第十单元第6课时基因工程的基本工具和基本操作程序课件-2023届高三生物一轮复习

课标要求1.阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三

种基本工具。2.阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的筛选与获取、基因表达载

体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定等步骤。3.按照实验操作步骤，进行DNA的粗提取与鉴定实验。4.利用聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段并完成电泳鉴定，或运用软件进行

虚拟PCR实验。基因工程的基本工具和基本操作程序第6课时考点一重组DNA技术的基本工具考点二基因工程的基本操作程序考点三DNA的粗提取与鉴定和DNA片段的扩增与电泳鉴定内容索引重温高考

真题演练重组DNA技术的基本工具考点一

1.基因工程的概念(1)手段：按照

，通过

等技术，赋予生物新的遗传特性。(2)目的：创造出更符合人们需要的新的

和

。(3)水平：

水平。由于在DNA分子水平上进行设计和施工，因此又叫作

技术。梳理归纳

夯实必备知识人们的愿望转基因生物类型生物产品分子重组DNA拓展基因工程的理论基础2.重组DNA技术的基本工具(1)限制性内切核酸酶(也称“限制酶”)原核生物数千特定核苷酸序列磷酸二酯键黏性末端(2)DNA连接酶磷酸二酯键大肠杆菌黏性末端黏性末端(3)载体环状双链DNA分子噬菌体有一个至多个自我复制受体DNA标记(1)源于选择性必修3P71“旁栏思考”：①原核生物中存在限制酶的意义是什么？提示原核生物中限制酶的作用是切割外源DNA以保证自身安全，防止外来病原物的危害。②限制酶来源于原核生物，为什么不能切割自己的DNA分子？提示限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。(2)源于选择性必修3P72“旁栏思考”：DNA连接酶和DNA聚合酶

(填“是”或“不是”)一回事。原因是：①DNA连接酶连接的是

，而DNA聚合酶是把单个的

连接到已有的DNA片段上。②

起作用时需要以一条DNA链为模板，而

不需要模板。不是两个DNA片段脱氧核苷酸DNA聚合酶DNA连接酶延伸应用(1)不破坏目的基因原则：如图甲中可选择PstⅠ，而不选择SmaⅠ。(2)保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则：质粒作为载体必须具备标记基因，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中不选择SmaⅠ。图解限制酶的选择原则延伸应用(3)确保出现相同黏性末端原则：通常选择与切割目的基因相同的限制酶，如图甲中PstⅠ；为避免目的基因和质粒自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶。图解限制酶的选择原则考向一限制酶和DNA连接酶1.(2022·长春市高三期中)下表为常用的限制性内切核酸酶(限制酶)及其识别序列和切割位点，由此推断以下说法中，错误的是考向突破强化关键能力注：Y为C或T，R为A或G。限制酶名称

识别序列和切割位点限制酶名称识别序列和切割位点BamHⅠG↓GATCCKpnⅠGGTAC↓CEcoRⅠC↓AATTCSau3AⅠ↓GATCHindⅡGTY↓RACSmaⅠCCC↓GGGA.HindⅡ、SmaⅠ两种限制酶切割后形成平末端B.Sau3AⅠ限制酶的切割位点在识别序列的外部C.BamHⅠ和Sau3AⅠ两种限制酶切割后形成相同的黏性末端D.一种限制酶一定只能识别一种核苷酸序列√限制酶名称

识别序列和切割位点限制酶名称识别序列和切割位点BamHⅠG↓GATCCKpnⅠGGTAC↓CEcoRⅠC↓AATTCSau3AⅠ↓GATCHindⅡGTY↓RACSmaⅠCCC↓GGGHindⅡ、SmaⅠ两种限制酶沿着中轴线切口切开，切割后形成平末端，A项正确；Sau3AⅠ限制酶识别GATC序列，切割位点在识别序列的外部，B项正确；BamHⅠ限制酶识别GGATCC序列，Sau3AⅠ限制酶识别GATC序列，切割后形成相同的黏性末端GATC，C项正确；HindⅡ能识别GTCAAC，也能识别GTTAAC，D项错误。限制酶名称

识别序列和切割位点限制酶名称识别序列和切割位点BamHⅠG↓GATCCKpnⅠGGTAC↓CEcoRⅠC↓AATTCSau3AⅠ↓GATCHindⅡGTY↓RACSmaⅠCCC↓GGG2.第三代疫苗——DNA疫苗是指将编码保护性抗原蛋白的基因(如图甲)插入到适宜的质粒(如图乙)中得到的重组DNA分子，将其导入人体内，在人体细胞内表达的产物可直接诱导机体免疫应答，且可持续一段时间。限制性内切核酸酶的切点分别是BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ。下列分析错误的是A.构建DNA疫苗时，可用BglⅡ和

