第三章免疫球蛋白

第三章免疫球蛋白免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。抗体（antibody,Ab)是B细胞识别抗原后增殖分化为桨细胞所产生的一种蛋白质，主要存在于血清等体液中，能与相应抗原特异性地结合，具有免疫功能.与抗体有关的诺贝尔奖获得者1901vonBering血清治疗1908Ehrlich&Metchnikoff抗体生成、吞噬1972Edelman&Poter抗体分子结构1977Yalow放射免疫测定1984Koler,Milstein&Jerne单克隆抗体1987TonegawaIg基因结构免疫球蛋白与抗体的关系所有的抗体都是免疫球蛋白，但并非所有的免疫球蛋白都是抗体。免疫球蛋白是结构和化学上的概念，抗体是生物学和功能上的概念。Ig可分为二类：分泌型(secretedIg，sIg)：存在于体液(血清、组织液,外分泌液)。膜型(membraneIg，mIg)：即B细胞膜上的抗原受体。第一节免疫球蛋白的结构一、免疫球蛋白的基本结构四肽链结构所有Ig的基本单位都是四条肽链的对称结构。两条重链（H）和两条轻链（L）。每条重链和轻链分为氨基端和羧基端。人类Ig根据其重链稳定区的分子结构和抗原特异性的不同，分为五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE，其重链分别为：γ、α、μ、δ、ε轻链可分为两型：κ、λ型Ig的两条长链称为重链（Heavychain,H链）

重链可分为μ、γ、α、δ、ε链

Ig的两条短链称为轻链（Lightchain,L链）可分为κ、λ型。每个Ig分子的两条轻链完全相同。

IgMIgGIgAIgDIgE可变区根据氨基酸排列顺序的不同分为可变区（V）和恒定区（C）。比较不同抗体V区的氨基酸序列，发现VH和VL各有3个区域的氨基酸组成和排列顺序特别易变化，这些区域称为高变区。三个高变区共同组成Ig的抗原结合部位，该部位也称为互补性决定区.恒定区重链和轻链的C区分别称为CH和CL，不同类Ig的重链CH长度不一，同一种属动物中，同一类别Ig分子C区氨基酸的组成和排列顺序比较恒定。铰链区位于CH1与CH2之间，含有丰富的脯氨酸，因此易伸展弯曲，而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解。免疫球蛋白的结构高变区二、免疫球蛋白的功能区每个功能区约由110个氨基酸组成，其氨基酸的序列具有相似形或同源性。其二级结构是反向平行的β片层IgG,IgA,IgD:Lchain:VL,CLHchain:VH,CH1,CH2,CH3IgM,IgE:Lchain:VL,CLHchain:VH,CH1,CH2,CH3,CH4功能取区的蹄作用VL会,圾VH粗:超变范区，哨互补旷决定含区（CD满R)婆:与抗胜原特指异性结昨合部茄位CL，CH进1:同种脚异型哭的遗翅传标炎记CH殃2,败C榴H3隆(I赏gM夸):补体C1听q结合跨点，翁激活常补体Ig玻GCH拿2:通过绪胎盘Ig闷GCH灵3:与单赢核细田胞、士巨噬舌细胞俩、中宫性粒昌细胞例、NK细胞选、B细胞拖表面想的FcR结合致。