显微鉴定的基本操作技能

第三章显微鉴定的基本操作技能当前第1页\共有29页\编于星期四\1点第一节显微标本片的制作当前第2页\共有29页\编于星期四\1点一、组织透化剂及应用：1、组织透化剂：使细胞组织内含物溶解除去或透明清晰、色素氧化退色、皱缩细胞壁膨胀透明的试剂。2、作用：（1）浸润作用。（2）溶解、分解或氧化作用

当前第3页\共有29页\编于星期四\1点3、常见的透化剂：（1）水合氯醛的特点：①能渗入组织细胞内，使干燥而皱缩的细胞发生膨胀；②能溶解多数组织内含物；③对观察草酸钙结晶极为适宜；④不加热可立刻观察菊糖。（2）氢氧化钾（氢氧化钠）溶液的特点：（1）5%水溶液为强力透化剂；②能迅速溶解除去淀粉和蛋白质，且能使细胞壁膨胀，作用持久；③对纤维素性细胞壁组织有解离作用；④透化后需将其洗去；⑤常用于解离组织标本片。当前第4页\共有29页\编于星期四\1点二、组织封藏剂及应用：1、组织封藏剂：能保持原制片要求，利于组织和细胞形状、颜色和内含物观察的溶液。2、作用：保持原制片要求。3、常见的封藏剂：（1）蒸馏水加酚、苯甲酸、樟脑等防霉。特点：①能保持原形、原色，对皱缩的细胞壁可恢复原状态；②用蒸馏水装片可观察淀粉粒；③可使黏液溶解，并破坏糊粉粒。当前第5页\共有29页\编于星期四\1点（2）稀甘油加入酚等防霉。特点：①保持2～3天；②用稀甘油装片可观察糊粉粒、淀粉粒、油滴、树脂等；③可在透化后滴加，以防水合氯醛析出结晶。当前第6页\共有29页\编于星期四\1点三、显微标本片：1、粉末标本片：以粉末装片，粉末有细度要求。2、表面标本片：3、切片标本片：中药鉴定中最多的一类。4、解离组织标本片。四、粉末标本装片：1、暂时性粉末标本片：暂时性的，用完之后就洗掉的，载玻片、盖玻片可重复使用。过程：（1）粉末加封藏剂、盖盖玻片、清洁、观察。当前第7页\共有29页\编于星期四\1点（2）粉末加水合氯醛溶液加热透化三次，加稀甘油封藏、盖盖玻片、清洁、观察。2、永久性粉末标本片：做法较复杂，一般我们在外面购买的就是永久性装片，只要不损坏，可以一直看。当前第8页\共有29页\编于星期四\1点五、表面标本片：主要用于叶片、萼片、花瓣和雄蕊等表皮的表面特征观察。1、整体封藏法：取材料剪取正反2小片，加水合氯醛加热透化3次，加稀甘油封藏，盖盖玻片，清洁，观察。2、表皮撕离法：适用于较厚的叶片、萼片、花瓣等。当前第9页\共有29页\编于星期四\1点六、切片制片法：此类与粉末装片用得最多，有横切和纵切。1、机器切片法：生活中很少用，只有生产厂家大量生产时运用。2、徒手切片法：实验室常用此法。（1）材料的预处理：清洁，（除去非药用部分，选取合适切片部分。）切成适当大小的块，软化。当前第10页\共有29页\编于星期四\1点软化方法：①在吸湿器中放置12～24h。②过硬，水浸或煮12h。③特硬，高压锅煮20min。如天麻。④过软，浸入高浓度乙醇中20min。当前第11页\共有29页\编于星期四\1点软化注意事项：①需观察糊粉粒、黏液、菊糖等水可溶性的物质的，不可与水接触。②需观察挥发油、树脂等，不能与高浓度乙醇或其他有机溶剂接触。当前第12页\共有29页\编于星期四\1点（2）材料的分割：切薄片。（3）材料的挟持：方便切片，常用胡萝卜、马铃薯。（4）徒手切片刀：双面和单面，双面切较柔软，单面切较硬，单面应用较多。当前第13页\共有29页\编于星期四\1点（5）持刀方法：右手持刀，刀身放平，刀口向切片者。（6）切片：材料和刀口蘸水，切掉不整齐一段，同左前外方向右内方迅速拉切，臂用力。（7）取片：合乎需要的立即浸入水中。（8）透化：置载玻片中央加水合氯醛加热透化。（9）封藏：加稀甘油封藏，盖盖玻片。