红细胞血型检测-课件

红细胞血型检测学习纲领输血前检查的主要内容抗体筛选的目的和意义交叉配血试验的影响因素抗球蛋白试验的临床应用微柱凝胶介质试验的原理常见的吸收放散试验方法第一节输血前免疫血液学检查目的

输入的血液成分在受血者的体内发挥其有效作用

输入的红细胞在受血者体内不凝集或不溶血

输入的的血浆成分不破坏受血者的红细胞（免疫学相容）主要程序

患者的病史和标本等的检查、核对及处理;ABO血型和RhD血型定型；

不规则抗体的筛选和鉴定；

交叉配血试验等。第一节输血前免疫血液学检查一、受血者标本的处理（一）标本的采集

严格遵守一次只能为一位受血者抽取标本

标本不得从输液管或输液侧筋脉中抽取一、标本采集与要求（二）标本的接收

核对受血者的相关信息，尽可能了解受血者有无输血史、药物史、妊娠史等情况；

如有输血史，需了解最后一次输血的日期，若3个月内输过血，那么供血者的红细胞没有完全代谢消失，导致血型定型试验中出现混合凝集。（三）标本的要求血液标本能代表受血者当前的免疫学状况；防止受血者血液标本稀释和（或）溶血；受血者配血试验的标本必须是输血前3天采集的；若受血者使用肝素治疗，应用硫酸鱼精蛋白与其作用；若使用右旋糖酐等，应洗涤被检红细胞；每次输血后，受血者和供血者的标本必须保存于2-8℃至少7天。一、标本采集与要求二、ABO血型和Rh血型鉴定

（一）ABO定型原理

血型红细胞上抗原血清中抗体AA抗-BBB抗-AO无抗-A,抗-B,抗-ABABA、B无抗-A,抗-B（一）ABO定型原理

正定型：用抗-A及抗-B试剂与被检红细胞反应，检测红细胞表面是否存在A抗原或B抗原。

反定型：用标准A细胞及B细胞与被检血清反应，检测血清中是否存在抗体。

二、ABO血型和Rh血型鉴定

二、ABO血型和Rh血型鉴定

1.ABO定型试剂标准：(1)人的血清汇聚制成的，必须具备以下条件：

①特异性；②高效价(1:128)的IgM抗A或抗B;③具较好的亲和性;

④冷凝集效价在4以下；⑤无菌；⑥灭活补体。(2)来自培养细胞株的单克隆抗体所制成二、ABO血型和Rh血型鉴定

1.ABO定型方法：玻片法、

试管法、

微柱凝胶法、分子生物学检测二、ABO血型和Rh血型鉴定

2.ABO亚型的鉴定

常用试剂：

抗-A、抗-B、抗-A1、抗-H、抗-AB血清;A1型、A2型、B型和O型红细胞。

抗-AB血清：避免把弱反应性A或B型红细胞分类为O型。一般对Ax型红细胞可增加凝集反应强度。二、ABO血型和Rh血型鉴定

3.ABO定型试验中的常见问题：试验器材不清洁错加标本或试剂试剂污染或失效漏加试剂离心过度或不足结果记录或判断错误细胞与血清间比例不适当阳性反应产生溶血现象未能识别受血者红细胞或血清本身问题二、ABO血型和Rh血型鉴定

（二）Rh(D)定型主要鉴定D抗原（IgG抗-D和IgM抗-D）鉴定方法：玻片法、试管法、微量板法、微柱凝胶法等，目前大多医院都使用微柱凝胶法，简便快捷、准确度高。二、ABO血型和Rh血型鉴定

RhD阴性确认：IgM抗-D检测阴性时，需进行RhD阴性确认试验：即用IgG抗-D试剂进行间接抗人球蛋白试验。若结果为阴性，则判断该个体为RhD阴性；若结果为阳性，则该个体为弱D表型。二、ABO血型和Rh血型鉴定

Rh血型鉴定可能出现假阳性的原因直接抗球蛋白试验阳性高蛋白定型试剂引起缗钱状凝集标本抗凝不当定型试剂中存在的其它抗体多凝集细胞鉴定器材和试剂血清被污染Rh血型鉴定可能出现假阴性的原因受检细胞悬液浓度太高，与定型血清比例失调漏加或错加定型试剂观察结果时摇动用力过度，摇散弱凝集弱D抗原或D变异型与某些抗-D不反应三、抗体筛查和鉴定(一)概念