Ig商ECH躬2和CH摇3：与肥厦大细卷胞和蜡嗜碱红性性纵粒细闭胞表面被的Ig纳EFc结合铰链里区：适于V区同得抗原娃的结测合。含鸟大量闹脯氨田酸，限富有乔弹性和伸怎展性帖，能姻使Ab与不患同距倦离的嫂抗原摧决定莫簇结俩合，答也利术于暴删露补涨体结盯合位扁点。三、冶免疫绢球蛋骄白的择水解堂片段木瓜末蛋白畅酶水习解Ig免G得到传两个之相同螺的Fa昨b段和秆一个Fc段。胃蛋猛白酶咬裂解Ig叫G得到艇一个块具有陷双价意活性蓄的F（ab’）2段和笨若干半个小农分子赔多肽旺碎片咐（pF贸c’）四、J链和崇分泌扎片（一者）连扯接链晨（J链）由浆侄细胞某合成声的一比种糖娘蛋白怕。Ig逮A和Ig周M含有J链可稳唯定Ig多聚角体的佩成份（二垂）分损泌片是分披泌型Ig仔A(在sI蛋gA）的一漂个辅秘助成程分，扫由粘膜结上皮耽细胞豆合成筛和分拴泌。保护sI津gA的铰禁链区性免受智蛋白棕酶的贱水解摄破坏介导Ig难A二聚絮体的朱转运第二讲节干免剑疫球英蛋白迅的功摆能V区的弃功能专：主要抓功能坛是识晃别和惹特异卷性的抛结合顷抗原螺，是V区特艳别是HV叔R（CD踪蝶R）的空狼间构喜型所歼决定Ig单体销可结仓合两蛇个抗娇原表建位，挖为双氏价Ab+A控g—基—发挥靠免疫换效应B细胞稠膜表证面的Ig遣M和Ig啦D是B细胞苗识别在抗原层的受太体C区的粉功能速：☆激员活补呆体Ig蒜M，Ig贱G1崖~3腹+片A世g☆结合穴细胞狡表面猪的Fc受体调理锅作用、AD便CC作用、介导I型超懒敏反筋应☆穿过虫胎盘踏和黏约膜BA吸CK或其它大分子细菌代谢产物抗原细菌1.抗原抗体复合物2.结合细胞调理吞噬作用肥大细胞脱颗粒4.炎症反映3.激活补体介导杀伤抗独盼特型吊抗体

抗体的抗原结合部位（antigenbindingsite）是抗原三维结构的“映象”。抗体的这一独特氨基酸结构称为独特型（idiotype）。将某堆一抗岗体注治射到荡另一愚个动崭物体暂内，搅可产盏生这斑一抗潜体的抗独吗特型贸的抗唤体（an演ti咸-i牲ds）。这一兄抗体祸“模讲仿”灯了抗村原三冤维结适构，抬可被粮用于援作为评疫苗在。把抗泪独特凝型的乡丰抗体取作为垃疫苗集注入眼人体旬，可舱产生抗-抗独成特型姿的抗尘体（an于ti览-a营nt族i-id书io活ty圈pean坑ti帖ob冻od姐ie裤s），它识驳别的越结构萄与病洪毒（识抗原手）的锋结构须相似刊，具抽有潜扑在的樱中和嘉病毒民的可喘能性哪。即汗：对连乙型求肝炎胃表面爱抗原男（he方pa狂ti案ti挣s董B逢S示an辜ti清ge符n）反应望的抗炼体的惯抗独校特型接抗体聋可激床发抗遇病毒北的抗猜体。Ig绳G于出搏生后3个月爽开始吃合成Ig蚁G为单觉体，咳半衰胀期约23天，额血清遍含量雀最高姓，占聪血清抓免疫伤球蛋箱白总征量的75虑%，是洲血清拜中主往要的蛮抗感厕染抗赔体。Ig稼G1、Ig代G2和Ig枪G3的CH重2能通截过经保典途史径激它活补脱体。一、Ig厕G第三府节告五需类Ig的特隶性与挣功能Ig男G是唯蛙一能澡通过动胎盘肯的抗撤体通过Fc段与廊吞噬袭细胞沃表面Fc价R结合坛，发含挥调绣理作暮用；衣与NK细胞笋结合童，发恼挥AD慈CC作用音；与写葡萄笨球菌A蛋白龙结合命，可象用于购免疫晌学诊僵断和Ig哭G抗体伐的纯末化。具有湾抗菌孝、抗怠毒素座和抗款病毒召作用参与Ⅱ、Ⅲ型超汉敏反床应二、Ig附M五聚绢体，割是分狭子量每最大蝇的Ig，又称驼为巨膜球蛋夺白。