抗核抗体检测及临床意义张瑾

风湿免疫性疾病诊断方法症状、体征自身抗体影像学检查病理

当前第1页\共有55页\编于星期五\9点风湿免疫性疾病相关自身抗体抗核抗体谱（ANAs）类风湿关节炎相关抗体(RF,抗CCP等)抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）抗自身免疫性肌炎谱自身免疫性肝病相关抗体谱抗磷脂抗体谱当前第2页\共有55页\编于星期五\9点抗核抗体谱检测的意义有助于弥漫性结缔组织病的分类和诊断抗Sm抗体是SLE的标记抗体；抗Scl-70抗体是SSc的标记抗体；抗Jo-1抗体是PM/DM的标记抗体；观察疾病活动度和治疗反应抗dsDNA抗体研究发病机理抗核小体抗体、抗dsDNA抗体当前第3页\共有55页\编于星期五\9点基本概念ANA荧光核型ANAs中的常见抗体当前第4页\共有55页\编于星期五\9点抗核抗体自身抗体：指抗自身组织、器官、细胞及其成分的抗体ANA：指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。ANA存在一个谱。ANA新概念：抗核酸(Nucleicacid)和核蛋白(Nucleoprotein)抗体总称某些核抗原成分在核仁和胞浆内比核质内更丰富

(如SSA/RO,Jo-1,rRNP等)当前第5页\共有55页\编于星期五\9点ANA检测方法-IIF法ANA滴度ANA核型当前第6页\共有55页\编于星期五\9点ANA滴度的意义结缔组织病的粗筛（>1:160）阳性标本还需进一步识别感染、肿瘤及5%正常人可出现低滴度阳性ANA阴性基本可以除外SLEANA滴度与疾病活动性无明确相关性当前第7页\共有55页\编于星期五\9点荧光显微镜下ANA的染色型别均质型（H）核膜型（M)斑点型（S）核仁型（N）着丝点型（ACA）胞浆型（C）混合型当前第8页\共有55页\编于星期五\9点均质型(H)抗组蛋白抗ds/ssDNA抗核小体主要出现在SLE中当前第9页\共有55页\编于星期五\9点均质型

(H)当前第10页\共有55页\编于星期五\9点核膜型

(M)主要与抗dsDNA有关

与抗原底物片固定方法和备制过程有关出现在SLE中部分与抗核包膜蛋白有关

抗板层素抗gp210出现在PBC中

当前第11页\共有55页\编于星期五\9点核膜型

(M)当前第12页\共有55页\编于星期五\9点与抗ENA成分有关

抗Sm

抗RNP

抗SS-A

抗SS-B出现在SLE、MCTD、pSS、SSc、PM/DM等

斑点型(S)当前第13页\共有55页\编于星期五\9点斑点型(S)当前第14页\共有55页\编于星期五\9点与抗核仁蛋白有关抗Scl-70

抗RNA多聚酶I

抗PM-Scl出现在SSc中核仁

型(N)当前第15页\共有55页\编于星期五\9点核仁

型(N)当前第16页\共有55页\编于星期五\9点与抗着丝点染色质有关存在于有丝分裂期出现在SSc、CREST综合征等中着丝点

型(ACA)当前第17页\共有55页\编于星期五\9点着丝点

型(ACA)当前第18页\共有55页\编于星期五\9点与抗胞浆成分有关抗核糖体P蛋白（rRNP）：出现在SLE中抗合成酶：Jo-1、PL-12、PL-7、OJ、EJ抗信号识别颗粒（SRP)抗线粒体：出现在PBC中抗高尔基体抗溶酶体等等

胞浆型

(C)见于PM/DM当前第19页\共有55页\编于星期五\9点

胞浆型(C)当前第20页\共有55页\编于星期五\9点ANA荧光核型小结均质型（H）：像大饼，SLE相关核膜型（M)：像圈圈，SLE相关斑点型（S）：像藕片，抗ENA核仁型（N）：像纽扣，SD相关着丝点型（ACA）：像满天星，抗ACA胞浆型（C）：像空心大饼,SLEPM/DMPBC相关混合型：稀释后检测有助于区分当前第21页\共有55页\编于星期五\9点抗核抗体谱（ANAs）ANAs抗核不溶成分抗核可溶成分（抗ENA）抗染色体DNA蛋白抗核仁抗体

抗DNA抗体

抗核小体抗体

抗组蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4

抗Sm,U1RNP,SSA,SSB抗Scl-70,Jo-1,PM-1抗rRNP,PCNA…….dsDNAssDNA抗着丝点抗体（ACA)抗5sRNA当前第22页\共有55页\编于星期五\9点抗dsDNA检测方法以短膜虫或马疫锥虫为底物的间接免疫荧光法(IIF)：≥1:5短膜虫或马疫锥虫的动基体内含有天然纯dsDNA，未经人工处理，不含组蛋白与ssDNA，抗原性纯一特异。优点：特异性好

