环境卫生学及管理监测

环境卫生学及管理监测第一页，共七十一页，编辑于2023年，星期日课堂目标一、空气消毒效果监测二、手消毒效果监测三、物品和环境表面消毒效果监测四、使用中消毒液染菌量测定五、内镜消毒灭菌效果监测六、血液透析液监测七、灭菌质量监测2第二页，共七十一页，编辑于2023年，星期日一、空气消毒效果监测非洁净区域空气消毒效果监测（一）采样时间：在消毒处理后，操作前进行采样。采样前关闭门窗，在无人走动的情况下静止10分钟。（二）采样方法：根据其采样原理分：平板暴露法和微生物采样器法。3第三页，共七十一页，编辑于2023年，星期日1、平板暴露法：布点方法（1）室内面积≤30m2，设置内、中、外对角线3个点，内、外布点部位距墙壁1m处；4第四页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（2）室内面积>30m2，设4角及中央5点，4角布点部位距离墙壁1m处。5第五页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（3）采样方法：将普通营养琼脂血平皿（直径9cm)放在室内各采样点处，采样高度为距离地面0.8~1.5m，采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露时间（Ⅱ类环境暴露15min，Ⅲ、Ⅳ环境暴露5min）,盖好立即送检。（4）检测方法：将采样后平皿置37℃±温箱培养48h,计数并鉴定。6第六页，共七十一页，编辑于2023年，星期日7第七页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（5）结果判断标准值环境类别范围菌落总数cfu/m3致病菌＊Ⅰ类洁净手术室和其他洁净场所

≤10cfu/m3(或0.2cfu/平板）不得检出

非洁净手术部（室）、新生儿室、产房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等Ⅱ类≤200cfu/m3(或4cfu/平板）不得检出

儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、输血科、消毒供应中心（室）其他普通住院病区

普通门（急）诊、化验室、注射室、换药室、治疗室、感染性疾病科门诊和病区Ⅲ类

≤500cfu/m3(或10cfu/平板）不得检出

注：＊致病菌指溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌9Ⅳ类第八页，共七十一页，编辑于2023年，星期日卫生部《医院洁净手术部建筑技术规范》（GB50333-2002）中洁净手术室等级标准（空态或静态）

手术室等级名称

手术区周边区特别洁净

Ⅰ100级1000级手术室

标准洁净

Ⅱ1000级10000级手术室

一般洁净

100000Ⅲ10000级手术室级准洁净Ⅳ300000级手术室注：1、浮游法的细菌最大平均浓度采用括号内数值。细菌最大平均浓度是直接所测的结果，不是沉降法和浮游法互相换算结果。2、1级眼科专用手术室周边区按10000级要求。3、φ90皿为采样直径90mm的培养皿。23

