实验四病源性球菌与杆菌

实验四病源性球菌与杆菌第一页，共三十六页，编辑于2023年，星期五二、实验内容1.自己动手观察链球菌、脑膜炎双球菌的形态;示教观察结核杆菌、白喉杆菌的形态。2.观察肠道杆菌的双糖发酵，鉴别培养基（ss培养基）的生化反应。3.化脓性球菌的鉴定⑴三种葡萄球菌的色素观察⑵乙型链球菌的溶血现象观察⑶抗“O”实验。第二页，共三十六页，编辑于2023年，星期五三、作业：1.镜下绘出4种形态图2.根据生化特性及产生色素，葡萄球菌分为哪几种类型？第三页，共三十六页，编辑于2023年，星期五实验四病原性球菌1.五类病原性球菌的形态、排列及染色性2.葡萄球菌、链球菌的培养物3.血浆凝固酶试验--玻片法4、抗链球菌溶血素”O”（ASO）乳胶试验示教 （操作，1人/组）示教示教示教第四页，共三十六页，编辑于2023年，星期五G+球菌：金葡菌链球菌肺炎双球菌1.五类病原性球菌的形态、排列及染色性示教第五页，共三十六页，编辑于2023年，星期五G-球菌：

淋球菌

脑膜炎球菌第六页，共三十六页，编辑于2023年，星期五2.葡萄球菌、链球菌的培养物示教

普通琼脂平板血平板

菌落形状色素溶血性

金葡圆形凸起光滑中等大小金黄色+柠葡同上柠檬色-白葡同上白色-

表1第七页，共三十六页，编辑于2023年，星期五

血平板甲型链球菌针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环乙型链球菌针尖小菌落、透明宽大溶血环

巧克力血平板脑膜炎双球菌菌落透明似露滴状

表2

表3第八页，共三十六页，编辑于2023年，星期五血浆凝固酶试验：凝固酶分类游离凝固酶：为分泌到菌体外的类似凝血酶原样物质，被血浆中的协同因子激活而作用于纤维蛋白原使血浆凝固。（试管法测定）结合凝固酶：是一种结合于菌体胞壁的凝固酶，是一种纤维蛋白原受体，使细菌凝聚成团成块块。（玻片法测定）第九页，共三十六页，编辑于2023年，星期五3.血浆凝固酶试验--玻片法（操作，1人/组）方法：

兔血浆兔血浆生理盐水123金葡白葡金葡+++凝集（+）不凝集（-）不凝集（-）第十页，共三十六页，编辑于2023年，星期五4、抗链球菌溶血素“O”（ASO）快速胶乳法高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平的抗体后，还有多余ASO，这些多余抗体即与SLO胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。

（操作，1人/组）

原理：第十一页，共三十六页，编辑于2023年，星期五

阳性对照

阴性对照待测血清

各加溶血素“O”1滴轻摇1min

再加SLO胶乳1滴轻摇3min

观察结果

方法：第十二页，共三十六页，编辑于2023年，星期五稀释度ASO（IU/ml）1：154001：308001：601600ASO≤250IU/ml阴性

结果判定：第十三页，共三十六页，编辑于2023年，星期五注意事项：液体量要一样，菌量一样。血浆多挑几环（一滴的量），菌少挑点，不能干。3.涂菌时间一样，出现凝集为阳性，再涂凝集物可被涂散，变阴性。第十四页，共三十六页，编辑于2023年，星期五肠道杆菌一、肠道杆菌的形态及染色性

二、肠道杆菌的培养特性

三、肠道杆菌的生化反应特点

四、Widal实验第十五页，共三十六页，编辑于2023年，星期五肠道杆菌的形态及染色片第十六页，共三十六页，编辑于2023年，星期五肠道菌的菌落形态EMB大肠：菌落呈紫黑色，有金属光泽。伤寒痢疾：菌落无色半透明。SSD大肠：大而不透明的红色菌落。伤寒痢疾：中等大小淡黄色菌落。第十七页，共三十六页，编辑于2023年，星期五大肠杆菌（EMB培养基）第十八页，共三十六页，编辑于2023年，星期五肠道致病菌（SS培养基）第十九页，共三十六页，编辑于2023年，星期五粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定