当前第23页\共有55页\编于星期五\9点抗dsDNA检测方法酶联免疫吸附法（ELISA）:≥100IU/ml优点：敏感性最高

缺点：过于敏感，同时可能检测到ssDNA抗体和低亲和力dsDNA抗体,而这两种致病力均不强

放射免疫法(Farr):≥20%

优点：对高亲和度DNA抗体的检测优于CL-IIF缺点：具有放射性，对技术人员身体造成一定影响蛋白印迹法（WB）

缺点：dsDNA抗原在纯化包备过程中可变性解链，变成ssDNA,导致假阳性结果不同方法检测SLE患者抗dsDNA抗体的结果：everythingispossible至少用两种方法做（报告结果时注明方法学）,互为补充。如：IIF法+ELISA法

当前第24页\共有55页\编于星期五\9点当前第25页\共有55页\编于星期五\9点当前第26页\共有55页\编于星期五\9点抗dsDNA抗体临床意义SLE的血清特异性抗体多有致病性（IgG型），与亲和力（高）有关与LN与SLE疾病活动性相关，活动期达90％可用于SLE疾病活动期判断＆药物疗效观察与SLE急性皮疹、血管炎、浆膜腔炎、白细胞减少等有关当前第27页\共有55页\编于星期五\9点当前第28页\共有55页\编于星期五\9点抗组蛋白抗体（AHA）

（酶联免疫吸附法X2SD)可出现于多种结缔组织病，不具有诊断特异性SLE：50%

活动期SLE可达90.2%与LN相关，与SLE疾病活动性存在一定意义的相关性药物性狼疮（DIL）：>90%如：异烟肼、苯妥因钠、青霉胺、雌激素等

仅有AHA而无其他ANA，强烈支持DIL其他结缔组织病：23-30%如：RA、PBC、SSc等

当前第29页\共有55页\编于星期五\9点核小体是真核细胞染色质的基本复制单位，由组蛋白与DNA组成。参与SLE发病机制：多克隆B细胞活化剂产生ANuA，先于其他ANA促进抗dsDNA与AHA形成参与LN的发生

抗核小体抗体（ANuA）当前第30页\共有55页\编于星期五\9点抗核小体抗体临床意义SLE标记性/高特异性自身抗体敏感性：58%-66%（优于抗dsDNA及抗Sm）特异性：98%-100%（与抗dsDNA相当）用于SLE的早期诊断ANuA的产生早于抗dsDNA、AHA抗dsDNA阴性者有1/4～1/2ANuA阳性与LN相关，用于SLE疾病活动性监测当前第31页\共有55页\编于星期五\9点ANuA、抗dsDNA、AHA联合检测意义当前第32页\共有55页\编于星期五\9点抗ENA抗体

extractablenuclearantigen可提取性核抗原成分：核酸与核蛋白，不含染色质成分功能：参与细胞内DNA复制、RNA转录、蛋白翻译合成来源：无种属差异，有组织不均一性理化特性：对温度和RNA酶敏感（U1RNP、SS-A）意义：抗ENA抗体是ANAs中范围最广、最为重要的一簇抗体，与疾病活动性大多无相关当前第33页\共有55页\编于星期五\9点

抗ENA抗体检测方法免疫双扩散法(ID)对流免疫电泳法(CIE)免疫印迹法(IBT)酶联免疫吸附法(ELISA)蛋白芯片（Proteinchip）当前第34页\共有55页\编于星期五\9点抗Sm抗体与抗U1RNP抗体靶抗原：位于细胞核内的一组含尿嘧啶丰富的核糖核蛋白，Sm和U1RNP是同一分子复合物中的不同位点当前第35页\共有55页\编于星期五\9点抗Sm抗体与抗U1RNP抗体抗Sm：SLE的标记性抗体，是前瞻性及回顾性诊断的指标。阳性率低：SLE（30%）抗U1RNP：多种CTD均可出现，与手指肿胀、雷诺现象、肌炎、指端硬化等相关，但肾炎发生率低。

阳性率：40-60%，其中SLE(30-40%),SSc(14%),pSS(12%),PM/DM(15%)高滴度抗U1RNP+抗Sm-MCTD抗U1RNP+抗Sm+SLE抗U1RNP-抗Sm+实验室误差?U1RNP丢失?当前第36页\共有55页\编于星期五\9点抗rRNP抗体靶抗原：胞浆中60S核糖体大亚基上的磷酸化蛋白