个体辆发育督过程朗最早鞭产生御的抗启体，营胚胎译晚期休开始拆合成博，新柱生儿波脐带分血中Ig染M水平旋升高留，提衡示胎鼻儿曾澡有宫扮内感跳染。Ig只M激活帅补体优能力劫比Ig棒G强天然廉血型耻抗体Ig瓜M在早脉期免衬疫防牺御过启程发钻挥重苍要作帜用，轨是血堪液中赖抗感吉染的步主要秆抗体习。Ig仅M是抗筹原刺桐激后柄出现离最早杂的抗留体，漏故检晋测Ig拘M水平念可用窃于传抢染病促的早磁期诊切断。膜Ig响M是B细胞毁抗原谱受体犯的主欧要成音分参与Ⅱ、Ⅲ型超乏敏反选应J诵链Ig敬M的结拘构Ig铸MJ重链两种Ig费M的比爆较分泌架型Ig料M膜型Ig双MmI阿gMIgaIgbIgaIgbmeB细胞功表面Ig袜M分泌脸型Ig穗A(双体)血清怠型Ig家A(单体)分泌隙型Ig厘A(捏sI涨gA，双体)sI缎gA是局块部和禽粘膜嚷免疫另的主公要IgJchainSC四、Ig撤DIg课D是B细胞辈的重户要表岭面标飘志未成腾熟B细胞驾仅表摔达mI辜gM成熟B细胞志同时叛表达mI似gM和mI启gD活化B细胞水或记浅忆B细胞好表面脖的mI找gD逐渐摔消失膜型Ig央D是B细胞泛表面甘的抗唱原受途体(B贡CR棉)

IgD分子的结构五、Ig惨E又称选亲细稀胞抗屑体CH维2和CH乔3功能胞区可蕉与肥饭大细现胞、大嗜碱砍性粒榆细胞诵上的庙高亲刘和力Fc查ε受体臂（Fc故εR宜1）结合陷，引便起I型超奏敏反黎应。第四吨节闭单克拔隆抗极体和匠多克要隆抗铜体多克演隆抗舒体用抗园原免患疫动酸物后贷获得观的免导疫血昂清（缝抗血地清）由不争同克遗隆的B细胞狮针对座不同仆抗原蛋决定送簇所产京生。多克天隆抗病体棒多栋个抗洪原决责定基——机体——多种我抗体北的混染合物单克偿隆抗沃体（mo阿no说cl膨on协al者a屡nt眠ib蓝od楚y）为只帮针对参某一单特定泰的抗漆原决旱定基贵，纯厘度高状的抗锋体二犹单克有隆抗凶体单克狡隆抗糟体概售念：每一陈克隆B细胞无所产由生的闯理化荒性状壮高度牵均一躁、组众成均抛一、摘只与萄同一滔种抗辛原决衣定族障反应半的抗碧体，煎称为雷单克百隆抗关体（mo猾no提cl勉on邻alan订ti客bo肚dy沿,M瞎cA活b）。杂交东瘤技情术制铸备单灶克隆挪抗体穷流程动物妙免疫分离赖脾细槐胞制备刮骨髓素瘤细隆胞细胞暂融合HA腰T培养砍基选拖择杂协交瘤断细胞阳性刑孔克脚隆化决并扩后大培赛养再次健克隆克隆测扩大窄培养扩大划培养拿收集米上清贺液动物删接种奴收集缩慧腹水单克规隆抗顿体纯历化保杯存EL召IS披A测血清单克律隆抗玻体的罗基本岂技术1.抗原摩提纯豪与动竭物免划疫：抗原距纯度造高：馅电泳及纯与骨竖髓瘤参细胞坝同源通的BA锤LB市/c小鼠2.细胞劳的选丈择：A经过神抗原淘免疫吨的B细胞豆（脾外细胞蔑）。B肿瘤借细胞(多发找性骨寺髓瘤稳细胞:S稿p2违/0）。3.细胞握融合闹：融合怠剂：挨聚乙超二醇(P胜EG篇,常用控聚合言度10扁00齐~2躺00枯0浓度w/除v：40非%)细胞跃比例灯：1:昨2~离1:萄10，常遍用1:笔4。反停应时逃间：2~未4m骡in。4.培养傍基的们选择阻：HA漠T培养槽基。场含有顶三种凳关键械成分演：次汪黄嘌妇呤(hy硬po者xa米nt伸hi根ne耽,H)氨甲好蝶呤(am网in僻op已te旗ri条n,夫A)和胸考腺嘧塌啶核收苷(th揪ym子id自in魂e,鸦T).5.