Sau3AⅠ切割目的基因和质粒B.图乙中只用EcoRⅠ切割后的质粒，含有2个游离的磷酸基团C.用EcoRⅠ切割目的基因和质粒，再用DNA连接酶连接，只产生1种连

接产物D.抗原基因在体内表达时不需要解旋酶√从图甲看出，用EcoRⅠ切割目的基因后两端各有一个切口，与图乙中EcoRⅠ切口对接时，可有两种可能，即可产生两种重组DNA，C项错误；基因表达包括转录和翻译，转录时不需要解旋酶，在RNA聚合酶的作用下，DNA即可解旋，D项正确。考向二基因工程载体的应用3.质粒是基因工程最常用的载体，下列有关质粒的说法正确的是A.质粒不仅存在于细菌中，也存在于某些病毒中B.细菌的基因只存在于质粒上C.质粒为小型环状DNA分子D.质粒是基因工程中的重要工具酶之一√4.下列有关基因工程中载体的说法，正确的是A.在进行基因工程操作中，被用作载体的质粒都是天然质粒B.所有的质粒都可以作为基因工程中的载体C.质粒是一种独立于细菌染色体外的链状DNA分子D.作为载体的质粒DNA分子上应有对重组DNA进行鉴定和选择的标记

基因√在进行基因工程操作中，被用作载体的质粒是在天然质粒的基础上进行过人工改造的，A错误；具有一至多个限制酶切点、具有标记基因的质粒才可以作为基因工程中的载体，B错误；质粒是一种独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外的环状DNA分子，C错误；作为载体的质粒DNA分子上应有对重组DNA进行鉴定和选择的标记基因，而且能在受体细胞中复制并稳定保存，D正确。基因工程的基本操作程序考点二

1.目的基因的筛选与获取(1)目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞

或获得预期

等的基因。(2)筛选合适的目的基因①从相关的已知

的基因中进行筛选是较为有效的方法之一。②利用

和序列比对工具进行筛选。(3)目的基因的获取①人工合成

。②常用

特异性地快速扩增目的基因梳理归纳

夯实必备知识性状表达产物结构和功能清晰序列数据库目的基因PCR归纳总结PCR技术和DNA复制的比较易错提醒(1)在PCR过程中实际加入的为dNTP(即dATP、dGTP、dTTP、dCTP)，既可作为合成

的原料，又可为DNA的合成提供

。(2)引物既可以是DNA单链，也可以为

。细胞内的DNA进行复制时，也需要

，一般为RNA片段。(3)真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要

激活。因此，PCR反应缓冲溶液中一般要添加

。DNA子链能量RNA单链引物Mg2＋Mg2＋PCR技术和DNA复制的比较易错提醒(4)PCR扩增过程中的循环图示与规律PCR技术和DNA复制的比较易错提醒循环次数123nDNA分子数2_______含引物A(或B)的DNA分子数1_________482n372n－1PCR技术和DNA复制的比较易错提醒同时含引物A、B的NA分子数0＝21－2______________________共消耗的引物数量2＝21＋1－26＝22＋1－214＝23＋1－22n＋1－22＝22－26＝23－22n－2PCR技术和DNA复制的比较

源于选择性必修3P77“相关信息”：Bt抗虫蛋白基因产生的Bt抗虫蛋白只在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和牲畜的胃液呈

，肠道细胞也无特异性受体，因此，Bt抗虫蛋白不会对人畜产生危害。酸性2.基因表达载体的构建——基因工程的核心(1)目的：使目的基因

，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。(2)基因表达载体的组成及作用在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代启动子标记基因(3)构建过程易错提醒项目启动子终止子起始密码子终止密码子本质_________________________位置目的基因上游目的基因下游mRNA首端mRNA尾端功能____________________________________________________________________________________________________________________________________DNADNAmRNAmRNARNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA使转录在所需要的地方停下来翻译的起始信号(编码氨基酸)翻译的结束信号(不编码氨基酸)启动子、终止子、起始密码子、终止密码子对比3.将目的基因导入受体细胞生物种类植物动物微生物常用方法农杆菌转化法、______________显微注射法