空气洁净度级别第九页，共七十一页，编辑于2023年，星期日洁净手术室静态空气净化效果的监测手术区:Ⅰ级手术台两侧边至少各外推0.9m,两端至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域；Ⅰ级眼科专用手术室手术区每边不小于1.2m;Ⅱ级手术台两侧边至少各外推0.6m,两端至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域；Ⅲ级手术台四边至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域；Ⅳ级不分手术区和周边区。周边区：洁净手术室内除去手术区以外的其他区域。12第十页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（一）采样时间：洁净手术室房间清洁并擦试消毒后，使净化空调系统达到自净时间并处于开启状态，然后进行测试，室内应无工作人员。（二）监测人员要求：穿洁净服，戴口罩，手卫生。动作要轻，避免产生二次污染。13第十一页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（三）布点顺序：放置培养皿从总平面中最靠里的房间开始布置，依次向外，最后人员撤出。每间房间也是从房间最靠里的点开始布置，最后布置门附近的点，然后人员撤出。收取培养皿的顺序相反，从最外边的房间开始收，每间房间从门附近的培养皿开始收，最先布置的皿最后收，沉降时间略有差别。14第十二页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（四）检测方法：将血平板或普通营养琼脂平板（直径9cm)放在室内各采样点处，采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上；在手术区检测时应无手术台，当手术台已固定时，检测高度应在台面之上0.25m；在100级区域检测时，采样口应对着气流方向；在其他区域检测时，采样口均向上。采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露30min,盖好立即送检.15第十三页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（五）空白对照：第1次对照为培养皿对照，每监测批次中取1个培养皿做对比试验，培养皿不打开直接培养，用于检测培养皿是否合格。第2次对照为微生物室操作对照，每室或每区取1个对照皿，对操作过程对照试验，方法是模拟微生物检测操作过程，但培养皿打开后应立即封盖。两次对照结果必须为阴性。整个操作应符合无菌操作的要求。16第十四页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（六）布点方法注意：乱流洁净室应尽量避开高效送风口正下方，同时布点位置应避开障碍物。1、洁净度局部百级周围千级设置13个点17第十五页，共七十一页，编辑于2023年，星期日2、洁净度局部千级周围万级设置9个点18第十六页，共七十一页，编辑于2023年，星期日3、洁净度局部万级周围十万级设置7个点19第十七页，共七十一页，编辑于2023年，星期日4、洁净度局部十万级周围三十万级设置5个点20第十八页，共七十一页，编辑于2023年，星期日5、洁净度三十万级设置5个点▲▲▲▲▲21第十九页，共七十一页，编辑于2023年，星期日计算方法：采样后的培养皿应37℃条件下培养24h，并计算菌落数。菌落数的平均值均四舍五入选位到小数点后1位。注意手术区与周边区分别计算。22第二十页，共七十一页，编辑于2023年，星期日卫生部《医院洁净手术部建筑技术规范》（GB50333-2002）中洁净手术室等级标准（空态或静态）沉降法（浮游法）细菌最大平均浓度表面最大空气洁净度级别手术室等级染菌浓度名称手术区周边区手术区周边区特别洁净0.2个/30min•φ90皿0.4个/30min•φ90皿Ⅰ5个/cm2100级1000级手术室（5个/m3）（10个/m3）标准洁净0.75个/30min•φ90皿1.5个/30min•φ90皿Ⅱ5个/cm21000级10000级手术室（25个/m3）（50个/m3）一般洁净2个/30min•φ90皿4个/30min•φ90皿100000Ⅲ5个/cm210000级手术室（75个/m3）（150个/m3）级准洁净5个/30min•φ90皿Ⅳ5个/cm2300000级手术室（175个/m3）注：1、浮游法的细菌最大平均浓度采用括号内数值。细菌最大平均浓度是直接所测的结果，不是沉降法和浮游法互相换算结果。2、1级眼科专用手术室周边区按10000级要求。3、φ90皿为采样直径90mm的培养皿。