现代分子生物学重点笔记朱玉贤版

当代分子生物学笔记（朱玉贤版）摘自：第一讲序论二、当代分子生物学中重要里程碑分子生物学是研究核酸、蛋白质等所有生物大分子形态、构造特性及其重要性、规律性和互有关系科学，是人类从分子水平上真正揭开生物世界奥秘，由被动地适应自然界转向积极地改造和重组自然界基本学科。当人们意识到同毕生物不同世代之间持续性是由生物体自身所携带遗传物质所决定，科学家为揭示这些遗传密码所进行努力就成为人类征服自然一某些，而以生物大分子为研究对像分子生物学就迅速成为当代社会中最具活力科学。1847SchleidenSchwannMorganWatsonSumner19361953KendrewPerutz运用X（myoglobin）及血红蛋白（hemoglobin）三维构造，论证了这些蛋白质在输送分子氧过程中特殊作用，成为研究生物大分子空间立体构型先驱。19Kossel1959UchoaRNADNA1962美）和英）由于在1953DNAWilkinsNobleXWatson-Crick

1965JacobMonod（operon）作为调节细菌细胞代谢分子机制。此外，她们还初次推测存在一DNAmRNA（信使核糖核酸）。1972年，Paul Berg（美）第一次进行了DNA重组。1977年，Sanger和Gilbert（英）第一次进行了DNA序列分析。1988McClintock50genemobileNobelRobertsSharp（introns）NobelMullisPCRSmith（第一种设计基因定点突变）共享Nobel化学奖。此外，Griffith（1928）及Avery（1944）等人关于致病力强光滑型）肺炎链球菌DNA）关于DNA1954（即中心法则）:MeselsonStahl（1958）DNA和生物学发展做出了重大贡献。2020607080三、分子生物学重要研究内容所有生物体中有机大分子都是以碳原子为核心，并以共价键形式与氢、氧、氮及磷以不同方式构成。不但如此，一切生物体中各类有机大分子都是由完全相似单体，如蛋白质分子中20种氨基DNARNA8条基本原理：构成生物体有机大分子单体在不同生物中都是相似；生物体内一切有机大分子建成都遵循着各自特定规则；分子生物学研究内容：DNA重组技术 基因工程基因表达调控 核酸生物学生物大分子构造功能 构造分子生物学DNA重组技术（又称基因工程）2070DNA（某个基因或基因一某些）性状。严格地说，DNADNA工具酶发现与应用则是这一技术得以建立核心。DNA重组技术有着辽阔应用前:DNA重组技术可用于定向改造些生物基因组构造，使它们所具备特殊经济价值或功能得以成百 上千倍地提高。DNA重组技术还被用来进行基本研究。如果说，分子生物学研究核心是遗传信息传递和控制，那么依照中法则，咱们要研究就是从DNA到RNA，再到蛋白质全过程，也即基因表达与调控。在这里，无论是对启动子研究（涉及调控元或称顺式作用元件），还是对转录因子<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">DNA用。基因表达调控研究

由于蛋白质分子参加并控制了细胞一切代谢活动，而决定蛋白质（重要是脱氧核糖核酸体现为特定核苷酸序列，因此基因表达实质上就是遗传信息转录和翻译。在个体生长发育过程中生物遗传信息表达按一定期序发生变化（时序调节），并随着内外环境变化而不断加以修正（环境调控）。原核生物基因组和染色体构造都比真核生物简朴，转录和翻译在同一时间和空间内发生，基因表达调控重要发生在转录水平。真核生物有细胞核构造，转录和翻译过程在时间和空间上都被分隔开，且在转录和翻译后均有复杂信息加工过程，其基因表达调控可以发生在各种不同水平上。基因表达调控重要体当前信号传导研究、转录因子研究及RNA剪辑3个方面。5’证目基因以特定强度在特定期间与空间表达蛋白质分子。真核基因在构造上不持续性是近来生物学上重大发现之一。当基因转录成pre-mRNA5’端加帽及3’端加多聚A[polyA]之外，还要将隔开各个相邻编码区内含子剪去，使外显子（编码区）相连后成为成熟mRNA含子所有剪去，而是在不同细胞或不同发育阶段有选取地剪接其mRNA构造分子生物学生物大分子构造功能研究（又称构造分子生物学）一种生物大分子无论是核酸蛋白质或嗵牵诜⒒由镅Чδ苁保 匦刖弑噶礁銮疤?一方面，它拥有特定空间构造（三维构造）；另一面，在它发挥生物学功能过程中必然存在着构造和构象变化。构造分子生物学就是研究生物大分子特定空间构造及构造运动变化与其生物学功能关系科学。它涉及构造测定、构造运动变化规3X（又称蛋白质晶体学也有人用电镜三维重组、电子衍射、中子衍射和各种频谱学办法研究生物高分子空间构造。------------------------------------------------------------------------------------------------第二讲染色体与DNA一、DNA构成与构造Avery19449/10时，有纤维状物质析出。如稍加搅拌，它就会象棉线在线轴上同样绕在硬棒上，溶液中其他成分则呈颗粒状沉淀。溶解纤维状物质并重复多次，可提高其纯度。这一物质具备很强生物学活性，初步实验证明，它很也许就是DNA（"。对DNAAveryDNA4DNADNA影响，如B-DNA（G-C）区易浮现左手螺旋DNADNA其基本特点是：1、DNA分子是由两条互相平行脱氧核苷酸长链盘绕而成。2DNA架，碱基排列在内侧。3配对，鸟嘌呤（G）只能与胞嘧啶（C）配对。如一条链上某一碱GDNA4AGDNADNA1004100。

