集中空调通风系统微生物检验技术讲义

集中空调通风系统微生物检验技术

主题室内空气中的微生物微生物在空气中的传播集中空调通风系统微生物卫生指示菌的检测室内空气中的微生物1、来源人的生命活动人的劳作活动室内环境地面来源2、传播附着于尘埃附着于鼻腔和口腔喷出的飞沫小滴上附着于飞沫表面蒸发后所形成的“飞沫核”上3、种类分类举例细菌革兰氏阴性细菌耶尔森氏菌属鼠疫耶尔森氏菌军团菌属嗜肺军团菌肠杆菌科克雷伯氏菌，枸橼酸杆菌，变形杆菌鲍特菌属百日咳杆菌革兰氏阴性厌氧无芽孢杆菌无菌性肺炎立克次氏体Q热立克次氏体衣原体鹦鹉热衣原体革兰氏阳性细菌葡萄球菌属金黄色葡萄球菌链球菌属肺炎链球菌分枝杆菌属结核分枝杆菌棒状杆菌属白喉棒状杆菌需氧芽孢杆菌属炭疽杆菌支原体肺炎支原体真菌（酵母菌、霉菌）青霉属、枝孢菌属、曲霉属、金黄担子属、链格孢属等病毒RNA病毒小RNA病毒科柯薩奇病毒埃克病毒鼻病毒冠状病毒科人呼吸道冠状病毒正粘病毒科流感病毒副粘病毒科腮腺炎病毒，麻疹病毒，副流感病毒DNA病毒腺病毒科腺病毒动物尘螨等原生动物、昆虫肢体残留物植物花粉集中空调通风系统微生物卫生指示菌的检测冷却水、冷凝水中的嗜肺军团菌空调送风中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌空调风管表面细菌总数、真菌总数中央空调与军团病世界上的多起军团病的暴发与中央空调冷却塔有关。冷凝水同样为军团菌的生长提供一个适宜的环境。军团菌伯杰氏细菌分类最新归为一个科，一个属，共有42个种，60多个血清型。其中有22种是从病人分离的。嗜肺军团菌占22种引发病例的绝大多数（90%）。米克戴德军团菌占6-8%，其它约占2%。另外较主要的还有博兹曼军团菌、杜莫夫军团菌、长滩军团菌、约旦军团菌、高尔曼军团菌、非利军团菌、阿尼沙军团菌、詹姆斯敦军团菌、红光军团菌及橡树岭军团菌等。嗜肺军团菌目前已发现有15个血清型，从病人分离最多的是1型。军团菌分布

极其广泛，但都与水有关。野外的池、溪、河、泉水都能分离出此菌，在生活环境中的自来水、贮水箱水、淋浴水、桑拿浴水、锅炉房排气管的冷凝水中都有此菌存在。特别是空调系统冷却塔、循环贮水池、冷凝水几乎是此菌的“长住地”。军团菌抵抗力

在无芽孢细菌中此菌属对自然环境因素抵抗力较强。能在自然水体和空调、水暖设备的水中长期存活。在普通自来水中可存活400天以上，在60℃左右甚至在火山口附近的水塘里都能发现军团菌的踪迹。波恩大学的研究人员发现该菌是医院下水道的“生物膜”组成成分之一。对常用消毒剂敏感。军团菌生物学性状革兰氏染色阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，菌体大小为0.3-0.9X2-20微米，有一至数根极或次极鞭毛，其细胞壁中侧链脂肪酸占有高比例（80%-90%，一般为20%），这点与其它革兰氏染色阴性杆菌不同。军团菌培养物特性1、军团菌的生长繁殖，除一般细菌要求的营养外，需要半胱氨酸和铁盐。2、钠对其生长不利。3、对PH的要求严格，培养接种前培养基的PH要控制在6.9～7.0。（有机缓冲剂ACES，PH很稳定，不用调都可以。）4、最适生长温度35℃，生长温度范围25～42℃。培养物特性5、专性需氧6、代谢很慢7、菌落特点通常在3天（72小时）可见小菌落，4天（96小时）则发育成圆形，边缘整齐，表面稍隆起，光滑、湿润，在黑色培养基的背景下，呈乳白色微带蓝灰的典型军团菌菌落，此时菌落直径一般可达2～３mm。菌落有光泽，粘稠，用接种环可拉起粘丝。培养物特性军团菌属的典型生物学共性有8项：BCYE琼脂上生长；血琼脂上不生长；革兰氏染色阴性；生长需要L-半胱氨酸；硝酸盐还原阴性；脲酶阴性；不发酵糖；过氧化氢酶阳性军团菌的检验程序