（10）清洁观察。当前第14页\共有29页\编于星期四\1点七、解离组织标本片：薄壁组织点大部分的用氢氧化钾法；质地坚硬，木化组织较多用硝铬酸法。1、氢氧化钾法：供试样置试管中加氢氧化钾，加热，倾去碱液，用水洗，放于载玻片上，用解剖针撕开，加稀甘油，盖上盖玻片。当前第15页\共有29页\编于星期四\1点2、供试样置于试管中，加硝铬酸试液适量，放置，倾去酸液，加水洗，放于载玻片上，用解剖针撕开，加稀甘油，盖上盖玻片。当前第16页\共有29页\编于星期四\1点第二节显微测量法显微测量：应用显微镜测量尺在显微镜下测量微细物体的大小。显微测量尺分为目镜测微尺和载物台测微尺。1、目镜测量尺：安装在目镜内的一个测量尺。2、载物台测量尺：载玻片中央粘贴的测量尺。当前第17页\共有29页\编于星期四\1点3、两尺的关系及应用：台微尺是不变的，每小格10um；目微尺随目镜和物镜的变化而变化。4、目微尺的标定：（1）将台微尺放置在载物台上，目微尺放入目镜镜筒内。（2）先低倍镜，将目微尺刻度移至视野中央。（3）旋转目镜，使两尺平行。当前第18页\共有29页\编于星期四\1点（4）移动台微尺，使目微尺零端与台微尺刻度的某刻度线相重合。（5）再找两尺的第二条重合刻度线，数两条重合线间两尺的小格数，记录。（6）计算出目微尺每一格在该物镜条件下相当的长度（um）标定值=台微尺小格数×10um/目微尺小格数。当前第19页\共有29页\编于星期四\1点5、测量方法：（1）将需测量的载玻片放于载物台上。（2）用目微尺测量目的物的小格数，记录。（3）计算：实际长度um=测得小格数×标定值当前第20页\共有29页\编于星期四\1点第三节显微绘图法显微绘图法的方法又分为平描和应用显微描绘器描绘。一、平描：只凭肉眼描绘1、根据观察到的实物进行绘图。2、绘图的要求：（1）要排列整齐、部位适中、比例恰当。（2）要做到形状、比例、倍数正确。（3）以点、线表示。当前第21页\共有29页\编于星期四\1点（4）图中各部分用阿拉伯数字表示，在图下端注明标号名称。3、绘图用具：16开白纸或A4白纸。铅笔。当前第22页\共有29页\编于星期四\1点4、绘图：图的类型一般分粉末图及组织图。（1）粉末图：绘出其粉末特征。（2）组织详图：较详细，需要所有组织全部绘出，较难，一般不绘此种图。（3）组织简图：以线条表示，清晰，一目了然。实验室常绘出的图，但不实用于出版、做研究等。二、显微描绘器描绘：分放映装置和描绘器。当前第23页\共有29页\编于星期四\1点第四节常用显微化学分析一、细胞壁性质的鉴别：1、木质化细胞壁：加间苯三酚试液，放置，加盐酸，显红色或紫红色。2、木栓化或角质化细胞壁：加苏丹Ⅲ试液或紫草试液，微热，显橘红色至紫色。3、纤维素细胞壁：（1）加氯化锌碘试液湿润，放置，再加硫酸溶液，显蓝色或紫色。4、硅质化细胞壁：当前第24页\共有29页\编于星期四\1点二、细胞内含物质性质的鉴别：1、淀粉粒：（1）加碘试液显蓝色或紫色。（2）用甘油醋酸试液装片，末糊化的在显微镜下显偏光。2、菊糖：加a-萘酚乙醇溶液，再加硫酸，显紫红色并溶解。3、脂肪油、挥发油、树脂：（1）加苏丹Ⅲ试液或紫草试液，均显橘红色到紫红色。当前第25页\共有29页\编于星期四\1点（2）加90%乙醇，脂肪油和树脂不溶解，挥发油溶解。4、糊粉粒：（1）加碘试液，显棕色或黄棕色。（2）加三硝基苯酚试液，显黄色。（3）加硝酸汞试液，显砖红色。5、黏液：（1）加墨汁，黏液呈无色透明块状。（2）加钌红试液，显红色。当前第26页\共有29页\编于星期四\1点

6、草酸钙结晶：（1）加稀盐酸溶解而无气泡产生。（2）加硫酸逐渐溶解，片刻后析出针状硫酸钙结晶。