二、DNA聚合酶与DNA合成Theaccuracyoftranslationreliesonthecityofbasepairing.Theactualrateinaseemstobe--10-8-10-10.Thiscorrespondsto-1errorpergenomeper1000bacterialreplicationcycles,or-10-6pergenepergeneration.DNApolymerasemightimprovethespecificityofomplementarybaseselectionateither(orboth)ftwostages：1，Itcouldscrutinize theincomingbase fortheopercomplementaritywiththetemplate base;forexample,by specificallyrecongnizingmatching icalfeatures.This wouldbe apresynthetic control.2，Orit couldscrutinizethebase pair afterthenewbase hasbeen addedtothechain, and, inthosecasesin whichamistakehasbeen made,removethemost recentlyaddedbase.This wouldbeaproofreading control.三、DNA生理意义及成分分析1928Griffith残废因素是引起肺炎。细菌毒性（致病力）SR致病力（荚膜多糖能保护细菌免受运动白细胞袭击）。DNAAvery（S）细菌（R）来侵染小鼠，也不能使之发病，由于粗糙型细菌天SRS型（R）（transformingprinciple）HersheyChase1952DNA。噬菌5（基片、尾丝）DNADNADNA70%噬DNA2050DNA1%标记蛋白质。四.C-value和Cot1/2Thetotalamountof DNAinthehaploidgenomesacharacteristicof each livingspeciesknownasC-value.Cot1/2istheproductof concentrationandtimerequiredfor50%reassociationgivenin -moles×五、 染色体构造DNAmoleculesarethelargestmacromoleculesinhecellandarecommonly packagedinto called“chromosomes”,mostbacteria&viruseshaveasinglechromosomewhereasEukaryotic susuallycontainmany.任何一条染色体上都带有许多基因，一条高等生物染色体上也许带有成千上万个基因，一种细胞中所有基因序列及其间隔序列统

genomes（基因组）。如果设想将人体细胞中DNA1－5基因只相称于地球上一条数十米长，数厘米宽线段！Genotype(基因型)：ThegeneticconstitutionofagivenorganismPhenotype(体现型)：Visibleproperty ofanygivenorganism (某特定生物体中可观测到物理或生理现象)。Mutations：染色体DNA中可遗传核苷酸序列变化。六、染色体构成染色质和核小体DNATmDNADNADNARNADNADNA（DNaseI）对染色质DNA消化远远慢于对纯DNA作用。染色质电子显微镜图显示出由核小体构成念珠状构造，可以看到由一条细丝连接着一连串直径为10nm球状体。H2A、H2BH3H4H1H1。DNA200bpDNA68nm10nm3.3×109180cm，这样DNA4651μm（染色体104。染色体中核酸构成DNA40%－80750－dp104mRNA，每个mRNA4d，105109分子。10－104%。各种rRNA、tRNA及组蛋白基因等都属这一类。18S、5.8S28SrRNADNA50002×106贝，使rDNADNA75%，1012体。DNA此类DNA10%—606—100DNACsClDNADNA例：小鼠总DNA1010bp百万次/genome。总DNA20％是重复数千次、长约数百bp总DNA70类序列中。Centromere：是细胞有丝分裂期间纺锤体蛋白质与染色体结合位点序和平均分派至关重要。在酵母中，centromere130bp，富含AT 碱基对。在高等真核细胞中，centromere都是由长约5－10 bp、方向相似高度重复序列所构成。Telomeresaresequencesattheends of Chromosomesthat help stabilizethem。 酵Telomeres普通以100bp左右不精准重复序列所构成。5’(TxGy)n

3’(AxCy)nXY1－4，单细胞真核生物中n染色体末端线性重复序列不能被DNApolymarase 所精确复制它们普通在DNA复制完毕后来由telomarase合成后加到染色体末端。Alu（300bp）Alu1－3Alu染色体中蛋白质染色体上蛋白质涉及组蛋白和非组蛋白。组蛋白是染色体构造蛋白，它与DNA构成核小体。普通可以用2mol/L NaCl或0.25mol/LHCl/H2SO4解决使组蛋白与DNA分开。组蛋白分为H1、H2AH2BH3及H4。这些组蛋白都具有大量赖氨酸和精氨酸，其中H3H4富含精氨酸富含赖氨酸H2B介于两者之间⑴组蛋白普通特性H4（豌豆H460→60，精氨酸→赖氨酸）H3H3H34氨基酸。H1而带有H5，精细胞染色体组蛋白是鱼精蛋白。肽N+16，C3CADP等。⑵非组蛋白普通特性DNA60%～7020-10015-20种。非组蛋白组织专一性和种属专一性。(3)几类常用非组蛋白HMG（highmobilitygroupprotein）用低盐（0.35mol/LNaCl）23.0×104DNA2mol/LNaCl702mol/LNaCl5mol/LDNA20%，染色8%。七.原核与真核染色体DNA比较原核生物中普通只有一条染色体且大都带有单拷贝基因，只有很少数基因〔如rRNA基因〕是以多拷贝形式存在；整个染色体DNA几乎所有由功能基因与调控序列所构成；几乎每个基因序列都与它所编码蛋白质序列呈线性相应状态。ViralDNAmoleculesarerelativelysmallHIV=9000ntRNAQβ=4200 ntBactariaDNAis100times>thanviralE.coli4639221bpdouble-strandedContourlength=1.7mm,850DNA。Eucaryoticcells果蝇带有25倍于E.Coli DNA,人类带有600倍于ColiDNA. EucaryoticDNA中基因密度明显低于原核和病毒如人DNA中平均每毫米只带有50个基,而E. Coli基因密度每毫米DNA带有2400个基因！一种人细胞中所带有约有2m/1.7mm细菌。成人带有1X10^14个细胞，成人体内所有DNA总长度（ContourLength）＝ 2X10^11Km------------------------------------------------------

