LpPLA2人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测试剂盒课件

国际研究一致结果125,000+受试者在国际主流专业杂志和会议报告中，已有超过100项临床研究和综述分析的结果支持Lp-PLA2

作为一个心血管疾病的标志物在传统危险标志物的基础上提供了新的信息国际权威指南一致推荐2010ACCF/AHA无症状成人心血管风险评估指南•可考虑对中等风险的无症状成人进行Lp-PLA

检测以2进一步评估风险。2011AHA/ASA卒中一级预防指南•在未有心血管疾病的患者中检测炎症指标如hs-CRP或Lp-PLA

可以鉴别出有较高卒中风险的患者。22012AACE高脂血症管理与动脉粥样硬化预防指南•一些研究证明，在有必要进一步对患者进行风险评级时，Lp-PLA

检测比hs-CRP具有更高的特异性。22012ESC欧洲心血管疾病预防临床实践指南•对有复发急性血栓事件的高风险患者可以检测Lp-PLA

以进一步评估风险。2国内专家一致认可——“脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA

)是2血管内皮炎症的独立危险因子，也是目前检测血管内皮炎症的新指标。对心脑血管栓塞性疾病的预测、治疗和预后的判断具有重要意义。”中华医学会心血管病学分会主任委员，著名心血管专家胡大一教授摘自2012中国脑卒中大会主题论坛报告——“脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA

)已2成为AS抗炎治疗的新靶点，初步研究发现通过抑制磷脂酶A2，可以减少血管壁脂质的沉积和巨噬细胞的浸润。”摘自《动脉粥样硬化不稳定斑块的研究进展》中国工程院院士，美国心脏病学院院士，著名心血管专家张运教授临床一线期待已久“我国一年心外科手术量已达到18.5万例，但还远不能满足我国患者需要，原因就在于我国心血管疾病发病率太高，每年新增冠心病患者300万。因此预防的作用比治疗更重要，并且其社会效益要远高于手术。而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测为心血管疾病预防提供了一个有力武器。”——中国医师协会心脏外科医师分会副会长

孙立忠“心血管医生最关心的一点就是高危患者心血管事件发生风险。如果能够早期预防，在发生重大事件之前把危险控制住，那就可以减少病死率。但目前临床常用的检测指标如肌苷激酶等出现时为时已晚，而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测为临床提供了一个预警及风险评估的有力工具。”——北京大学第三医院心内科主任

高炜“现有的检验指标如胆固醇、LDL、HDL确实在心血管疾病风险评估方面发挥一定作用，但并不全面。甚至有些方法如血小板活化检测还不够稳定。因此实验室迫切需要一个方法稳定、特异性强又独立于胆固醇之外的风险评估方法，而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测就提供了这样一个方法。”——中国医师协会检验医师分会会长

丛玉隆2011.7.16

北京

钓鱼台国宾馆国家863高科技成果中国首家和唯一上市产品•

中国首家和唯一上市产品•

国家863科技攻关项目高科技成果•

快速监控和预测心脑血管栓塞性疾病•

填补中国心脑血管疾病快速预警检测的空白•

与会专家：•

中国人民解放军总后卫生部原副部长•

广东省卫生厅副厅长•

中国医药生物技术协会副会长•

科技部火炬高技术产业开发中心处长陈新年耿庆山于修成雷庆西•

中国医师协会心脏外科医师分会副会长

孙立忠•

中国医师协会检验医师分会会长•

北京大学第三医院心内科主任•

北京大学首钢医院心血管医学中心主任•

卫生部北京医院心内科主任丛玉隆高炜王宏宇许峰心脑血管疾病是造成人类死亡的主要病因男性女性恶

肿恶性性肿瘤瘤心心脏病病

脑血血管病管病呼呼吸吸系系疾统病疾脏脑统病来源：《2012中国卫生统计年鉴》来源:美国国家健康中心2012年统计数据心脏猝死：经常是首次心脏病爆发MyerburgRJetal.