细胞阿的DN奔A合成疯一般现有两加条途膜径：A：由糖闭和氨假基酸探合成厘核苷争酸，侄进而炊合成DN糠A，叶酸筒作为南重要家的辅成酶参所与反或应。B：在次押黄嘌槐呤和医胸腺假嘧啶借核苷美存在敲下，循经次朝黄嘌率呤磷最酸核荐糖转母化酶(H赔GP绝RT并)和胸喉腺嘧素啶核胶苷激巡寿酶(T丘K)的催攻化下胳合成DN灵A。6.袜HA太T培养尘基的负选择朋原理疲：⑴钱氨甲溉蝶呤(A殿)是叶划酸拮贝抗剂利，可意阻断谜细胞席利用的正常拜途径应合成DN客A，细胞凳在含泄有氨湾甲蝶巴呤的慰培养砖基中杨不能掘通过句正常响途径胞合成DN之A。⑵瘤细渐胞是HG兵PR营T酶阴扑性细谢胞，烤自身半不能敢通过薯替代听途径沫合成DN杏A而繁症殖。⑶B细胞毅虽含浙有HG彼PR墙T，但不虽能在复体外诵培养显存活躁（只峡存活5~华7d，且功示能下兔降)。⑷轨融合血细胞粥含有B细胞减和瘤哲细胞啊，其晌中瘤拦细胞旦核利僚用B细胞胀的HG逆PR送T酶进丽行旁稳路合愤成DN麻A而存贡活。7.克隆爽化并寇扩大著培养(单细降胞培蔬养称毛为克迈隆化)：⑴有严限稀闷释法:将细妨胞悬伴液逐阁次稀泪释后美加入羽培养倦孔(3坏6%的孔绘为1个细贺胞/孔)，可资获得约单个拉细胞俘形成汁的克圾隆，跑选择槐高分肢泌抗络体的崭细胞愚株扩俊大培司养或芝冻存降。⑵显梅微操顺作法朱：在铜倒置灾显微友镜下历吸出拼单个丘细胞夕培养迹。⑶软垫琼脂闷平板印法：形下饲问养/上融值合C,分层话培养芽后用布⑵法⑷细起胞分钩选仪度法：陷流式筋细胞碎仪分惰选。8.单克呆隆抗工体的福制备辫、纯瞎化：A体外屿细胞斧株扩值大培泪养，昨取上勇清液良提纯驶。B接种而小鼠歌腹腔显，取葛腹水慨提纯哲。C纯化赵按抗谨体纯励化步昨骤进无行。9.细胞侍株冻当存和盏复苏怀：加使小牛见血清雅或16芒40培养捧液配扭成终圆浓度10哑%的二掏甲亚己砜(D南MS赛O)冻存馋液后缝液氮(-统19颈6劣℃墙)保存热。原谷则是按：慢龄冻(逐步株降温坚，以劲每分茂钟降1℃为宜)，快暑融(立即苦浸入37犯~4袍0芹℃水浴)。10众.注意适事项债：⑴芝用降胞植烷(pr租is篮ta吴ne)等油获类制卵剂，翁反复留注入BA宁LB滤/C小鼠跪腹强凭腔，量可诱突发产厕生小确鼠骨应髓瘤惑细胞拢。这凝种细眯胞在樱适宜馒培养乘条件筛下，刘具有完无限樱繁殖倾能力梁，选宜择本晶身不丝式会产往生Ig(S屋P2忘/O和小来鼠骨攻髓瘤65泥3细胞钟株)的对栗数期逢生长揭细胞晨作为迹融合望细胞膏。⑵选苏择缺葛乏HG党PR帽T或TK的细五胞：A采用舅毒性毁药物8-氮鸟塑嘌呤(8群-a角za督gu气an稳in树e,些8-村AG暴)选育见出缺丈乏HG图PR鲜T的细使胞(因为HG日PR千T+细胞掉利用8-丙AG后合成召毒性升核苷堤酸而增死亡恭，只照有HG还PR角T-细胞锤才能求存活够），模培养菠过程份中有轧个别慰细胞喇出现附返祖誓现象威，故嫩应定储期用15晓~2警0u存g/肺ml的8-庆AG处理占细胞壁。B或利炎用5-溴脱耕氧尿微嘧啶(5肠-b午ro妙mo作de蕉ox途yu纤ri侮di聪ne底,Bu葱dR)诱发绑缺乏TK的细屡胞。推一般渗选育绝缺乏TK的细毅胞较蚕困难赶。⑶采扁用饲哭养细晌胞：笛在体芦外培毒养条蔑件下荣，单块个或刷少数掌分散诉的细凡胞