第三讲蛋白质合成一.基因与基因表达普通概念基因作为唯一可以自主复制、永久存在单位，其生理学功能以蛋白质形式得到表达。DNAmRNA有生命现象。编码链（codingstrand）又称sensestrand，是指与mRNA列相似那条链。非编码链（anticodingstrand），又称antisensestrand，是指那条依照碱基互补原则指引mRNADNAGeneticinformationis perpetuatedby replication（复制）inwhichadouble-strandednucleicacidisicatedtogiveidenticalcopies.基因表达涉及转录（transcription）和翻译（translation）两个阶段。转录是指拷贝出一条与DNA（除了之外为模板，把核苷酸三联子遗传密码翻译成氨基酸序列、合成蛋白质多肽链过程，是基因表达最后目。mRNAU、CA、G4T、CA、GmRNA3二.遗传密码——三联子mRNA33核苷酸就称为一种密码，也叫三联子密码。翻译时从起始密码子AUGmRNA5’→3’方向持续阅读直到终结密码子，生成一条具备特定序列多肽链。mRNA中只有4种核苷酸，而蛋白质中有20种氨基酸，若以一种核苷酸代表一种氨基酸，只能代表4种(41=4)。若以两种核苷酸作为一种密码（二联子），能代表42=16种氨基酸。而假定以3个核苷酸代表一种氨基酸，则可以有43=64种密码，满足了编码20种氨基酸需要。50-60年代破译遗传密码方面三项重要成果：Paul Zamecnik进行蔗糖梯度沉淀并分析各种细胞成分中放射性蛋白质。如果注射后经数小时（或数天）收获肝脏，所有细胞成分中都带有放射性标记蛋白质；如果注射后几分钟内即收获肝脏，那么，放射性标记只存在于具有核糖体颗粒细胞质成分中。FrancisCrickAUGC（核酸201：（诱导核苷酸插入或丢失T4rII同、没有功能蛋白质。实验2：400RNA1200合。实验3：tRNAAA-tRNAmRNAATP、GTP新生肽链氨基酸顺序由外加模板来决定。1961Nirenbergpoly（U）作模板时发现合成了多聚苯UUU（A）做模板分别得到多聚脯氨酸和多聚赖氨酸。实验4：

以特定序列共聚物为模板指引多肽合成。以多聚二核苷酸作模板可合成由2个氨基酸构成多肽，5’…UGUGUGUGUGUGUGUGUG…3’,不论读码从UGUGU（Cys）及GUG（Val）5：以共聚三核苷酸作为模板可得到有3种氨基酸构成多肽。如以多聚（UUC）35’…UUCUUCUUCUUCUUC…3’或 5’…UCUUCUUCUUCUUCU…3’或 5’…CUUCUUCUUCUUCUU…3’分别产生UUC（Phe）UCU（Ser）或CUU（Leu）.25’…GUAGUAGUAGUAGUA…3’或5’…UAGUAGUAGUAGUAG…3’5’…AGUAGUAGUAGUAGU…3’UAG（Val）或AGU（Ser）6：以随机多聚物指引多肽合成。Nirenberg等及OchoaAC8CCCCCACACACCCAAACAAAC、AAA，获得由AsnHisPro、GlnThr、Lys6氨基酸“活化”与核糖体结合技术。如果把氨基酸与ATP和肝脏细胞质共培养，氨基酸就会被固定在某些热稳定且可溶性RNA分子上。现将氨基酸活化后产物称为氨基酰并把催化该过程酶称为氨基酰合成（aminoacyl-tRNA 以人工合成三核苷酸如UUU、UCU、UGU等为模板，在含核糖体、AA-tRNA反映液中保温后通过硝酸纤维素滤膜只有游离AA-tRNAAA-tRNA当体系中带有多聚核苷酸模板时，从大肠杆菌中提取核糖体经常与特异性氨基酰-tRNApoly（U）和Phe-tRNAPhePhe-tRNAPhe相结合。4613tRNA结肽链合成。由一种以上密码子编码同一种氨基酸现象称为简并（degeneracy），相应于同一氨基酸密码子称为同义密码子（synonymouscodon）。三．密码子和反密码子互相作用密码子互相作用。1966Crickhypothesis），解释了反密码子中某些稀有成分如I2Wobblehypothesis①任意一种密码子前两位碱基都与tRNAanticodon中相应碱基形成Watson-Crick碱基配对。ACUGInosine（I）为反密码子第一位时，能辨认三个密码子。③如果数个密码子同步编码一种氨基酸，凡是第一、二位碱基不相似密码子都相应于各自tRNA。32tRNA61子。四．tRNAtRNA但为将每个三联子密码翻译成氨基酸提供了接合体，还为精确无tRNAPA

起部位通过密码子：反密码子配对与mRNA3’正好将所转运氨基酸送到正在延伸多肽上。代表相似氨基酸tRNA。在一种同工tRNAtRNA氨基酰-tRNA1、tRNA三叶草型二级构造（acceptor重要由链两端序列碱基配对形成杆状构3’3-43’3CCA3’2’自由羟基（—OH）酰化。TφC3φtRNA（dihydrouracil）命名。tRNA762.5×104tRNA74-95tRNA70tRNA2193’端邻近部位浮现频率最高，且大多为嘌呤核苷酸。这对于维持反密码子环稳定性及密码子、反密码子之间配对是很重要。2．tRNAL形三级构造tRNALAA-tRNATφCtRNALmRNA3．tRNA转移至另一种构造上极为相似核酸分子mRNA被翻译成单个氨基酸三联子密码形式存在，在这里起作用是解码机制。4．tRNA种类tRNAtRNA能特异地辨认mRNA模板上起始密码子tRNA叫起始tRNA，其她tRNA统称为延伸tRNA。原核生物起始tRNA携带甲酰甲硫氨酸（fMet），真核生物起始tRNA携带甲硫氨酸（Met）。tRNAtRNA称为同工tRNA，同工tRNAAA-tRNAtRNA校正tRNA分为无义突变及错义突变校正。在蛋白质构造基因中，一种核苷酸变化也许使代表某个氨基酸密（UAGUGA合成无功能或无意义多肽，这种突变就称为无义突变。五AA-tRNA合成酶 是一类催化氨基酸与tRNA结合特异性酶其反映式如下：它事实上涉及两步反映：第一步是氨基酸活化生成酶-氨基酰腺苷酸复合物。AA+ATP+酶（E）→E-AA-AMP+PPi第二步是氨酰基转移到tRNA 3’末端腺苷残基上，与其2’3’-羟基结合。E-AA-AMP+tRNA→AA-tRNA+E+AMPAA-tRNAtRNAAA-tRNAtRNAtRNA认构造上非常相似氨基酸。有两道关口：