第二十页，共三十六页，编辑于2023年，星期五生化反应1——单糖发酵葡萄糖及乳糖发酵一）实验目的与原理

了解糖发酵试验方法

二）实验材料

1、菌种：大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌培养物

2、培养基：乳糖及葡萄糖发酵管

三）实验方法

１、用接种环将大肠杆菌、伤寒杆菌分别各接种于葡萄糖及乳糖发酵管中（方法同前）。

2、37孵育18~24小时，取出观察结果。

第二十一页，共三十六页，编辑于2023年，星期五动力检测第二十二页，共三十六页，编辑于2023年，星期五菌名葡萄糖甘露醇乳糖靛基质甲基红VP试验枸椽酸盐硫化氢尿素分解动力福氏志贺菌++－－/++－－－－－伤寒沙门菌++－－+－－/++－+乙型副伤寒沙门菌⊕⊕－－+－－++－+大肠杆菌⊕⊕⊕++－－－－+产气杆菌⊕⊕⊕－－++－－+普通变形杆菌⊕－－++－－/+++++常见肠道杆菌的生化反应鉴别表

第二十三页，共三十六页，编辑于2023年，星期五斜面底部H2S初步鉴定++－非病原菌－－－非病原菌－++/－副伤寒杆菌及其他沙门氏菌－++伤寒杆菌－+－痢疾杆菌

铁质双糖琼脂基上各种肠道杆菌的生长情况

第二十四页，共三十六页，编辑于2023年，星期五肠道杆菌在KI培养基上的培养特性第二十五页，共三十六页，编辑于2023年，星期五Indol实验生化反应2——Indol实验第二十六页，共三十六页，编辑于2023年，星期五2.肠道杆菌在SS培养基上的生长现象示教

大肠杆菌伤寒杆菌SS平板红色大菌落无色透明小菌落

基础培养基，乳糖(底物)，胆盐、煌绿(抑制非致病菌)，中性红（指示剂）。SS培养基：第二十七页，共三十六页，编辑于2023年，星期五3.五类肠道杆菌的生化反应及动力示教大肠杆菌⊕⊕--+++/⊕变形杆菌⊕-+++/-+-/⊕乙型副伤寒杆菌⊕-++--+-/⊕伤寒杆菌

+-+/---+-/+痢疾杆菌

+---+/---/+葡萄糖乳糖H2S尿素靛基质动力双糖铁第二十八页，共三十六页，编辑于2023年，星期五4.肠道杆菌未知菌1和未知菌2的鉴定（操作，2人/组）未知菌双糖铁培养基(乳糖/固体/上，葡萄糖/半固体/下)生化反应葡萄糖发酵乳糖发酵尿素酶试验H2S试验靛基质试验（蛋白胨水液体培养基）动力试验（半固体培养基）（微量发酵管）

方法：血清学鉴定（玻片凝集反应）（37℃×18~24h）第二十九页，共三十六页，编辑于2023年，星期五伤寒诊断血清伤寒诊断血清

++

未知菌1未知菌2血清学鉴定（玻片凝集反应）？？第三十页，共三十六页，编辑于2023年，星期五

结果：

双糖铁葡乳尿H2S靛动力血清学未知菌1未知菌2

结论：未知菌1：？未知菌2：？第三十一页，共三十六页，编辑于2023年，星期五第三十二页，共三十六页，编辑于2023年，星期五

管号加入物12345血清（Ab）1：250血清0.25ml1:500血清0.25ml1:750血清0.25ml缓冲液0.25ml0.25ml溶血素“O”(Ag)0.25ml0.25ml0.25ml0.25ml2%兔RBC0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml结果——﹢﹢＿第三十