Circulation.2012;125:1043-1052研发背景动脉粥样硬化（AS)是造成心脑血管疾病的主要原因AS是一种炎症反应性疾病在粥样斑块形成、进展和最终破裂的过程中均有炎性介质的参与寻找一个能够反映这种动态变化过程的炎性介质就能够检测并跟踪动脉粥样硬化的严重程度目前脂蛋白相关磷脂酶A2（Lipoprotein-AssociatedPhospholipaseA

Lp-PLA

)已被国际专家公认为一种新2，2的炎性反应标志物内容•

心脑血管疾病现状及研发背景•

Lp-PLA

与动脉粥样硬化的关系2•

临床研究•

临床意义•

康尔克Lp-PLA

定量检测试剂盒简2介•

产品详解与注意事项Lp-PLA2•

脂蛋白相关磷脂酶A2，英文缩写Lp-PLA2。•

又称血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）。•

分子量为45KDa

。•

由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并受炎性介质的调节。•

水解ox-LDL-C上的磷脂，生成促炎物质lyso-PC和ox-FA，因此具有促炎症和促动脉粥样硬化的作用。Lp-PLA

在粥样斑块形成中的作用2稳定斑块vs易损斑块组织学特征对比薄纤维帽厚纤维帽大型坏死脂质池小型坏死脂质池血管腔血管腔血栓Lp-PLA2Lp-PLA2稳定斑块易损斑块•

Lp-PLA

含量较低(深色染色)•

Lp-PLA

含量较高(深色染色)22•

纤维帽厚，胶原含量高•

小型坏死脂质池•

炎症程度较轻•

纤维帽薄，胶原含量低•

大型坏死脂质池•

炎症程度较重CorsonMAetal,AmJCardSuppl2008:101(41F-50F)斑块易损性与其Lp-PLA

含量成正比2Lp-PLA

染成棕红色2血栓早期斑块出现脂质池稳定斑块纤维帽变薄，出现小型坏死脂质核易损斑块薄纤维帽破裂斑块血管中出现血栓疾病进展KolodgieF,etal.

ArteriosclerThrombVascBiol

2006>25已发表研究结果显示:Lp-PLA2升高导致心血管事件风险加倍Packard(WOSCOPS),

NEnglJMed2000–CHDBlake(WHS),

JAmCollCardiol

2001–CHDBlankenberg(AtheroGENE),

JLipidRes

2003

-CADBallantyne(ARIC),Circulation

2004-CHDLDL<130Winkler,

JClinEndocrinologyandMetabolism

2004–CHDOei(Rotterdam),

Circulation

2005–CHDBrilakis(MayoHeart),

EurHeartJ

2005–CHDBallantyne(ARIC),ArchInternMed2005–StrokeOei(Rotterdam),

Circulation

2005–StrokeWinkler(LURIC),Circulation

2005–CHDKhuseyinova(HELICOR),Atherosclerosis2005–CHDKoenig(KAROLA),

ArteriosclerThrombVascBiol

2005–CVDMay(IntermountainHeart),

AmHeartJ

-CHDJenny(CHS),AHA-EPIAbstract2006–MIElkind(NOMAS),ArchInternMed2006–StrokeO’Donoghue(PROVEIT),Circulation

2006–CVDCorsetti(THROMBO),

ClinicalChemistry

2006-CHDGerber(OlmstedCounty),

ATVB2006-DeathS/PMIOldgren(GUSTO/FRISC),

EurHeartJ2007-AcuteACSSabatine(PEACE),AHA-ScientificSessions

2006-CVDPersson(Malmo),

ArteriosclerThrombVascBiol

2007-CVDMockel(NOBIS-II),ClinResCardiol

2007–CVDHatoum(Nurse’sHealthStudy),CircSuppl2007–MIDaniels(RanchoBernardo),JACC2008–CHDCorsonMAetal,AmJCardSuppl2008:101(41F-50F)0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5Lp-PLA