Thefirstfilteristheinitialbindingofaminoacidtotheenzymeanditsactivationaminoacyl-AMP.Thesecondfilteristhebindingofincorrectaminoacyl-AMPproductstoaseparateactivesiteontheenzyme.mRNARNA（ribosomal01061012。核糖体和它辅助因子为蛋白质合成提供了必要条件。核糖体构成2/3RNA1/3RNA3/52/5可以解离为两个亚基，每个亚基都具有一种相对分子质量较大rRNA21S1……S21达，大亚基由33L1……L3349332、rRNA3.核糖体功能5mRNAtRNA（A）、结合或接受肽基tRNA）及形成肽键部位（转肽酶中心），此外尚有负责肽mRNA责对序列特异辨认过程，如起始位点辨认和密码子与反密码子互tRNAAA-tRNA、肽基-tRNA结合等。A位、P位、转肽酶中心等重要在大亚基上。70S/80S70S/80S映体系中，核糖体解离或结合取决于Mg2内，Mg210-3mol/L70S70S

2、Initiation.ThemRNAbearingthecodeforepolypeptidebindstothesmallribosomaltandtotheinitiatingaminoacyl-tRNA.mRNA3、它从mRNA5’末端向3’末端阅读密码子，至终结子时合成一条完Elongation.Peptidebondsareformedinthisstag整多肽链。mRNA上核糖体多少视mRNA长短而定，普通40个核苷e.酸有一种核糖体。4、七.信使核糖核酸mRNAmessengerribonucleicacidDNAdeoxyribonucleicacid.虽然mRNAmRNA核和真核生物细胞内是不同。八、蛋白质生物合成20AA-tRNA10tRNArRNAmRNA10090%左右用于生物合成反映能量。细菌220万个tRNAs约占大肠杆菌干重35%。10051.蛋白质生物合成重要环节：翻译起始——核糖体与mRNA-tRNAmRNA5’3’NCmRNA离，准备新一轮合成反映。重要分为五步1、ActivationofAminoAcids(Thisreactionsplaceinthecytosol,notontheribosome).

TerminationandRelease.Completionof thetidechainis signaled byaterminationcodonthemRNA.5、FoldingandPost translationalProcessing.肽链延伸分为三步① Bindingof an incomingaminoacyl-tRNA.② Peptidebond formation.③ Translocation.与蛋白质合成关于因子起始因子Initiation factor（IF）延伸因子Elongation终结因子原核中有RF1-3RF-1 认 UAA和UAG;RF-2 辨认UAA和UGA; RF-3 仅能增进RF-1和RF-2GTPRF33、蛋白质合成起始30S核糖体小亚基模板mRNAfMet-tRNAfMet起始因子GTP50SMg2+合成起始可分为三步：1、30S核糖体小亚基与起始因子IF–1和IF-3相结合，诱发模板mRNA与小亚基结合。230S小亚基、起始因子IF–1IF-3mRNAGTP-IF-2fMet-tRNAfMet密码子配对。350SGTPGDPPi。释放三个起始因子。表27-9真核细胞中参加翻译起始蛋白质因子及其功能真核因子功能eIF2增进Met-tRNAMet40SeIF2BeIF340S进行。eIF4A具备RNA解旋酶活性，解除mRNA模板次级构造并使之与40S小亚基结合，形成eIF4F复合物。eIF4B与mRNA模板相结合，协助核糖体扫描模板序列，定位AUG。eIF4EmRNA5’eIF4FeIF4E复合物。eIF5促使各种蛋白因子与40S小亚基解体，以此协助大小亚基结合形成80核糖体，形成翻译起始复合物。eIF680S40S60S个亚基。4、肽链延伸肽链延伸基本规定是：有完整起始复合物， 有氨基酰-tRNA， 有延伸因子EF-Tu, EF-Ts和EF-G， 有GTP肽链延伸也可被分为三步：-tRNA-tRNAGTP-EF-Tu-tRNA-GTP-EF-Tu

70SAGTPGDP-EF-Tu复合物。第二步，肽键形成。 肽键形成之初，两个氨基酸依然分别与各自tRNA相结合，依然分别位于A位点和P位点上A位点上氨基（第二个氨基酸中α-氨基作为亲核基团取代了P位点上并与起始氨基酸中COOH基团形成肽键。本反映也许由peptidyltransferase催化。第三步，移位（translocation）。核糖体向mRNA3’一种密码子，使得带有第二个氨基酸（现已成为二肽）tRNAAPtRNAPEAEF-G（translocase）GTP5、肽链终结当终结密码子进入核糖体A位点时，在释放因子RF1-3作用下：tRNA；tRNA；70S30S50S6、蛋白质合成抑制剂mRNA（氯霉素AA-tRNA（四环素类AA-tRNA与核糖体结合而产生错读（链霉素、新霉素、卡那霉素等），或作为竞争性抑制剂抑制蛋白质合成。fMet-tRNAmRNApoly（U）板，则除苯丙氨酸（UUU）外，异亮氨酸（AUU）也会掺入。对链30SAA-tRNAAAA-tRNAAA-tRNA3’羧基端挂了一嘌呤霉素。3人类医学，后两种则很少在医学上使用。---------------------------------------第四讲DNA、RNA和蛋白质代谢DNADNARNA（酶）RNA，才可以得到表达。DNARNATURNA肩负着贮藏及转移遗传信息功能，又能作为核酶直接在细胞内发挥代谢功能。蛋白质是生物信息通路上终产物，一种活细胞在任何发育阶段都需要数千种不同蛋白质。因而，活细胞内时刻进行着各种蛋白质合成、修饰、运转和降解反映。一、核苷酸合成与代谢核苷酸是DNA和RNA前体是细胞内化学能流通领域中载体（ATP，GTP）NADFAD、S-adenosylmethionine及 CoenzymeA等重要成分。在糖代谢中也有重要作用，如生成UDPG和CDP-diacylglycerol等cAMP,cGMP还是第二信使1、De Novo嘌呤核苷酸生物合成始于PRPP（Phosphoribosyl1-pyrophosphate）PRPPC-15-phosphoribosylamine。另一方面，把甘氨酸中三个基团加到PRA上。第三，由N10-甲基四氢叶酸提供一种甲基。