23第二十一页，共七十一页，编辑于2023年，星期日洁净辅助用房等级标准（空态或静态）沉降法（浮游法）细菌最大平等级表面最大染菌浓度空气洁净度级别均浓度Ⅰ0.4个/30min•φ90皿（10个/m3）5个/cm21000级（局部100级）Ⅱ1.5个/30min•φ90皿（50个/m3）5个/cm210000级Ⅲ4个/30min•φ90皿（150个/m3）5个/cm2100000级Ⅳ5个/30min•φ90皿（175个/m3）5个/cm2300000级24第二十二页，共七十一页，编辑于2023年，星期日25主要洁净辅助用房分级等级用房名称Ⅰ需要无菌操作的特殊实验室Ⅱ体外循环灌注准备室刷手间、消毒准备室、预麻室、一次性物品、无菌敷料及器械与精密仪器的存放室、护士站、洁净走廊、重症护理单元（ICU)Ⅳ恢复（麻醉苏醒）室与更衣室（二更）、清洁走廊Ⅲ第二十三页，共七十一页，编辑于2023年，星期日二、手卫生效果的监测方法（一）采样时间：接触患者、进行诊疗活动前采样。（二）采样方法：被检者五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱水液浸湿的棉拭子在双手指曲面从指跟到指端往返涂擦2次，一只手涂擦面积约30cm2，涂擦过程中同时转动棉拭子；将棉拭子接触操作者的部分剪去，投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，及时送检。26第二十四页，共七十一页，编辑于2023年，星期日外科手消毒监测采样2第二十五页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（三）检测方法：将采样管在混匀器上振荡20秒或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，平皿内加入已溶化的45℃-48℃的营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃温箱培养48h，计数菌落数。（四）计算方法：细菌菌落总数（cfu/cm2）=平板上菌落数×稀释倍数/采样面（cm2）28第二十六页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（六）结果判断：《医务人员手卫生规范》4.4手消毒效果应达到如下相应要求：卫生手清毒，监测的细菌菌落总数应≤10cfu/㎝2外科手消毒，监测的细菌菌落总数应≤5cfu/㎝229第二十七页，共七十一页，编辑于2023年，星期日《医务人员手卫生规范》8．1监测要求医疗机构应每季度对手术室、产房、导管室、层流洁净病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重症监护病房、新生儿室、母婴室、血液透析病房、烧伤病房、感染疾病科、口腔科等部门工作的医务人员手进行消毒效果的监测；当怀疑医院感染暴发与医务人员手卫生有关时，应及时进行监测，并进行相应致病性微生物的检测。30第二十八页，共七十一页，编辑于2023年，星期日三、物品和环境表面消毒效果监测（一）采样时间：在消毒处理后进行采样。（二）采样面积：被采面积＜100cｍ2取全部表面；采样面积≥100cｍ2，取100cｍ231第二十九页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（三）采样方法（棉拭子法、压印法两种）棉拭子法：用5×5cm的标准灭菌规格版，放在被检物体表面，用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子，在规格板内横竖往返均匀涂抹5次，并随之转动棉拭子，可连续采样1～4个规格板面积。剪去手接触部分，并将棉拭子放入装有10ml含相应中和剂的试管内，立即送检。门把等小型物体则采用棉拭子直接在物体表面按一定顺序涂抹采样，结果计算用cfu／件表示。32第三十页，共七十一页，编辑于2023年，星期日第三十一页，共七十一页，编辑于2023年，星期日1、步骤（在25cm2规格板内横竖往返均匀涂抹各5次，连续采4个规格板面积）33第三十二页，共七十一页，编辑于2023年，星期日34第三十三页，共七十一页，编辑于2023年，星期日2、检测方法：（1）细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已溶化的45～48℃的营养琼脂15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃左右温箱培养48h，计算菌落数。（2）致病菌检测检测原则：致病菌的检测依据污染情况进行相应指标的检测35第三十四页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（四）结果判断标准值环境类别范围菌落总数cfu/cm2致病菌＊Ⅰ类≤5不得检出Ⅱ类≤5不得检出

