备课素材：影印接种法及应用 高二下学期生物人教版选择性必修3

影印接种法及应用先看一道试题：营养缺陷型菌株是指缺乏合成某些营养物质（如氨基酸、维生素）的能力，必须在基本培养基中补充特殊营养物质才能正常生长的一类菌株，可自然产生或人工诱导获得。用一定方法诱变大肠杆菌并将其接种到甲培养皿上，一段时间后将菌落影印接种（不改变菌落位置）到乙、丙两培养皿中，进一步培养一段时间可筛选出营养缺陷型菌株，结果如图所示。下列说法正确的是（）A.将大肠杆菌接种到甲培养皿的方法为平板划线法B.甲、丙两种培养基中均添加了特殊营养物质C.乙培养皿中能生长的为所需的营养缺陷型菌株D.甲中的部分大肠杆菌发生了基因突变或染色体变异解析：由菌落的分布情况可知，将大肠杆菌接种到甲培养皿的方法为稀释涂布平板法，A错误；根据甲、丙两种培养基中菌落位置可知，甲中的菌种在丙培养基中均能生长，再结合乙培养基中菌落的生长情况，可推测甲培养基和丙培养基都添加了某种特殊物质，B正确；乙培养皿中不能生长的为所需的营养缺陷型菌株，C错误；甲中的部分大肠杆菌发生了基因突变，不可能发生染色体变异，因为大肠杆菌不含染色体，D错误。

这道试题提到了一种微生物的接种方法——影印接种。2019版高中生物学选择性必修三只介绍了平板划线法和稀释涂布平板法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过足够稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后，可形成单菌落。那么，什么是影印接种法？影印接种法最初是为证明微生物的抗药性突变是自发的、与相应的环境因素无关而设计的实验，目前已广泛应用于营养缺陷型的筛选以及抗药性菌株筛选等研究工作中。

具体过程是:将待测的浓缩菌悬液涂在合适的平板上，等其长好后作为母平板(每平板上的菌落控制在50~300个);

用一小块灭菌的丝绒固定在直径较平板略小的圆柱形木块上，构成印章(即接种工具);然后把长有菌落的母平板倒置在丝绒的印章上，轻轻印一下;

再把此印章在另一含有选择培养基的平板上轻轻印一下，经培养后，选择培养基平板上长出的菌落与母平板上的菌落位置对应，比较影印平板与母平板上菌落生长情况，即可从相应位置的母平板上选出待测的突变型菌落。下面以培养某种大肠杆菌（如转胰岛素基因大肠杆菌）为例说明。

选择具有标记基因青霉素抗性基因和四环素抗性基因，同时限制酶切点在青霉素抗性基因内部的质粒作运载体，与目的基因构建表达载体。不考虑多个DNA片段的连接、目的基因的自我连接和目的基因的反向连接，将得到两种质粒：原有质粒重新连接而成的空质粒和重组质粒。

将所得质粒与没有青霉素、四环素抗性的大肠杆菌混合、转化，将得到三种大肠杆菌，即未转化的大肠杆菌、导入空质粒的大肠杆菌和导入重组质粒的大肠杆菌。

将所得大肠杆菌培养，增加数量。然后接种到完全培养基上，得如图所示的6个菌落。然后，用影印接种法将菌落分别接种到含有四环素和青霉素的培养基上，培养结果如上图。其中2号、5号菌落无法在两种培养基上生存，说明所含大肠杆菌没有抗性基因，即所含大肠杆菌为未转化的大肠杆菌；1号、4号、6号菌落在两种培养基中均能生存，说明其大肠杆菌两种抗性都有，即所含大肠杆菌为转化了空质粒的大肠杆菌；3号菌落能做含四环素的培养基上生存，说明其含有四环素的抗性，不能在含青霉素的培养基上生存，说明不含有青霉素的抗性（抗性基因酶切插入目的基因后丧失其作用），综合分析其大肠杆菌含有重组质粒。3号菌落所含大肠杆菌即是要选择培养的大肠杆菌。例、下图表示运用影印培养法(使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)，检测重组质粒是否导入大肠杆菌。下列相关叙述正确的是A.导入大肠杆菌的重组质粒中有特殊的标志基因B.影印培养法使用的是固体培养基进行微生物培养C.培养基A和B提供有利于目的菌株生长的营养、pHD.培养基B中含有的特殊成分能抑制其他微生物生长答案：ABCD解析：本题考查微生物培养的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。导入大肠杆菌的重组质粒中有特殊的标志