N第五，脱水环化形成咪唑环。第六，羧基化4位碳原子上。5N10-甲基四氢叶酸提供一种甲基。第十一，脱水环化，形成嘌呤IMP。参加合成AMP是①腺苷琥珀酸合成酶和②腺苷琥珀酸裂解酶。参加合成GMP是③IMP脱氢酶和④XMP-谷氨酰胺酰胺转移酶 嘌呤核苷酸合成中反馈调节3．嘧啶核苷酸是由天门冬酰胺、PRPP形成然后才与核糖-5-磷酸相连。这个反映需要氨基甲酰磷酸（Carbamoylphosphate）。4．核苷单磷酸转化为核苷三磷酸ADP化。ATP核苷二磷酸可通过一种公用核苷二磷酸激酶被进一步磷酸化生成核苷三磷酸。5．核糖核苷酸（ribonucleotides）是脱氧核糖核苷酸dNTP都直接来自于NDP）。这个反映很特殊，由于核糖上还原反映发生于一种没有活化碳原子上。催化该反映酶是核糖核苷酸还原酶。大肠杆菌核苷酸还原酶有两大特性，它生物学活性和底物特异性同步受效应子（effectormolecules）影响。每个R1ATPdATPdATPUDPCDPdTTPGDP还原反映优先进行。核糖核苷酸还原反映重要过程还原酶R2X˙，向核糖3’位碳原子上H3’位自由基。R1-SH2’-OHH基团。脱水后，3’2’O+基团。R1-SH2’-CH+提供一种H2’上C˙-OHR2X-H2’上C-OHdNDPedCDPdUMP，其直接前体是dUMP，由胸苷酸合酶（thymidylatesynthase）将dUMP转化为dTMP；反映中甲基来自于N5，N10-Methylene-tetrahydrofolate。7、嘌呤和嘧啶降解后分别生成UricAcid和Urea。嘌呤核苷酸降解5’-核苷酸酶（5’-nucleotidase）Adenosine-monophosphateAdenosine，或从GMPGuanosine。二、在Adenosinedeaminase作用下生成Inosine；三、在nucleosidase作用下生成Hypoxanthine或由Guanosine生成Guanine；XanthineoxidaseGuaninedeaminaseXanthine；五、在Xanthineoxidase作用下生成Uric acid嘌呤代谢突变会引起重要疾病。adenosinedeaminaseT-淋巴和BADdATP100dATP了别的dNTP在T-淋巴细胞中合成。许多化疗（chemotherapy）

AzaserineAcivicinGlutamine胸苷合成中重要抑制剂有fluorouracil（氟脲）、methotrexate（氨甲基叶酸）aminopterin（氨喋呤）。氟脲自身不是thymidylatesynthase抑制剂，但它在细胞中被转化为TSdihydrofolatereductasedihydrofolate100二、氨基酸代谢CHO4N1.5×1010t，2×108—5×108t。全世界氮肥厂每108t就不复存在了。重要有两步反映：⑴Glutamate+ATP→γ-glutamylphosphate+ADP⑵γ-Glutamylphosphate+NH4+→glutamine+Pi+H+总结：Glutamyl+NH4++ATP→glutamine+ADP+Pi+H+因而，谷氨酰胺合成酶是氮代谢中重要调控位点。12（50kDa）聚合而成，其活性既通过构象变化，也能通过共价修饰方式得到调节。Alanine，Glycine6glnGS397（加上AMP），该酶更容易受变构抑制剂反馈调节。氨基酸生物合成高等动物不能合成大概一半氨基酸，只能从食物中直接获取这些必须氨基酸（Essential）。表18-1人体必须氨基酸(*.哺乳期至幼儿期必须)表22-1氨基酸合成六条重要途径氨基酸脱羧基化后生成有机胺。许多重要神经递质都是胺或另一方面生代谢产物。Tyrosinedopamine（多巴胺epinephrine（肾上腺素），norepinephrine，统称为Catecholamines（儿茶酚胺）。精氨酸降解产生NO˙(NitricOxide)。80NO1mm。三、氨基酸及功能蛋白质合成后修饰蛋白质刚刚被合成时，都以原核）或真核）formylgroupMetNC50N-乙基化。15-30signalpeptides，负责指引蛋白质在细胞中精准定位。3.特定氨基酸修饰。氨基酸糖苷化氨基酸异戊烯化（AdditionofIsoprenylGroups）6.有些蛋白质还要与辅基(prostheticgroups)相结合；CytochromeC（heme）相结合才有功能。此外，Acetyl-CoABiotin功能。四、蛋白质运送和降解1、绝大某些被运入ER内腔蛋白质都带有一种Signal peptide该序列经常位于蛋白质氨基末端长度普通在13-36个残基之间有三个特点：（1）普通带有10-15个疏水氨基酸；（2）经常在接近该序列N-端疏水氨基酸区上游带有1个或数个带正电荷氨基酸；（3）在其C-末端接近蛋白酶切割位点处经常带有数