Ⅲ类≤10不得检出

Ⅳ类≤15不得检出注：＊致病菌指溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌。母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏菌。37洁净手术室和其他洁净场所

非洁净手术部（室）、新生儿室、产房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、输血科、消毒供应中心（室）其他普通住院病区普通门（急）诊、化验室、注射室、换药室、治疗室、感染性疾病科门诊和病区第三十五页，共七十一页，编辑于2023年，星期日四、使用中消毒液染菌量测定（一）采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与灭菌器械保存液；（二）采样量及方法：在无菌条件下，用无菌吸管吸取1.0ml被检样液，加入9.0ml含相应中和剂的采样管内混匀；38第三十六页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（三）检测方法：1、涂抹法：用无菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含相应中和剂的采样管内混匀，用无菌吸管吸取上述溶液0.2ml,滴于干燥普通琼脂平板，每份样品同时做2个平行样，一平行样板置20℃培养7d，观察霉菌生长情况，另一个平板置37℃温箱培养72h，计算菌落数，同时检测致病菌。消毒液染菌量（cfu/ml)=每个平板上的菌落数×5039第三十七页，共七十一页，编辑于2023年，星期日2、倾注法：用无菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含相应中和剂的采样管内混匀，分别取0.5ml放入2只灭菌平皿内，加入已溶化的45℃-48℃的营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，一平板置20℃培养7d,观察霉菌生长情况；另一平板置37℃温箱培养72h，计数菌落数，同时检测致病菌。消毒液染菌量（cfu/ml)=每个平板上的菌落数×2040第三十八页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（三）结果判断：使用中消毒液染菌量≤100cfu/ml,不得检出致病菌；无菌物品保存液应无菌生长。注意：采样时应无菌操作，正确选用中和剂，采样后1小时内检测。41第三十九页，共七十一页，编辑于2023年，星期日医院需要常备消毒剂的中和剂消毒剂中和剂含氯（碘）消毒剂硫代硫酸钠（0.1%～1.0%)（有效氯或碘0.1%～0.5%)过氧乙酸溶液（0.1%～0.5%）硫代硫酸钠（0.1%～0.5%)过氧化氢溶液（1.0%～3.0%）硫代硫酸钠（0.5%～1.0%)①1%双甲酮与0.6%吗啉的混合液甲醛溶液（1%）②0.1%～0.5%亚硫酸钠③25%氢氧化钠戊二醛溶液（2%）甘氨酸（1%）或甲醛（1%）季按盐类消毒剂Tween80（0.5%～3.0%)+卵磷脂（0.1%～0.5%）（1.0%～2.0%）酚类消毒剂Tween80（0.5%～3.0%)碱类消毒剂等当量酸酸类消毒剂等当量酸酸性氧化电位水硫代硫酸钠（0.5%)+PBS(0.03mol/L)42复方消毒剂Tween80+卵磷脂+硫代硫酸钠第四十页，共七十一页，编辑于2023年，星期日消毒实验用试剂磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L，ph7.2）无水磷酸氢二钠2.83g磷酸二氢钾1.36g将各成分加入到1000ml蒸馏水中，待完全溶解后，调ph至7.2-7.4，于121℃压力蒸汽灭菌20min备用。无菌检验用洗脱液吐温-801g蛋白胨10g氯化钠8.5g将各成分加入到1000ml0.03mol/LPBS液中，加热溶解后，调ph至7.2-7.4，于121℃压力蒸汽灭菌20min备用。43第四十一页，共七十一页，编辑于2023年，星期日五、内镜消毒灭菌效果的监测（一）采样时间：在消毒灭菌后，使用前进行。（二）采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。用无菌注射器抽取10ml含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检口注入，用15ml无菌试管从活检出口收集，及时送检，2小时内检测。44第四十二页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（三）检测方法：将送检液用旋涡器充分震荡，取0.5ml，加入2只直径90mm无菌平皿，每个平皿分别加入已经熔化的45℃-48℃营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，于35℃培养48小时后计数。计算方法：菌落数/镜＝2个平皿菌落数平均值×20。47第四十三页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（四）致病菌检测：将送检液用旋涡器充分震荡，取0.2ml分别接种90mm血平皿、中国兰平皿和SS平皿，均匀涂布，35℃培养48小时，观察有无致病菌生长。（五）结果判断：消毒后内镜：细菌总数＜20cfu/件，不能检出致病菌；灭菌后内镜合格标准为：无菌检测合格。48第四十四页，共七十一页，编辑于2023年，星期日六、血液透析液的监测（一）采样时间：每月1次。若采样结果超标时，须重复检查，怀疑或确定病人在治疗中有热原反映和菌血症时，应随时检测。49第四十五页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（二)采样方法：透析用水：（即自来水经粗滤、砂过滤器、活性碳过滤器、水软化器（树脂置换）、反渗透装置、储水罐、出水加压泵等步骤处理后出口的液体）在反渗水进入血液透析机的位置采样；50第四十六页，共七十一页，编辑于2023年，星期日透析液：（即透析用水与A、B两种液体混合后进入人体透析之前的液体）应在进入透析器前采样。注：疑有透析液污染或严重感染病例时，应增加采样点，如原水口、软化水出口、透析液配液口、反渗水出口、贮水罐出口等。51第四十七页，共七十一页，编辑于2023年，星期日5第四十八页，共七十一页，编辑于2023年，星期日(三）检测方法：用无菌吸管吸取透析用水、透析液2.0ml-3.0ml，放入无菌试管，检测时视透析用水、透析液污染程度分别取原液或10倍稀释液0.5ml放入2个灭菌平皿内，45℃-48℃营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，于37℃培养48h，计数并鉴定细菌。