处理法受体细胞_______________________原核细胞转化过程将目的基因插入Ti质粒的T－DNA中→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA上→表达将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物Ca2＋处理细胞→细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态→基因表达载体导入花粉受精卵Ca2＋管通道法体细胞或受精卵辨析(1)转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持__________的过程。此处“转化”与肺炎链球菌转化实验中的“转化”含义相同，实质都是

。(2)农杆菌转化法中的两次拼接和两次导入，第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的

上，第二次拼接(非人工操作)是指插入目的基因的T－DNA拼接到受体细胞的

上；第一次导入是将含目的基因的Ti质粒导入

，第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的T－DNA导入

。稳定和表达基因重组T－DNA染色体DNA农杆菌受体细胞(3)农杆菌特点①能在自然条件下侵染

和

，而对大多数___________没有侵染能力。②农杆菌细胞内含有

，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T－DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。辨析双子叶植物裸子植物单子叶植物Ti质粒4.目的基因的检测与鉴定考向一目的基因的获取5.利用PCR既可以快速扩增特定基因，也可以检测基因的表达。下列有关PCR的叙述，错误的是A.PCR用的DNA聚合酶是一种耐高温酶B.变性过程中，双链DNA的解开不需要解旋酶C.复性过程中，引物与模板链的结合遵循碱基互补配对原则D.延伸过程中，需要DNA聚合酶、ATP和4种核糖核苷酸√考向突破强化关键能力6.利用重叠延伸PCR技术进行定点突变可以实现对纤维素酶基因进行合理性改造，其过程如下图所示。下列分析不正确的是A.PCR1过程中的产物AB是依赖引物a和引

物b扩增的结果B.引物c和引物b上均含有与模板链不能互

补的碱基C.①过程需要先加热至90℃以上后再冷却

至50℃左右D.②过程需要利用引物a和引物d获得突变

产物AD√考向二基因工程的基本操作程序7.(2022·云南高三联考)戊型肝炎病毒是一种RNA病毒，ORF2基因编码的结构蛋白(pORF2)位于病毒表面，构成病毒的衣壳。我国科研人员利用基因工程技术，在大肠杆菌中表达pORF2，制备戊型肝炎疫苗，过程如图。下列关于该疫苗的叙述，正确的是A.过程①需要的酶是RNA聚合酶，原料是

A、U、G、CB.重组基因表达载体上的启动子需来源于戊型肝炎病毒C.过程⑤需要用聚乙二醇处理大肠杆菌使其处于一种能吸收周围环境中

DNA分子的生理状态D.过程⑥大量制备pORF2蛋白前应做相应的检测与鉴定√戊型肝炎病毒是一种RNA病毒，过程①是以病毒RNA为模板合成DNA，获取目的基因的过程，需要的酶是逆转录酶，原料是四种脱氧核苷酸，A项错误；启动子是一段有特殊结构的DNA片段，其作用是供RNA聚合酶的识别结合以驱动目的基因的转录，启动子具有物种或组织特异性，构建在大肠杆菌细胞内特异表达pORF2蛋白的载体时，需要选择大肠杆菌细胞的启动子，而不能选择其他物种和组织细胞的启动子，B项错误；将目的基因导入微生物细胞的方法是Ca2＋处理法，需要用Ca2＋处理大肠杆菌，增大大肠杆菌细胞壁的透过性，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，C项错误。8.某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程，如下图所示。请回答下列问题：(1)将目的基因导入植物细胞，采用最多的方法是农杆菌转化法。其中用到的质粒是_______；该质粒含有一段特殊的DNA片段，称为_________。该方法中农杆菌的作用是______________________________________________________。Ti质粒T－DNA感染烟草细胞，把目的基因插入到烟草细胞的染色体DNA上(2)在构建重组质粒时，和只用一种酶切割目的基因的两端及质粒相比，选用HindⅢ和SalⅠ两种酶的好处是____________________________________________________________________。防止目的基因自连和质粒自连，以提高带有目的基因的重组质粒的合成效率(3)含有目的基因的农杆菌可根据标记基因进行筛选。若农杆菌在含有氨苄青霉素和四环素的培养基上都可以生长繁殖，农杆菌中是否已含有目的基因？____(填“是”或“否”)。为什么？__________________________________________。否含有目的基因的质粒中抗四环素基因被破坏(4)将已经转化的农杆菌进行如下操作，筛选出符合要求的农杆菌。先把转化的农杆菌接种到A培养基中培养，长出菌落后，用无菌牙签挑取A上的单个菌落，分别接种到B(含氨苄青霉素)和C(含四环素和氨苄青霉素)两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于B或C上的哪些菌落中？请在图中相应的位置上圈出来。答案如图所示DNA的粗提取与鉴定和DNA片段的扩增与电泳鉴定考点三