不规则抗体是指血清中抗-A、抗-B之外的血型抗体，也称意外抗体，包括：

自身抗体：受血者免疫系统针对自身红细胞抗原产生的抗体。

同种抗体：可与同种异型抗原发生反应。(二)不规则抗体的筛查方法1.盐水介质法：主要用于IgM类抗体优点：操作简单、成本低；缺点：灵敏度低2.聚凝胺法：非特异性促凝3.抗球蛋白试验：操作繁琐、耗时、器材试剂复杂4.酶法：能暴露隐蔽抗原，增强一些稀有抗原检测；但可能会破坏一些抗原，不常用。5.微柱凝胶法：敏感性高、特异性强、结果准确、易观察、影响因素少，较常用。三、抗体筛查和鉴定(三)抗体鉴定1.自身细胞检查：观察受血者血清与自身细胞的反应情况，确定血清内是否有自身抗体或自身抗体和同种抗体二者同时存在。

2.谱细胞：已知血型表现型的8~12人份O型红细胞，必须能够检出常见及某些罕见抗体。三、抗体筛查和鉴定目的：测定受血者血清中有无能破坏供血者红细胞的抗体，保证受血者和供血者血液间无可测出的不相配合的抗原或抗体成分，防止输血后产生溶血性输血反应，也称配合性试验。四、交叉配血试验四、交叉配血试验患者献血者主侧次侧（一）方法主侧配血用受者血清与供者红细胞进行试验次测配血供血者血清与受者红细胞进行试验自身对照（二）结果判读1.抗体筛查阴性，交叉配血相容：可发放血液2.抗体筛查阴性，主侧交叉配血不相容：复查血型3.抗体筛查阳性，交叉配血不相容：（1）自身对照阴性：受血者体内含同种抗体，进一步抗体鉴定；（2）自身对照阳性：受血者血清中含自身抗体或同时存在意外抗体。四、交叉配血试验（三）影响因素①缗钱状形成：假凝集，MM等。②抗筛阴性而交叉配血阳性：受血者血清中存在未被检出的抗体。③直抗阳性：受血者或供血者体内有自身抗体。④被检血清中如有溶血性抗体，相应抗原的红细胞被溶解而非凝集，交叉配血应为阳性。若血清中存在补体，应灭活。四、交叉配血试验四、交叉配血试验（三）影响因素

⑤离子干扰

⑥温度⑦离心不当

⑧红细胞洗涤不当红细胞血型检测方法盐水介质试验酶介质试验聚凝胺介质试验抗人球蛋白试验微柱凝胶介质试验吸收放散试验分子生物学检测技术盐水介质试验技术特异性抗体和有相应抗原的红细胞在盐水介质中发生肉眼可见的凝集。主要用于IgM类抗体的检测，不能检出IgG类抗体。平板法

微孔板法试管法平板法常规ABO血型和RhD抗原定型；简易快速，易污染；注意：细胞浓度要适宜、观察要及时避免交叉污染试管法输血前检查最常用的试验方法；血型检测、抗体筛选鉴定、抗体效价测定；结果准确、可靠，成本低；操作较繁琐，使用的血清量较大。微孔板法适合批量操作；血样用量少，可自动化；需特殊耗材仪器，操作繁琐。结果判读反应强度现象4+一个大凝集块，背景清晰，无游离红细胞3+数个较大凝集块，背景清晰，几乎无游离红细胞2+凝集块较小，背景稍浑浊，游离红细胞较少1+细小凝集块，背景浑浊，游离红细胞较多±（weak+）肉眼观察呈“粗颗粒”样，镜下可见细小凝集团-肉眼及光镜下红细胞呈游离状态，无凝集酶介质试验技术原理蛋白水解酶可切断红细胞表面多肽链;同时带走多肽链上带负电荷的唾液酸;减少红细胞表面的负电荷以及红细胞之间的排斥力;缩短了红细胞之间的距离;增强IgG抗体对红细胞的凝集。酶试验注意事项常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、无花果酶酶处理可以增强一些抗原抗体系统的反应活性（Rh和Kidd系统较为显著）；用酶处理也会破坏红细胞的一些表面抗原(M、N、Fya、Fyb)，所以不适于检查它们相应的抗体。