当前第37页\共有55页\编于星期五\9点抗rRNP抗体SLE的高度特异性抗体，与SLE脑病相关常在SLE活动期存在,但不会随病情的缓解立即消失,可持续1-2年后才转阴。阳性率：24%可出现在SLE早期（ANA及抗dsDNA阴性）

当前第38页\共有55页\编于星期五\9点抗SSA与抗SSB抗体靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相邻结构在不同的细胞周期，在细胞内的定位不同（细胞核内和胞浆中均可存在）pSS的SS-A存在于细胞核内SLE的SS-A存在于胞浆中SS-B主要位于细胞核内45KD47KD48KD当前第39页\共有55页\编于星期五\9点抗SSA与抗SSB抗体抗SS-A：结缔组织病中出现频率最高的抗体（60-75%），见于pSS（75%）SLE（25%）

RA（10%）SSc（24%）PBC（20%）等抗SSB：常与抗SSA相伴出现，诊断pSS更特异，见于pSS（40%）、SLE（10%）临床意义：与新生儿狼疮和先天性心脏传导阻滞、平滑肌受累、光过敏、血管炎、皮损、紫癜、淋巴结肿大、WBC减少有关ANA阴性的SCLE：常为抗SSA抗体阳性。当前第40页\共有55页\编于星期五\9点当前第41页\共有55页\编于星期五\9点当前第42页\共有55页\编于星期五\9点抗Jo-1抗体(抗PL-1抗体)靶抗原：组氨酸tRNA合成酶胞浆中的磷酸蛋白当前第43页\共有55页\编于星期五\9点抗Jo-1抗体(抗PL-1抗体)PM/DM的标记抗体，阳性率20-30%抗体效价与疾病活动性相关抗Jo-1抗体综合征：急性发热,对称性关节炎,技工手,雷诺现象,肌炎（相对轻）,肺间质病变其他抗合成酶抗体：抗PL-7、抗PL-12、抗OJ、抗EJ当前第44页\共有55页\编于星期五\9点抗ScL-70抗体靶抗原：DNA拓朴异构酶I的降解产物主要存在核仁中SSc的标记抗体，阳性率20-30%多见于dSSc，病情进展快，提示预后不良与ILD、弥漫性皮肤硬化有关，而PAH少见当前第45页\共有55页\编于星期五\9点主要靶抗原：着丝点蛋白-B多见于ISSc，病程缓慢，提示预后较好CREST综合征：软组织钙化（C）,雷诺现象（R）,食道功能障碍（E）,指端硬化（S）,毛细血管扩张（T），但并非标记抗体，也见于孤立性雷诺现象、SS、PBC、AIH等国外文献：与PAH相关，而ILD少见中国人群：未发现与PAH相关，但ILD少见白伊娜，王迁等.中国系统性硬化症患者硬皮病相关自身抗体的检测及其临床意义.中华微生物学和免疫学杂志.2011（5）:452-455.抗着丝点抗体(ACA)当前第46页\共有55页\编于星期五\9点TakeHomeMassageANA荧光核型对抗体性质范围有一定提示作用，尤其在靶抗原阴性时。ANA阴性而靶抗原阳性主要见于抗胞浆成分抗体，如：SS-A、Jo-1、rRNP、线粒体等。抗核仁型抗体常与SSc有关。抗均质型或核膜型抗体常与SLE有关。当前第47页\共有55页\编于星期五\9点TakeHomeMassage抗dsDNA：SLE特异性抗体，与LN及疾病活动度有关，至少两种方法联合检测（如：IIF法+ELISA法）。抗核小体、抗组蛋白、抗dsDNA三抗体阳性者强烈提示增殖性LN。与疾病活动性相关的抗体：抗dsDNA、抗核小体、抗组蛋白、抗Jo-1、抗rRNP与预后相关的抗体：抗Scl-70（差）、ACA（好）当前第48页\共有55页\编于星期五\9点案例1女性，34岁游走性多关节痛，雷诺现象半年RF56U/L；抗CCP抗体阴性；ANA1：320胸部CT：轻度肺间质病变诊断？治疗？（核仁型）UCTDILD发展为

SSc可能性大Pred+CTX当前第49页\共有55页\编于星期五\9点案例2男性，50岁双腕关节炎、雷诺现象半年ANA全套：阴性；抗CCP、RF：阴性胸部CT：轻度肺间质病变右腕关节MRI：骨髓水肿和滑膜炎诊断？

复查：ANA阴性，抗Jo-1弱阳性诊断：抗Jo-1抗体综合征Pred+TⅡ当前第50页\共有55页\编于星期五\9点案例3女性32岁手指关节痛2月ANA（+）S1:80抗SSA（+++）135