1.DNA的粗提取与鉴定(1)基本原理①原理：利用DNA、RNA、蛋白质和脂质等在

方面的差异，提取DNA，去除其他成分。②DNA的性质：DNA不溶于

，但某些蛋白质溶于

；DNA能溶于2mol·L－1的

。③DNA的鉴定：在一定温度下，DNA遇

试剂会呈现蓝色。基础提炼

通读实验内容物理和化学性质酒精酒精NaCl溶液二苯胺(2)操作流程95%沸水注意事项加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要

，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。轻缓2.DNA片段的扩增及电泳鉴定(1)实验基础①PCR原理：利用了

原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。②电泳：DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷

的电极移动，这个过程就是电泳。③PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的

等有关。DNA的热变性相反大小和构象(2)PCR实验操作步骤微量移液器离心管底部(3)DNA的电泳鉴定微量移液管紫外灯注意事项(1)为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行

处理。(2)每吸取一种试剂后，移液器上的

都必须更换。(3)电泳时，DNA分子的相对分子质量越大，受到的阻力越

，迁移速率越

，DNA分子的相对分子质量越小，受到的阻力越

，迁移速率越

。高压灭菌枪头大慢小快考向一DNA的粗提取与鉴定9.下列利用洋葱进行“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是A.将研磨液加入切碎的洋葱，充分研磨后过滤，要弃去上清液B.采用体积分数为95%酒精溶液析出DNA的方法可去除部分杂质C.用塑料离心管是因为用玻璃离心管容易破损D.将白色丝状物溶解在NaCl溶液中，加入二苯胺试剂后振荡，观察颜色

变化考向突破强化关键能力√将研磨液加入切碎的洋葱，充分研磨后过滤，要弃去沉淀物，收集上清液，A错误；DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理可将DNA与蛋白质进一步分离，进行DNA的粗提取，B正确；用塑料离心管可减少提取过程中DNA的损失，C错误；将白色丝状物溶解在NaCl溶液中，加入二苯胺试剂后，将试管置于沸水中加热5min，观察颜色变化，D错误。10.下图是“DNA的粗提取与鉴定”实验中的两个操作步骤示意图。下列相关叙述不正确的是A.选用植物细胞提取DNA时需先

研磨破碎细胞B.图2所示实验操作中有一处明

显错误，可能导致试管2中蓝

色变化不明显C.图1所示操作的原理是DNA不能溶于酒精，而蛋白质等杂质能溶于酒精D.图2试管1的作用是证明物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液遇二苯胺试

剂出现蓝色√图2所示实验的试管中溶液的液面高于烧杯中的液面，可能导致加热不充分，试管2中蓝色变化不明显，B正确；图2试管1起对照作用，目的是证明沸水浴下物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液遇二苯胺试剂不会出现蓝色，而DNA遇二苯胺试剂出现蓝色，D错误。考向二DNA片段的扩增及电泳鉴定11.利用PCR可以在体外进行DNA片段的扩增，下列有关“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验的相关叙述，错误的是A.PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高

压蒸汽灭菌处理B.PCR利用了DNA的热变性原理C.PCR所用的缓冲液和酶从冰箱拿出之后，迅速融化D.在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的

枪头都必须更换√PCR所用缓冲液和酶从冰箱拿出之后，应放在冰块上缓慢融化，这样才能不破坏缓冲液中稳定性较差的成分，同样保护酶的活性不被破坏，C错误。12.下列有关电泳的叙述，不正确的是A.电泳是指带电分子在电场的作用下发生迁移的过程B.待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电

泳中的迁移速率C.进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相同的电极移动D.PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定√重温高考真题演练1.(2019·江苏，10)下列关于DNA粗提取与鉴定的叙述，错误的是A.用同样方法从等体积兔血和鸡血中提取的DNA量相近B.DNA析出过程中，搅拌操作要轻柔以防DNA断裂C.预冷的酒精可用来进一步纯化粗提的DNAD.用二苯胺试剂鉴定DNA需要进行水浴加热√123哺乳动物(如兔)成熟的红细胞中无细胞核和众多细胞器，不能提取到DNA，故兔血不宜作为该实验的实验材料，A错误；为防止DNA断裂，在DNA析出过程中搅拌操作要轻柔且沿着一个方向，B正确；DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精溶液，预冷的酒精溶液可用来进一步纯化粗提的DNA，C正确；在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色，因此，用二苯胺试剂鉴定DNA需要进行水浴加热，D正确。1232.(2020·北京，12)为了对重金属污染的土壤进行生物修复，研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白(HMA3)基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中(如图)。为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合是A.①＋③