个极性氨基酸，离切割位点近来那个氨基酸往往带有很短侧链（Ala或Gly）。RibosomeERN（涉及核糖体）就recognitionGTP（此时新生肽普通长约个残基左右）。ERSRP-receptorribosome-receptor（GTP-SRP-ribosome-mRNA-新生肽ERpeptidetransportcomplexERRoughER高尔基体，再分别送到各个亚细胞位点。蛋白质中核定位序列普通不被切除。蛋白质核定位是通过各种蛋白共同作用来实现。Importin(α,βSRPNLS-ImportinRan-GTPase细菌细胞内也存在类似蛋白质运转系统。7、蛋白质降解是一种有序过程。ATP（Lon）来实现。当细胞中存在有错误或半衰期很短蛋白质时，ATP。在真核生物中，蛋白质降解需要Ubiquitin76UbiquitinATP1×106）。N-端第一种残基对蛋白质稳定性有重要影响。五、DNA代谢无论是只具有一对染色体原核细胞还是带有多对染色体真核细生。因此说，DNA㈠、DNA复制依照反映阶段和所需不同酶类，DNA复制可被分为三个阶段，即复制起始、延伸和终结。每个DNA复制独立单元被称为复制子（replicon），重要涉及复制起始位点（Origineofreplication）和终结位点（terminus）生物整个染色体上普通只有一种复制起始位点。DNA20DNAreplicasesystemreplisome。Helicase，任何DNAATPDNA链。Topoisomerase，重要功能是消除DNA解链过程中所产生扭曲力。DNA结合蛋白，使新解链DNA保持稳定构造。Primases，为DNA复制提供RNA引物。DNApolymerases，合成新生DNA链，切除RNA引物。DNALigases，使新生DNA链上缺口（3’-OH, 5’-p）生成酸二酯键。DNA大肠杆菌中复制起始位点是OriC，全长245Bp，该序列在所有细菌复制起始位点中都是保守。DNA复制起始中重要环节20DnaAOriC49相结合；313DNADnaBDnaCDnaBDNADNA复制。当细胞中存在足够SSBDNAgyrase非常高。整个DNA复制过程中，只有复制起始受细胞周期严格调控"Oncein eachcell cycle。"DNADNAOriC11GATC构造（普通说来，256bpGATC）DNA

成后，母链及时被甲基化（称为hemimethylated）oriCDamDnaADNA制。复制起始也许还受ATPDnaA只有与oriCDNADNA重要涉及两个不同但互相有联系事件，即前导链和滞后链合成。由DNAhelicase解开双螺旋，由拓朴异构酶消除DNA链上扭曲力，SSB结合使DNA单链稳定。前导链合成：由DnaG（primase）在复制起始位点附近合成一种10-60ntRNA引物，然后由polII把dNTP加到该引物上。Okazakifragments，消除RNADNApolIDNADNALigaseDNAterminusregion（ter20bp）Ter只能进入，不能出来。TerTer-Tus（terutilizationsubstance）来完毕。真核细胞DNA复制比大肠杆菌更复杂真核生物origin of replication被称ARS-autonomouslyreplicatingsequencesYeastreplicators500replicators17㈡、DNA损伤修复错配修复（mismatch Repair）DNA乎完全都被修正，充分反映了母链重要性。碱基切除修复（Base-ExcisionRepair）DNAgylcosylases能特异性辨认常用DNA损伤（如胞嘧啶或腺嘌呤去氨酰化产物）并将受损害碱基切除。去掉碱基后核苷酸被称为AP位点（apurinicor apyrimidinic）。细胞中最常UracilGlycosylase就能特异性切除细胞中去氨基胞嘧啶。核苷酸切除修复（nucleotide-excisionrepair）DNA键，由核苷酸切除修复系统负责进行修复。DNA（Directrepair）㈢、DNA转座DNA转座，或称移位（transposition），是由可移位因子（transposableelement）DNA1． 转座子分类和构造特性简朴转座子转座子（transposon，Tn）是存在于染色体DNA上可自主复制和移位基本单位。最简朴转座子不具有任何宿主基因而常被称为插入序列（insertionDNA10ISIS存在单元，带有介导自身移动蛋白。（composite性基因（或其她宿主基因）转座子，其两翼往往是两个相似或高ISIS动，由于它们功能被修饰了，只能作为复合体移动。2、转座作用机制转座时发生插入作用有一种普遍特性，那就是受体分子中有一段很短（3-12bp）、被称为靶序列DNA会被复制，使插入转座子位于两个重复靶序列之间。不同转座子靶序列长度不同，但对于一

IS19Tn35bp转座可被分为复制性和非复制性两大类。在复制性转座中，所移动和转位是原转座子拷贝。转座酶（transposase）和解离酶（resolvase）TnAISMuTn53.转座作用遗传学效应① 体畸变;④转座引起生物进化.六、RNA代谢RNARNADNADNADNARNAmRNA变为多肽中氨基酸信息；rRNA，是合成蛋白质工厂核糖体中重要成分。DNARNADNA与复制是相似。但是，也存在三个重要不同点：转录中不需要RNA引物；B．转录反映普通只用一小段DNA做模板；CDNA2.RNARNA5’→3’RNARNADNARNA3’RNARNA端没有两样，都是-OHDNA--终结子，每个基因或操纵子均有一种启动子，一种终结子。在新生RNARNA5’U3’rU·dAρρ2.0×105NTPNTPRNA结转录。RNARNAATP5’→3’RNARNA3’-OHRNARNA，完毕转录过程。终结过程需要消耗能量，因此，ρb、不依赖于ρ 因子终结GCDNA

