素。有A、B两个血清型。5.毒素休克综合征毒素-1（TSST-1）6.凝固酶：血浆蛋白凝固7.溶纤维蛋白溶酶、耐热核酸酶、透明质酸酶、脂酶等.当前第18页\共有40页\编于星期五\21点1.标本的采集

不同病型采取不同的标本。化脓性病灶采取脓汁、渗出液，败血症采取血液，脑膜炎采取脑脊液；食物中毒则分别采集剩余的食物、呕吐物和粪便。2.直接涂片检查3.分离培养增菌培养、普通平板培养、血液琼脂平板、高盐甘露醇培养基4.鉴定

致病性葡萄球菌的鉴定主要根据产生凝固酶和耐热核酸酶；产生金黄色色素，有溶血性和发酵甘露醇也是致病株的参考指标。四、微生物学检查法当前第19页\共有40页\编于星期五\21点葡萄球菌肠毒素的检查

呕吐物、粪便或剩余食物作细菌分离鉴定的同时，接种至肉汤培养基，培养后取滤液注射至6-8周龄的幼猫。若在注射后4小时内发生呕吐、腹泻、体温升高或死亡等现象者，提示有毒素存在的可能。免疫学方法检测葡萄球菌肠毒素，ELISA法可检出ng水平。DNA基因探针检测是否为产肠毒素菌株。

当前第20页\共有40页\编于星期五\21点第二节链球菌属(streptococcus)

一、生物学性状1.形态与染色球形或卵圆形，直径0.6-1.0um。呈链状排列，链长短不一。无芽胞、无鞭毛。当前第21页\共有40页\编于星期五\21点2，培养特性大多数兼性厌氧，少数为专性厌氧。营养要求复杂，普通培养基上生长不良，需补充血液、血清、葡萄糖等。在血清肉汤中易形成长链，管底呈絮状沉淀。在血液琼脂平板上形成灰白色、表面光滑、边缘整齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落。不同菌株溶血不一。

当前第22页\共有40页\编于星期五\21点3.生化反应

分解葡萄糖，产酸不产气。有些链球菌可耐受65g/L的NaCl和胆汁。当前第23页\共有40页\编于星期五\21点4.抗原结构

主要有3种核蛋白抗原（P抗原）

无特异性、各种链球菌均相同，并与葡萄球菌有交叉。多糖抗原

(C抗原)

群特异性抗原，是细胞壁的多糖组分蛋白抗原表面抗原

主要为M蛋白，具有型特异性，抗吞嗜。

当前第24页\共有40页\编于星期五\21点5.分类

最为常用的两种分类方法：1根据溶血现象分类⑴甲型溶血性链球菌菌落周围有1-2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血。这类链球菌多为条件性致病菌。⑵乙型溶血性链球菌菌落周围形成一个2-4mm宽、界限分明、完全透明的无色的溶血环，称为乙型溶血或β型溶血。这类链球菌的致病力强。⑶丙型链球菌不产生溶血素，菌落周围无溶血环，也称为不溶血性链球菌。无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔引起感染。当前第25页\共有40页\编于星期五\21点2根据抗原构造的分类

按链球菌细胞壁中多糖抗原（C多糖）不同，根据兰氏(Lancefield)血清学分类，可分为A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、Ｔ、Ｕ、Ｖ共20个血清群。因表面蛋白质抗原不同，有分若干个型。兰氏(Lancefield)分类当前第26页\共有40页\编于星期五\21点当前第27页\共有40页\编于星期五\21点二、致病性

1.致病物质

溶血素胞壁脂磷壁酸（LTA）,纤维粘连蛋白结合蛋白(FBR)与生物膜具有高度的亲和力，是该菌能定居在机体皮肤和呼吸道黏膜等表面的主要侵袭因素。M蛋白侵入机体后M蛋白的抗吞噬作用非常重要。一旦病菌大量繁殖则产生溶血素、致热外毒素等毒性物质透明质酸酶、链激酶、链道酶等侵袭性物质.当前第28页\共有40页\编于星期五\21点2.致病

无乳链球菌（S.agalactiae）停乳链球菌(S.dysgalactiae)乳房链球菌(S.uberis)马腺疫链球菌(Streptococcusequi)兽疫链球菌(S.zooepidemicus)猪链球菌(S.suis)化脓链球菌(S.pyogenes)肺炎链球菌(S.pneumoniae)当前第29页\共有40页\编于星期五\21点致乳房炎的链球菌无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌：三种链球菌是牛、山羊和绵羊的急性、慢性乳腺炎的病原菌之一，其中最常见的是无乳链球菌。链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌当前第30页\共有40页\编于星期五\21点

马链球菌兽疫亚种（旧称兽疫链球菌）：可致多种家畜的炎症及败血病，包括马的创伤感染、败血症、子宫炎、流产、功驹脐带炎；牛乳腺炎、子宫炎；猪败血症、关节炎；羊败血症、心包炎、胸膜炎、肺炎；鸡败血症等。

马链球菌马亚种（旧称马腺疫链球菌）：是引起马腺疫的病原体。感染马下颌淋巴结形成脓灶。

肺炎链球菌(又名肺炎球菌、肺炎双球菌)：常引起人大叶性肺炎或脑膜炎，亦可致幼畜肺炎或败血症。当前第31页\共有40页\编于星期五\21点三、微生物学诊断标本的采集根据临床疾病类型的不同，采集适当的标本。

当前第32页\共有40页\编于星期五\21点2，检验方法

脓汁、咽拭或炎性分泌物⑴直接涂片，革兰氏染色镜检。免疫荧光。⑵分离培养在涂片前先接种2份血平板，分别做需氧和厌氧培养，37％℃24-48小时观察菌落形态和溶血情况。然后涂片染色镜检。（不能在麦康凯平板上生长）⑶生化特性糖类分解试验在本属细菌中鉴别价值不大，可供参考。当前第33页\共有40页\编于星期五\21点⑷鉴定试验为进一步检查链球菌有无致病性可做下列鉴定试验链激酶试验A群溶血性链球菌能产生链激酶，激活血液中血浆素原使其变成血浆素，血浆素可溶解纤维蛋白，对测定链球菌的致病性有一定的意义。一般血浆溶解时间越短，则该菌产生的链激酶越多。马尿酸钠水解试验B群溶血性链球菌有马尿酸水解酶。牛乳美蓝试验盐耐、受试验杆菌肽敏感试验七叶苷分解试验cAMP试验SXT敏感试验沉淀试验胆汁溶解试验、菊糖发酵试验及optochin试验当前第34页\共有40页\编于星期五\21点血液标本取血液分别接种硫酸镁肉汤做需氧培养或庖肉培养基中厌氧培养。经过37℃24小时或72小时培养，β-溶血性链球菌呈沉淀生长，且有自下而上的溶血；α-溶血性链球菌呈草绿色荧光；粪链球菌呈浑浊生长，厌氧链球菌在庖肉培养基内生长。挑取肉汤培养物作涂片检查，并转移至血液平板上培养，做鉴定试验。荧光抗体快速诊断链球菌当前第35页\共有40页\编于星期五\21点免疫防治

不同型之间的交叉保护力很弱或者没有。

猪、羊链球菌疫苗当前第36页\共有40页\编于星期五\21点猪链球菌形态:直径1~2um单个或双个培养:α或β溶血