前瞻性研究汇总分析2Lancet

（柳叶刀）2010•

32项前瞻性研究•

79,036

名受试者•

每年新增474,976

名患者存在心脑血管风险•

17,346次血管与非血管事件TheLp-PLA

StudiesCollaboration,Lancet

2010;375:1536–44.2Lp-PLA

前瞻性研究汇总分析2Lancet(柳叶刀）

2010•

Lp-PLA

水平与心血管疾病2呈显著线性相关。•

相对基线，Lp-PLA

每提高2一个标准差所导致冠心病风险比的增加值与传统风险因子血压和非HDL-C相当。•

Lp-PLA

是独立的心血管疾病2风险预测指标，不受其他生物指标的影响，也为炎症、动脉粥样硬化与心血管疾病之间的联系提供了新的佐证。TheLp-PLA

StudiesCollaboration,Lancet

2010;375:1536–44.2Lp-PLA

vshs-CRP2Lp-PLA2hs-CRP血管内皮炎症的标记物由巨噬细胞产生全身性炎症的标记物全身炎症急性期由肝脏产生在血管炎症过程的早期阶段

在心血管疾病中的具体作用不清启动楚不受其他炎症性疾病影响在所有炎症性疾病患者中均升高是一个可用于冠心病药物干

在干预治疗中不是一个特异靶点预治疗的特异靶点Lp-PLA

vsHCY2Lp-PLA2血管内皮炎症的标记物HCY人体蛋氨酸代谢的中间产物当血管内皮受损时，由巨噬

与体内一碳单位代谢有着密切关细胞产生

系在血管炎症过程的早期阶段

在心血管疾病中的具体作用不清启动，具有促进炎症和动脉

楚，会影响体内许多物质的甲基粥样硬化的作用化过程，从而影响机体正常代谢血管内皮炎症的特异性指标，

受遗传、饮食、性别、年龄、肾不受年龄、性别、饮食影响

功能等多种因素影响是一个可用于冠心病药物干

在干预治疗中不是一个特异靶点预治疗的特异靶点Lp-PLA

生物变异性低250%40%30%20%10%0%50%46%42.6%40%30%22.8%20%10%10%0%7.4%4.7%HDL4%Lp-PLA2>250ng/mLhsCRPLp-PLA2

CRPLDLTG>3mg/L43份健康成人4周7次抽血血样90份未患心脏病健康人群的血样LermanA,McConnellJP.

AmJCardSupplement

2008.冠心病患者LDL-C水平：72%的患者低于130mg/dLGetWiththeGuidelines

database,levelsatadmissionSachdevaetal.AmHeartJ

2009;157:111-7.e2总胆固醇及LDL-C在冠心病预测中的局限性Framingham心脏研究——26年随访数据显示：•

35%冠心病患者的总胆固醇水平<200mg/dL1•

80%发生MI患者与未发生MI患者含有相似的胆固醇水平•

冠心病患者LDL-C水平的中值为150mg/dL1•

仅有25%的早发性冠心病患者的发病与LDL-C水平升高有关21CastelliW,

Atherosclerosis1996

GenestJJr,etal.

JAmCollCardiol

19922胆固醇并非卒中的可靠预测指标未患卒中卒中患者P=0.44P=NSP>0.051.

BallantyneCM,etal.

AHA20044.••BowmanTS,etal.Stroke1998OeiHH,etal.

Circ.

2005WannametheeSG,etal.

Stroke2000••BergerK,etal.

Stroke1998TanneD,etal.Circ.2001传统风险因子在冠心病患者中的流行程度4RiskFactors0.9%3RiskFactors8.9%%0RiskFactors19.4%62.4%

冠心病患者仅含有0-1个传统风险因子2RiskFactors27.8%1RiskFactor43%N=87,869分析的四个因子:高血，吸烟，高血脂症，糖尿病KhotUM,etal.

JAMA2003.Mayo研究:利用Lp-PLA

预测心梗后生存期26.05.4*5.0发生MI后，高水平Lp-PLA

患者1年内死亡风险2是低水平患者的5倍4.03.02.22.01.01.00.0≤

166ng/mL167-218ng/mL≥219ng/mL*p<0.001aftermultivariateadjustmentforage,sex,hypertension,BMI,diabetes,smoking,LDL-CGerberY,etal.

ArteriosclerThrombVascBiol2006Mayo研究：利用Lp-PLA

预测2冠心病患者主要心血管事件发生率95%

的Lp-PLA

<200ng/ml患者4年内未发生2BrilakisESetal.MayoHeartStudy.