B.①＋②C.③＋②

D.③＋④123√引物①扩增的片段含有启动子和HMA3基因，引物③扩增的片段不含启动子，引物②扩增的片段既含有启动子，又含有HMA3基因序列。图示中克隆的重金属转运蛋白(HMA3)基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中，若要检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因和高效启动子，需要检测是否含有高效启动子序列和HMA3基因序列，应选择的引物组合是①＋②，B正确。1233.(2021·山东，25)人类γ基因启动子上游的调控序列中含有BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，γ基因的表达被抑制。通过改变该结合位点的序列，解除对γ基因表达的抑制，可对某种地中海贫血症进行基因治疗。科研人员扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，以确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置。相关信息如图所示。123(1)为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达，需在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知，在F1～F7末端添加的序列所对应的限制酶是______，在R末端添加的序列所对应的限制酶是________。本实验中，从产物扩增到载体构建完成的整个过程共需要____种酶。123SalⅠEcoRⅠ6123据题意可知，需要将扩增后的产物定向插入并指导荧光蛋白基因的表达，则含有启动子的扩增后的产物读取方向与荧光蛋白基因的读取方向一致，故扩增后的产物中的R端与荧光蛋白基因中限制酶MunⅠ识别序列端结合，才能保证扩增后的产物定向插入并指导荧光蛋白基因的表达。123要做到定向插入，需要引物末端两端添加限制酶的识别序列，且被限制酶识别并切割后，两端的黏性末端不能相同。而扩增后的产物中可能含有MunⅠ和XhoⅠ的识别位点，故在引物末端添加限制酶的识别序列不能被限制酶MunⅠ和XhoⅠ所识别，故应该选用添加限制酶EcoRⅠ123和限制酶SalⅠ识别序列，由图中可知，限制酶MunⅠ识别并切割后的黏性末端与限制酶EcoRⅠ识别并切割后的黏性末端相同，故R末端添加的序列所对应的限制酶是EcoRⅠ，在F1～F7末端添加的序列所对应的限制酶是SalⅠ；123荧光蛋白基因中含有限制酶EcoRⅠ的识别位点，故对载体使用限制酶MunⅠ和XhoⅠ切割。综上所述，对载体使用限制酶MunⅠ和XhoⅠ切割，对扩增后的产物用限制酶EcoRⅠ和限制酶SalⅠ切割，然后在DNA连接酶的催化作用下，连接形成重组载体；123产物扩增中需要使用TaqDNA聚合酶催化，合成更多的产物，故从产物扩增到载体构建完成的整个过程共需要6种酶，分别是TaqDNA聚合酶、限制酶EcoRⅠ、限制酶SalⅠ、限制酶MunⅠ、限制酶XhoⅠ、DNA连接酶。(2)将构建的载体导入除去BCL11A基因的受体细胞，成功转化后，含F1～F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞有荧光，含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光的原因是___________________________________________________。123F7与R扩增产物不含完整的启动子，荧光蛋白基因不表达123受体细胞中已经除去BCL11A基因，故扩增产物中的BCL11A蛋白结合位点不会抑制荧光蛋白基因的表达；基因的表达需要RNA聚合酶与启动子结合，才能完成荧光蛋白基因的转录过程；含F1～F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞有荧光，含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光，则可能是F7与R扩增产物不含完整的启动子，荧光蛋白基因不表达。(3)向培养液中添加适量的雌激素，含F1～F4与R扩增产物的受体细胞不再有荧光，而含F5～F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光。若γ基因上游调控序列上与引物序列所对应的位置不含有BCL11A蛋白的结合位点序列，123据此结果可推测，BCL11A蛋白结合位点位于______________________________________________，理由是_________________________________________________________________________________123F1～F4与R扩增产物上均有结合位点，因此结合位点位于F4所对应调控序列的下游(右侧)；F5～F6与R扩增产物上均无结合位点，可知结合位点位于F5所对应调控序列的上游(左侧)，所以结合位点位于引物F4与F5在调控序列上所对应序列之