GroupII内含子切除体系mRNARNARNA-protein-复合物smallnuclearrebonucleoproteins（snRNP）和smallnuclearRNAs（snRNAs）。已经发现至少有5种snRNAs--U1，U2，U4，U5，U6。第五讲 分子生物学研究法一、 重组DNA技术发展史上重大事件1.40DNA蛋白质，解决了遗传物质基本问题；2.50年代提示了DNA分子双螺旋构造模型和半保存复制机制,解决了基因自我复制和世代交替问题；3.5060功地破译了遗传密码，充分结识了遗传信息流动和表达。年份 事 件产生RNA容易形成发卡式构造；在终结点前面有一段由4-8个A1869FMiescherDNA。构成序列，导致转录产物3‘端为寡聚U。这两种构造特性存在同1944O.T. AveryDNA样决定了转录终结。在新生RNA中浮现发卡式构造会导致RNA聚合酶暂停，破坏RNA-DNA杂合链5’端正常构造。寡聚U存在使杂合链3’端某些1952DNA1953A.D. HersheyM.ChaseJ.D.Watson和F.H.C.CrickDNA浮现不稳定rU·dA区域。3.RNA聚合酶II及转录因子在启动子上装配TFⅡH还参加DNA损伤修复。当RNApolⅡ转录过程中遇到受损伤核苷酸时，TFⅡH能及时启动核苷酸切除修复系统，将损伤修复。ActinomycinDAcridineRNA4.RNA：5’加帽子构造；3’加多聚A除内含子。在GroupI内含子切除体系中，鸟苷或鸟苷酸3’-OH作为亲Intron5’磷酸二酯键发起攻打。

M.Wilkins用X-射线衍射法证明了这一构造。1957A.Kornberg从大肠杆菌中发现了DNA聚合酶I。1958M. Meselson和F. W.Stahl提出了DNA半保存复制型。1959-1960S. OchoaRNARNA，并证明决定了蛋白质分子中氨基酸序列。1961Nirenberg破译了第一相遗传密码；F.Jacob和J.Monod提出了调节基因表达操纵子模型。1964C. Yanofsky和S. Brenner等人证明，多肽链上氨基序列与该基因中核苷酸序列存在着共线性关系。1965S.W. HolleytRNA学家证明细菌抗药性普通由"质粒"DNA1966M.W.Nirenberg，S.OchoaH.G.KhoranaF.H.C.Crick人破译了所有遗传密码。1970H.O.Smith，K.W.WilcoxT.J.Kelley

1983获得第一例<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：ArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%D7%AA%BB%F9%D2%F2&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">转基因植物。性核酸内切酶。H.M.Temin和D.Baltimore从RNA肿瘤病毒中发1984斯坦福大学获得关于重组DNA专利。现反转录酶。1986GMO初次在环境中释放。1972-1973H.Boyer，P.Berg等人发展了DNA重组技术，于72 1988J. D.Watson出"人类基因组筹划"首席科学家。年获得第一种重组DNA分子，73年完毕第一例细菌基因1989DuPont公司获得转肿瘤基因小氧--"Oncomouse"。<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.com199235Article (315kb)Search.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Su1994第一批基因工程西红柿在美国上市。bmit=+%CB%D1%CB%F7+’">克隆。1996完毕了酵母基因组(1.25×107bp)全序列测定。1975-1977F.SangerA.MaxamW.GilbertDNA列测定技术。19775387bpφ1741978初次在大肠杆菌中生产由人工合成基因表达人脑激素和人胰岛素。1980美国联邦最高法院裁定微生物基因工程可以专利化1981R.D. Palmiter和R. L.Brinster获得<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：ArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%D7%AA%BB%F9%D2%F2&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">转基因小鼠；C. Spradling和G. M.Rubin得到<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：ArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%D7%AA%BB%F9%D2%F2&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">转基因果蝇。1982美、英批准使用第一例基因工程药物--胰岛素；Sanger等人完毕了入噬菌体48,502bp全序列测定。

1997英国爱丁堡罗斯林研究所获得<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">克隆羊。基因工程中常用名词：遗传工程--geneticengineering，基因操作--gonemanipulation，基因<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">克隆--gonecloning，DNA--recombinantDNAtechnology，分子<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">克隆--molecularcloning。基因工程重要内容或环节：从生物有机体基因组中，分离出带有目基因DNA将带有目基因外源DNADNA将重组DNA（亦称寄主细胞）之一起增殖。从大量细胞繁殖群体中，筛选出获得了重组DNA胞，并筛选出已经得到扩增目基因。将目基因<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">之在新遗传背景下实现功能表达，产生出人类所需要物质。二、基因操作重要技术原理核酸凝胶电泳(Agarose &Polyacrylamide)某物质在电场作用下迁移速度叫作电泳速率，它与电场强度成正比，与该分子所携带净电荷数成正比，而与分子磨擦系数成反比（分子大小、极性、介质粘度系数等）。事实上呈多聚阴离子状态（Polyanions）。将DNARNA中，它就会由负极→正极移动。在凝胶电泳中，普通加入溴化乙锭（EB）--ethidium 染色，此时，核酸分子在紫外光下发出荧光，肉眼能看到约50ngDNA所形成条带。DNA脉冲电泳技术:PFGE-Pulse-fieldgelelectrophoresis核酸分子杂交技术DNARNA都是在杂交之前，通过毛细管作用或电导作用按其在凝胶中位置原封不动地"吸印"转移到滤膜上。惯用滤膜有尼龙滤膜、硝酸