EuroHeartJ2005北曼哈顿卒中研究(NOMAS)

：利用Lp-PLA

预测卒中复发风险22.5复发性卒中2.1

(95%CI1.04-4.18)首发卒中后任何心血管事件1.9

(95%CI1.01-3.42)2.0Lp-PLA

升高，卒中复发风险加倍21.5复发性卒中事件N=80,其他心血管事件N=1221.01.00.5Adjustedfordemographics,traditionalriskfactors,strokeseverity,andbothmarkers0.70.0Highhs-CRPHighLp-PLA2ElkindMS,etal.ArchIntMed2006.一级预防——对急性冠脉综合征的预测评价经冠脉造影证实无冠脉狭窄者(对照)28例、急性冠脉综合征(ACS)27例、稳定型心绞痛(SAP)28例。检测血浆Lp-PLA

水平。2组别例数27Lp-PLA

(ng/ml)2急性冠脉综合征(ACS)稳定型心绞痛(SAP)无冠脉狭窄者(对照组)706.00±149.91*427.75±44.58*267.69±92.67228注:与对照组比较*P＜0.001陈锦峰,等.广东医学

2011;32(10):1263二级预防——对进展性脑梗死的预测评价168

例急性脑梗死(ACI)患者每天进行NIH卒中量表(NIHSS)评分，其中进展性脑梗死40例，稳定性脑梗死128例。检测血浆Lp-PLA

水平。2组别例数16840Lp-PLA

(μg/L)2ACI组12.058±7.104*进展性脑梗死组稳定性脑梗死组正常对照组17.304±10.630*10.419±4.5767.268±3.112Δ12872注:与正常对照组比较*P＜

0.01;与稳定性脑梗死组比较△P＜

0.01王磊,等.临床神经病学杂志

2011;24(4):309.病情评估——对神经功能损伤程度的评价选择动脉硬化性脑梗死(ACI)

患者128例和未卒中对照者88例为研究对象，检测血浆Lp-PLA

的水平。按NIH中风量表2(

NIHSS

评分)

进行神经功能缺损程度评估。分析神经功能缺损程度与血浆Lp-PLA

水平相关性。结果r=0.829，P=0.001。2组别例数32Lp-PLA

(μg/L)2轻型梗死组中型梗死组重型梗死组53.45±5.47*65.68±6.07*77.11±5.126630注:与重型梗死组比较*P<0.05梁江红,等.实用医学杂志2009;25(14):2264.疗效评价不同剂量阿托伐他汀治疗急性脑梗死选择急性脑梗死患者86例，

随机分为2组：阿托伐他汀常规剂量组43例：20mg/天，大剂量组43例：40mg/天，

分别于治疗前及治疗14天后测量患者血浆Lp-PLA

水平。另选择43例健康2体检者为对照组，不予阿托伐他汀治疗。阿托伐他汀治疗前后血浆Lp-PLA

(μg/L)变化的比较2常规治疗组对照组

急性脑梗死组

治疗前

治疗后大剂量组治疗前

治疗30.52±2.9143.95±5.70#44.22±6.25

37.63±4.53*

43.69±5.16

35.63±4.16*注:治疗前和治疗后比较*P<0.05；与对照组比较陈军,等.临床医学工程

2011;18(7):982#P<0.05康尔克Lp-PLA

定量检测试剂盒特点2•

准确、可靠、重复性好•

灵敏度高•

简易、快捷，静脉取血2-5ml送检，1.5小时出结果•

无需空腹，任何时间均可取血•

性能达到美国同类产品水平•

性价比高：美国同类产品临床检测收费250美元左右，约合人民币1500元，本产品仅为350元人民币，医保、新农合、公费医疗均能报销。临床检测人群•

传统风险评级已经确定为中危的人群患者——增强危险级别•

接受他汀类抗炎治疗的患者——评估—调整—效果•

高血压患者——评估—调整—效果•

发生过中风、ACS、AMI等急性不良事件的患者——预测二次事件-强化治疗方案临床实践举例评估通过传统危险因素检测的患者测试测量中高危患者的Lp-PLA

水平>175ng/ml>175ng/ml2≤175

ng/ml≤175ng/ml治疗达到合适LDL-C水平<4.0mmol/L<3.3mmol/L<2.5mmol/L<1.8mmol/L产品组成及安全性规格48人份名称主要组成成份96人份24人份1．Lp-PLA2酶联反应板1块（96孔）