结果判断：阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管凝集为阳性，不凝集判定为阴性。阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集，实验失败分析原因，重新实验。酶介质试验技术聚凝胺介质试验技术原理：聚凝胺一种高阳离子聚合体，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。柠檬酸重悬液可消除聚凝胺的作用。表面致敏了IgG抗体分子的红细胞不会散开，未致敏IgG抗体分子的红细胞则散开。聚凝胺介质试验技术特点：简便快速准确灵敏对Rh系统抗体敏感不适合Kell系统抗体临床应用：血型鉴定抗体筛查交叉配血

结果判断：阳性对照管凝集不消失，阴性对照管凝集消失，被检管出现凝集不消失为阳性，凝集消失为阴性。阳性对照管凝集消失和（或）阴性对照管凝集不消失，实验失败，重新实验。聚凝胺介质试验技术注意事项1.不能用含有柠檬酸钠和肝素抗凝标本。2.聚凝胺只能使正常红细胞发生凝集，对缺乏唾液酸的细胞（如：T细胞）无作用。3.交叉配血不合时，要用抗人球蛋白试验重复，结果不一致时，以抗人球蛋白试验为主。聚凝胺介质试验技术抗人球蛋白试验技术Coombs试验：

主要用于检测血清中的不完全抗体如：IgG、IgA和（或）补体如：C3、C4等。原理抗球蛋白可以和IgG反应通过搭桥作用使红细胞凝集IgG只能致敏在红细胞上抗人球蛋白试验分类及应用分类直接抗人球蛋白试验间接抗人球蛋白试验致敏红细胞的不完全抗体、补体血清中的不完全抗体抗人球蛋白试剂多特异性抗球蛋白试剂（广谱～）含抗IgG和抗补体C3d日常配血，同种抗体检测和直抗单特异性抗球蛋白试剂单特异性抗IgG，无抗补体C3成分

单特异性抗C3，无抗IgG成分直接抗人球蛋白试验临床应用：胎母血型不合新生儿溶血病（患儿红细胞在母体时已被能通过胎盘的免疫性抗体所致敏）；免疫溶血性输血反应（受者体内有抗体，输入不相合的红细胞后，输入的红细胞被受血者的抗体所致敏）自身免疫性溶血（患者红细胞被自身抗体包被）；药物诱发型溶血病间接抗人球蛋白试验临床应用：交叉配血及血型鉴定器官移植妊娠所致免疫性血型抗体自身免疫性血型抗体的检出和鉴定其他方法所不能查明的红细胞抗原、白细胞和血小板抗体等直接抗人球蛋白试验：（1）阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管凝集，判定为阳性。（2）阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管不凝集，须做阴性确认后判定结果。（3）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集，结果不可信不能发出报告，分析原因后重做试验。结果判断无凝集的被检管中加入IgG抗D致敏红细胞后离心，出现凝集，判定为阴性；否则可能是红细胞洗涤不充分而呈假阴性，必须重新试验。间接抗人球蛋白试验：（1）阳性对照管呈现凝集反应，阴性对照管未呈现凝集反应，被检管呈现凝集反应为阳性结果，表示被检者血清中含有抗体。（2）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管出现凝集，实验失败，分析原因重做试验。结果判断影响因素一、亲和力亲和力常数越高，抗原抗体反应致敏阶段的抗体水平越高。二、孵育时间和温度37℃孵育30-60分钟三、离子强度低离子强度溶液可增强抗体的结合作用，孵育时间将缩短到15～30分钟。影响因素四、抗原、抗体的比例常用比例：2滴血清对1滴2％～5％的红细胞悬液五、洗涤

应尽量去除上清液，降低未结合的免球蛋白，避免假阴性结果。六、体外补体致敏七、红细胞自身凝集微柱凝胶介质试验技术原理：凝胶具有分子筛效应和亲和效应，在微柱凝胶介质中红细胞抗原与相应的抗体结合，利用凝胶的空间位阻经低速离心，凝集的红细胞悬浮在凝胶的上层，而未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶的底部。反应池特殊粘液亲和凝胶微柱凝胶介质试验技术