53第四十九页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（四）结果判断：透析用水、透析液：细菌总数≤200cfu/ml，并不得检出致病性微生物。内毒素检测：每3个月至少检测一次内毒素含量≤2EU/ml，干预限度为1EU/ml54第五十页，共七十一页，编辑于2023年，星期日七、灭菌质量的监测压力蒸汽灭菌的监测（一）物理监测法：每次灭菌应连续监测并记录灭菌时的温度、压力和时间等灭菌参数。（二）化学监测法：应进行包外、包内化学指示物监测。采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时，应直接将一片包内化学指示物置于待灭菌物品旁进行化学监测。55第五十一页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（三）生物监测法：生物指示剂有芽孢悬液、芽孢菌片以及菌片与培养基混装（自含式）的指示管。指示菌株：嗜热脂肪杆菌芽孢（ACTT7953或SSIK31株），菌片含量为5.0×105-5.0×106cfu/片，在121±0.5℃条件下，D值为1.0-1.9min。KT值≤19min,ST值为≥3.9min。56第五十二页，共七十一页，编辑于2023年，星期日1、监测方法为：将生物指示物置于标准试验包的中心部位。标准试验包由16条41cm×66cm的全棉手术巾制成。制作方法：将每条手术巾的长边先折成3层，短边折成2层，然后叠放，制成23cm×23cm×15cm大小的测试包。经一个灭菌周期后，在无菌条件下取出标准试验包的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，经56℃±1℃培养7d（自含式生物指示物按产品说明书执行），观察培养结果。57第五十三页，共七十一页，编辑于2023年，星期日2、采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时，应直接将一支生物指示物，置于空载的灭菌器内，经一个灭菌周期后取出，规定条件下培养，观察结果。3、监测周期：生物监测应每周监测一次。58第五十四页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（四）结果判断：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阴性，判定为灭菌合格。阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阳性，则灭菌不合格；同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染所致。59第五十五页，共七十一页，编辑于2023年，星期日溴甲酚子蛋白胨培养液蛋白胨10g葡萄糖5g可溶性淀粉1g2%溴甲酚紫乙醇溶液0.6ml蒸馏水1000ml将蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸馏水中，调pH至7.0-7.2，加入2%溴甲酚紫酒精溶液，于115℃压力蒸汽灭菌30min。置4℃冰箱备用。62第五十六页，共七十一页，编辑于2023年，星期日干热灭菌的监测：（一）物理监测法：每灭菌批次应进行物理监测。监测方法为将多点温度检测仪的多个探头分别放于灭菌器各层内、中、外各点，关好柜门，引出导线，由记录仪中观察温度上升与持续时间。温度在设定时间内均达到预置温度，则物理监测合格。（二）化学监测法：每一灭菌包外应使用包外化学指示物，每一灭菌包内应使用包内化学指示物，并置于最难灭菌的部位。63第五十七页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（三）生物监测法：指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽孢（ACTT9372），菌片含量为5.0×105-5.0×106cfu/片，在160±2℃条件下，D值为1.3-1.9min，KT值≤19min,ST值为≥3.9min。64第五十八页，共七十一页，编辑于2023年，星期日1、监测方法为：将枯草杆菌芽孢菌片分别装入超负荷运转试管内（1片/管）。灭菌器与每层门把手对角线内，外角处放置2个含菌片的试管，试管帽置于试管旁，关好柜六，经一个灭菌周期后，待温度降至80℃时，加盖试管帽后取出试管。在无菌条件下，加入普通营养肉汤培养基（5ml/管），36℃±1℃培养48h，观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7日。2、监测周期：生物监测应每周监测一次。65第五十九页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（四）结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，若每个指示菌片接种的肉汤均澄清，判为灭菌合格；若阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，而指示菌片之一接种的肉汤管混浊，判为不合格；对难以判定的肉汤管，取0.1ml接种于营养琼脂平板，同灭菌L棒或接种环涂匀，置36℃±1℃培养48h，观察菌落形态，并做涂片染色镜检，判断是否有指示菌生长，若有指示菌生长，判为灭菌不合格；若无指示菌生长，判为灭菌合格。66第六十页，共七十一页，编辑于2023年，星期日环氧乙烷灭菌（一）物理监测法：每次灭菌应连续进行物理监测。（二）化学监测法：每个灭菌物品包外应使用包外化学指示物，作为灭菌过程的标志；每包内最难灭菌位置放置包内化学指示物，通过观察其颜色变化，判定其是否达到灭菌合格要求。67第六十一页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（三）生物监测法：指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽孢（ACTT9372），1、监测方法：常规生物测试包放在灭菌器最难灭菌的部位（整个装载灭菌包的中心部位）。灭菌周期完成后应立即将生物指示物从被灭菌物品中取出，36℃±1℃培养7d（自含式生物指示物应遵循产品说明），观察培养基颜色变化。同时设阳性对照和阴性对照。2、监测周期：应每灭菌批次应进行生物监测，68第六十二页，共七十一页，编辑于2023年，星期日（四）结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试