采样样品富集样品处理

BCYEα或GVP琼脂平板上两天以后生长的菌落作G染色次日生长的菌落弃去球菌和G+杆菌都不是军团菌G-杆菌

缺半胱氨酸的BCYEα琼脂BCYEα琼脂

生长的不是军团菌不生长生长

极可能是军团菌,应作玻片凝集及全面鉴定

军团菌的检验程序1、采样2、富集：膜过滤法、离心法3、处理：直接涂布、酸处理、热处理4、镜下观察：（菌落形态、革兰氏染色）5、菌落验证6、鉴定显微镜观察菌落生长情况，初步在BCYE琼脂培养基上生长的菌落为毛玻璃样，具有多型性，一般革兰氏染色不易着色的阴性小杆菌。军团处菌病桂的流凶行病隙学传染屿源：被遣污染末的各闹种水头源。传播滑途径：含序军团撑菌的湾气溶参胶通饱过空觉气由尸人直我接吸选入肺氏泡发懂病，愧这是段传播盲军团奇菌病吓最主遗要的长形式偷。但秧只<生5um的气狸溶胶盯微粒贿才能虚进入晌肺泡摊引起电发病凶。能产职生气盗溶胶朋的情吉况有禁许多舞，较漠重要探的是暗空调韵冷却潜塔，市已证托明这报是多苦次军披团菌悔病爆遇发流瓣行的贵污染鄙源。迷生活践饮用范供水垮系统惨带菌醒也已括证明缝是许晚多医以源性投爆发蕉流行俗的来嘉源。老因营军团舞菌病卸从人谈到人忆的传策播从秃未发诱生过家，故探本病胡无需评隔离爱。军团雪菌病弹的流龟行病腰学易感木人群警：一般婶来说抄，生轻活用桶水中庙污染泻了军代团菌惩，对秒于免门疫力漠正常鹊的健修康人利，其规感染班军团挑菌的瞒危险市性是增很小份的。果但如优果菌所株的详毒力夜增强挠，或标者年测老体丛衰者豪或有困慢性啦消耗团性疾徒病等笨抵抗妻力低挽下的男人，迷尤其氏是细够胞免巧疫力制低下除者（常如各逆种癌旋症、旬肾衰知、器血官移雷植患颗者、两爱滋径病等沾），户即引四起发况病或干流行潮。恋现认沈为军放团病甲是人消畜共年患病虏。流行默季节：夏召、秋完季（末６－拍１０阴月）军团苹菌病府的流赵行病陵学发病屈率：WH旅O估计恳为1债2/屈10投万，罗医源伍性肺均炎占择第二舒位，爸25付%，CA略P欧盟绢资料民约1于0%茶。死亡摸率：未旱经正范确治遍疗时蒸高达横20驼%。串本病狭分布灭于全暮世界娘，但灯流行熔和散沾发病屑例多复见于孟美、滑欧各山国。军团唉菌病军团牢菌病忧，共蚀有2讽种临愧床类掠型a、轻型Po吐nt东ia捧c粥fe扰ve纠rb、重症如肺炎拔型军团佣病的醒一般宗临床见症状遭特征咳嗽拍9慕0%发热移9库9%呼吸缩慧困难喇5凭0%胸痛唤3歼5%头痛泼3刚5%肌肉猪疼痛柴3节5%腹泻锯3期5%神经成症状须3凯5%军团投菌病席的预探防和屿治疗特效馆药：红霉斯素、利节福平界、阿碗奇霉狗素等友脂溶问性高董的抗尚生素只有卖能穿供透细备胞膜跟而达睬到胞假内高杰浓度想的抗艇生素鸣才有链治疗确作用信。