据试验目的分类：中性胶（不含抗体）特异性胶（含特异性抗体）抗球蛋白胶（含抗球蛋白）微柱凝胶介质试验技术特点：简便安全准确敏感微量标准化结果保存时间长临床应用：抗球蛋白试验ABO血型定型其他血型系统抗原检测微柱凝胶介质试验技术结果分析假阳性反应：未完全去除纤维蛋白原的血清标本在凝胶中形成纤维蛋白，阻碍红细胞沉降；抗凝剂不足或不含抗凝剂的血浆标本常出现；被检标本污染细菌使红细胞浮于凝胶中；实验室温度较低时，凝胶颗粒活动少，单个红细胞穿过困难。微柱凝胶介质试验技术结果分析假阴性反应：抗原或抗体过少、过弱；抗原、抗体比例不适当；离心力过大时，容易使弱阳性成为阴性格局；操作失误。微柱凝胶介质试验技术试验中可能存在的问题溶血反应：①反应液是低渗溶液②温度过冷或过热③红细胞或抗体被细菌污染④其他可使红细胞破坏的理化因素⑤红细胞抗原抗体溶血反应微柱凝胶介质试验技术吸收放散试验抗体可与相应抗原在适当条件下发生凝集或致敏，这种结合是可逆的，如改变某些实验条件，抗体可以从红细胞上解离下来，然后再检测解离下来的抗体。这种试验方法称为吸收放散试验。吸收试验原理：抗原与抗体的结合是特异性的，因此具有抗体活性的血清加入相应抗原后，抗体的活性下降或消失，这种作用称为吸收试验。吸收试验冷吸收：红细胞+血清，混匀后置4℃冰箱吸收1-2小时，如ABO、MN、P系统等；热吸收：红细胞+血清，混匀后置37℃水浴箱中吸收，如Rh系统等吸收试验的临床意义应用于ABO亚型的鉴定可结合放散试验鉴定抗体特异性可在多种抗体中通过吸收试验去除某种不需要的抗体消除自身抗体的干扰放散试验原理：抗原与抗体的结合是可逆的，在物理条件改变时，抗体又会从抗原抗体复合物上分离下来，将抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试验称为放散试验。放散试验方法热放散乙醚放散磷酸氯喹放散冻融放散柠檬酸放散热放散试验方法：56℃放散，离心取上清放散液。应用：ABO血型系统新生儿溶血病、ABO亚型检测及从红细胞上洗脱掉IgM、IgG抗体。特点：少量破坏红细胞。乙醚放散试验应用：主要应用于温自身抗体（IgG）或同种抗体引起的直抗阳性，以及用于分离IgG抗体混合物。鉴定Rh抗体效果最好，不宜于ABO抗体鉴定。特点：破坏红细胞膜释放抗体。放散试验的临床意义ABO亚型的鉴定从含有多种抗体的血清中分离出一种抗体全凝集和多凝集细胞的血型鉴定被不完全抗-D遮断的新生儿血型鉴定吸收放散试验应用证实存在于红细胞上的弱抗原，如ABO亚型。分离、鉴定混合抗体。除去血清中不需要的抗体。浓缩低效价的抗体。核实抗体特异性。利用吸收放散技术鉴定引起新生儿溶血病和免疫输血反应的抗体。研究鉴别免疫性溶血性贫血的抗体。凝集抑制试验概念：可溶性的血型物质与对应的血型抗体结合，可中和该抗体，或使该抗体凝集对应红细胞的能力受到抑制。可溶性血型物质：游离于血浆、唾液等体液中的血型抗原，如ABH、Lewis、I、P物质。PCR-SSPPCR-RFLPPCR-DNA测序基因芯片分子生物学检测技术1.下列哪项不是输血前检查的主要内容：A.患者标本检查、核对及处理B.ABO和RhD血型鉴定C.交叉配血试验D.抗体筛选E.白细胞抗体鉴定练习题

2.关于ABO血型，下列说法错误的是：A.B型人血清中有抗-AB.A型人红细胞上有A抗原C.AB型人血清中有抗-A、抗-BD.O型人红细胞上无A抗原和B抗原E.AB型人红细胞上有A抗原和B抗原练习题3.下列关于红细胞ABO血型鉴定哪项不正确：A.用已知抗体型特异性试剂血清检测红细胞抗原，称为正定型B.用已知血型的试剂红细胞检测血清中的抗体，称为反定型C.O型血清在红细胞ABO亚型鉴定中不起作用D.O型红细胞用于检查是否存在不规则抗体E.新生儿可以只做正定型练习题4.血型鉴定错误，下列哪项不是责任问题：A.标本或试剂搞错B.漏加试剂C.器材污染D.登记错误所致E.异常基因型所致练习题5.输血前抗体筛查是检测：A.患者血液中不规则抗体B.患者血液中规则抗体C.患者血液中天然抗体D.献血者血液中意外抗体E.献血者血液中天然抗体练习题6.抗体筛查试验中，盐水介质法检测为