纤维素滤膜，叠氮苯氧甲基纤维素滤纸（DBM）和二乙氨基乙基纤维素滤膜（DEAE）等。核酸分子杂交实验涉及如下两个环节：将核酸样品转移到固体支持物滤膜上，这个过程特称为核酸印迹(nucleicacid blotting)转移，重要有电泳凝胶核酸印迹法斑点和狭线印迹法(dotandslotblotting)、菌落和噬菌斑印迹法(colonyandplaqueblotting)；DNARNA针进行杂交。因此有时也称此类核酸杂交为印迹杂交。细菌转化DNA，而导致性状特性发生遗传变化生命过程。这种提供转化DNADNADNACaCl2（CompetentMg2+DNADNA对绝大多数hsdR-，hsdM-突变体菌株（k12），每ug DNA可107-108个转化子。DNASangerCambridgeF.Sanger1977DNA①DNA聚合酶可以用单链DNA作为模板，合成精确DNA互补链；3’-末端，从而终结其延伸反映。在DNADNA，引物（特异性引物，如T7，T3，M13DNA和一种ddNTP。惯用Klenow5’→3’外切酶活性。Maxam-GilbertDNADNADNADNA41-2切割反映：碱基特异性修饰；被修饰碱基从核糖环上转移；失去碱基糖环部位发生DNA链断裂。专门用来对核苷酸作化学修饰，并打断磷酸二酯键化学试剂有硫酸二甲酯(dimethylsulphate)和肼(hydrazine)。DNAN7PHDNAC和T1mol/LNacl，那么，只有CDNA用四甲基若丹明(Tetramethylrhodamine)作为荧光剂标记DNADNADNA机检测。DNA(SBH-Sequencingbyhybridization)DNADNADNADNA12-merDNA8-mer48=655368-mer5DNADNAG-TG-A

寡核苷酸矩阵芯片只能用于测定500bp靶DNA；7-mer=bp，8-mer=8000bp。SBH应用：① DNA② DNA③ 可用于检测不同生长发育状态下细胞中特定基因表达状况；④ 可用于检查老式测序技术精确性。基因定点诱变（site-directedmutagenesis）使已<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">DNA工程和蛋白质工程重要手段。盒式诱变(cassette合寡核苷酸诱变两种方式。寡核苷酸引物诱变DNADNAC．PCRG与PCR诱变DNA凝胶滞缓实验(Gel retardation又称DNA迁移率化实验(DNAmobility shiftassay--EMSA)。DNaseI印迹实验（DNaseIfoot 重要环节：① 32PDNARE② 加入细胞特定周期蛋白质提取物，温育；③ DNaseIDNA裂。这一反映中，DNaseI或硫酸二甲酯用量非常核心，要保证一条链只发生一次断裂！④沉淀DNA（涉及与DNA相结合蛋白质）；⑤进行DNA凝胶分析。DNADNA相应于蛋白质结合部位不产生放射性标记条带。甲基化干扰实验(Methylationinterference assay)用DMS解决靶DNA，使平均每条链上只有一种G被甲基化。将局部甲基化DNA与含DNA结合蛋白细胞提取物共温育后进行凝胶缓实验。分离各种DNA条带，并用六氢吡啶切割甲基化残基。果因某个G残基甲基化作用而制止了蛋白质与DNA结合，那么六氢吡啶对这个甲基化G残基切割作用，就只能在没有蛋白质合DNA中观测到。体内足迹实验DMSGDNADNADNADNA三、分子<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">克隆技术1、高质量mRNA制备PromegaPolyATtractmRNAIsolationSystem。将BiotinylatedOligo(dT)引物与细胞总RNAStreptavidin，用磁场吸附与PMPSA-BiotinylatedOligo(dT)-mRNA。cDNAOligo（dT）12-18-merR6，以保证得到全长cDNA；

应选用活性较高反转录酶（Reversetranscriptase）；dCTP；应保证所获得双链cDNA方向性。SuperScript Choice cDNApoly（dT）5’-methylCmcrA-mcrB-菌株。分子<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">克隆重要办法构建cDNA、核DNA差式杂交(differentialscreen(subtractivehybridization)技术；DD-RT-PCR差别分析法(RDAanalysis）；Two-hybridsystem；图位<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">克隆（map-based与染体步移 （genomicDNAWalking）。习惯上，人们用<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">克隆表达由同一物种具备相似基因型生子（monozygotictwins）便属于同一<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">克隆。细胞学上，<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">克隆是指由同一种祖细胞（progenitorcell）分裂而来具备同一遗传背景子细胞群体。DNADNA使之得以自主复制和永久保存过程叫做分子<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">克隆。mRNA50-90%，非常容易被10-2010,00040,000mRNA99%盼望150,000-170,000<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">cDNA10-60<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">克隆子。差式杂交或扣除杂交<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.com

ArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">克隆技术cRNAmRNA3’-末端，都带有一段多聚腺苷酸构造，即普通所说poly(A)尾巴。P.Liang12cDNA3’-端锚定脱氧核苷酸引物5’-T11MN5’-T12MNMT（AG或N（即A、GCT），故MN12DDRT-PCR重要环节：cDNA；5’3’32p-dNTP)；Ⅲ.用DNAXⅣ.回收特异性差别条带；Ⅴ.用同一引物对扩增已回收DNA条带；Northern，SouthernDNAcDNAC.cDNA(Representationalditterenceanalysis)RDAPCRDNAcDNAcDNA4256bp代表群（representation）保证绝大某些遗传信息能被扩增。每T减D72℃复性与延伸，94℃20个PCR循环，PCR产物特异性和所得探针纯度非常高。D.酵母双杂交体系Two-hybridsysteminteraction互相作用陷井90protein）互相作用基因。基本原理：真核生物转录因子大多是由两个构造上分开、功能上独立构造域GAL4N1-147aaDNABDC是转录激活域（AD）。普通状况下，AD能与GAL4DNA（UAS）相结合，而此时，AD若用基因工程办法，将GAL4 AD和BD分别<A&NBSP;CLASS=’CHANNEL_KEYLINK’&NBSP;HREF=’HTTP：.comArticleSearch.asp?Field="Title&ClassID=&keyword=%BF%CB%C2%A1&Submit=+%CB%D1%CB%F7+’">ADBD域连成一种功能基因。重要实验过程：选取缺失GAL4-SFY526HF7c；构建带有GAL1 UAS-启动-lacZ（His3）转化载体；把已知靶蛋白质编码基因克隆到pGBT9cDNApGAD424cDNA从大肠杆菌中分别提