1块（48孔）

1块（24孔）1瓶，70ul，

1瓶，50ul，

1瓶，50ul，Lp-PLA2包被抗体Lp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷酸缓冲液2．

标准品1浓度：1000

浓度：1000ng/ml

ng/ml浓度：1000ng/ml1瓶，70ul,

1瓶，50ul,浓

1瓶，50ul,浓浓度：500

度：

度：Lp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷本试剂盒中采用的试剂都不具酸冲缓液有毒3．标准品2ng/ml500ng/ml500ng/ml1瓶，70ul,

1瓶，50ul，

1瓶，50ul，Lp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷性、致畸致突变性，也不含有人血液制4．标准品3浓度：250浓度：250浓度：250酸缓冲液品，因此不具有生物学危害，但仍需作ng/mlng/mlng/ml1瓶，70ul,

1瓶，50ul,浓

1瓶，50ul,浓浓度：100

度：

度：Lp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷酸缓冲液5．标准品4为一般生物

加n0g0/

m以防100

。g/ml

试剂

护ng/m11瓶，70ul,

1瓶，50ul，

1瓶，50ul，nLp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷酸缓冲液6．

标准品5浓度：50ng/ml浓度：50浓度：50ng/ml

lng/ml

l1瓶，70ul,1瓶，50ul,浓

1瓶，50ul,浓度：0ng/ml

度：0ng/ml7．

标准品（空白）

浓度：0ng/ml8．

稀释液（10倍）

1瓶,1.5ml牛血清白蛋白,磷酸缓冲液牛血清白蛋白,磷酸缓冲液辣根过氧化酶标记抗体，牛血清白蛋白,磷酸缓冲液

1瓶,1.0ml

1瓶,0.5ml

1瓶，9．

酶标记物

1瓶，15ml

1瓶，4ml7.5ml10．洗涤液（20倍）

1瓶，30ml

1瓶，15ml

1瓶，8ml

磷酸缓冲液，吐温

1瓶，2.5ml11．显色液1瓶，10ml

1瓶，5ml四甲基联苯胺12．终止液13．说明书1瓶,6ml一份

1瓶，3ml

1瓶，2ml一份

一份硫酸检验原理——ELISA样品处理•

样品收集、处理和保存：•

血浆：用EDTA抗凝管取血2ml，1500r/min离心10分钟，收集上清液。•

血清：用普通管或促凝管取血2ml，4℃下放置30分钟后，1500r/min离心10分钟，收集上清液。•

保存:

血浆（清）如不即时检测，则须于-20℃保存，并避免反复冻融。操作方法1）

从冰箱中取出试剂盒，室温平衡20min，将标准品离心，1000r/min，1min2）分别加入80ul稀释液（1倍)和20ul待测样品或标准品于反应孔内,混匀,37℃温育20min3）弃去孔内液体，每孔加300ul洗液(1倍），振荡20-30sec后弃去洗液，重复4次，拍干残液4）加入100ul酶标记物，混匀，37℃温育30min5）重复步骤

3）6）每孔加入显色液100ul，混匀，37℃温育20min，避光7）加入50ul终止液8）立即用酶标仪在450nm条件下测定各孔OD值9）以OD值为纵坐标（Y），相应Lp-PLA

标准品浓度为横坐标（X），制作标准曲线210）根据样品的OD值计算得出样品的Lp-PLA

含量2检验结果的解释•

对临床的检测结果进行统计分析之后，175ng/ml以下正常,

175ng/ml以上为危险。•

如样本的Lp-PLA

的含量低于临界值，则视2为正常；如高于临界值则提示为其动脉可能有粥样硬化炎症，且炎症与Lp-PLA

的含量2成正比。产品性能指标剂量-反应曲线的线性•

用logistic数学模型或其他数学模型拟合，剂量-反应曲线相关系数（r）应不低于0.9900。22r

=0.97917r

=0.99998产品性能指标准确性