预防浑措施唯有麻加强售水源再管理凑，因只为没旱有疫悉苗，租空气葡传播依也难旨以控梳制。化学否消毒晕剂：盘长期度高浓买度才孙有效挺，但败易腐扇蚀管毙道，歪只消争毒表粱面。仍如二皆氧化逮氯等排。物理润消毒咱：如粮紫外惕照射异法，深热冲夹洗法奥等。生物威消毒财剂：莫目前淹最好亭方法程，其汇消毒狼效果慰好，冰但费筋用高弹。一些称国家廊关于竿军团怠军控北制值刮的规炎定各类标准水中军团菌安全值的规定欧洲E.W.G.L.标准冷却塔系统：军团菌≤1，000cfu/l总菌数≤10000cfu/ml荷兰自来水标准自来水系统：军团菌≤50cfu/l新加坡标准冷却塔、喷泉系统：军团菌≤10，000cfu/l日本厚生劳动省标准温泉水标准：军团菌≤100cfu/l澳大利亚标准冷却塔系统：军团菌≤10，000cfu/l总菌数≤100000cfu/ml中国大陆卫生部标准冷却水、冷凝水：嗜肺军团菌不得检出β-锄溶血童性链调球菌定义灵：经（演35津~3蚂7）桐℃，希（2擦4~蹈48座）h培养猪，在粗血平避板上题形成职呈灰副白色侦，表辆面突昌起直秧径的聚细小浇菌落壳，菌像落透圆明或蹄半透杏明，携表面腰光滑铸有乳肥光；亲菌落怖周围作有明凭显的叉（2盖~4钳）mm界限绣分明取、完恋全透咐明的拆的无信色溶筝血环羊。镜医检为确革兰芳氏阳院性无抽芽孢始球菌寺，圆放形或越卵圆避形，亩呈链陵状排喜列。β-义溶血叹性链维球菌β-过溶血秘性链任球菌垦属链菌球菌泛属，档血清书型为藏A、今B、时C、崖E、未F、劣G、差H、躁K、傍L、农M、黑O、逗P、裤Q、宵R、坚S、疤T（回C多动糖体什分型千），赖其中呈对人启致病秀菌约个90掀%属料A群雄。注意粘与甲划型和急丙型称链球为菌的颂区分泥。空调非送风短中的暮细菌洽总数定义用仪臂器法缓采集先集中秒空调驶通风革系统旗送风土中的血细菌赌，计夹数在令营养潜琼脂毙培养轿基上献经3悉5~阅37抹℃、蝴48话小时团培养溜所形懂成的伙菌落符数，壤以每钥立方奥米空票气中致菌落毁形成殿单位划（cf棚u/周m3)报告铺。空调蓬送风镰中的杯真菌荡总数定义用撞妥击式猛空气捆采样柳器法鸟采集惩室内滔空气富，计谨数在侄沙氏垮琼脂都培养吵基上影经2尚8℃莲(5性~7挑)天佩培养科所形扔成的项菌落毒数，帖换算精为每束立方朴米室暮内空挥气中棍真菌惭总数昼，以cf并u/膏m3报告睛。空调暮风管驼细菌搂总数浸和真奥菌总凯数检羊测原理施：通嚷过擦剧拭法梁或机兄器人荡采样婚法，驱采集俭风管汉表面踢单位嫂面积站(5场0cm2)的微予生物龙，得晴出空斥调风倾管细伙菌总机数和畅真菌父总数骗，以cf睛u/轰m2报告空调郊风管岭细菌倦