2023学年完整公开课版动物细胞

2.2.2

动物细胞融合与单克隆抗体植物体细胞杂交植物细胞A植物细胞B原生质体A原生质体B原生质体融合杂种细胞组织培养杂种植株去细胞壁纤维素酶、果胶酶化学法物理法复习提问：一、动物细胞融合（细胞杂交）P521、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果：形成单核的杂交细胞3、原理：细胞膜的流动性4、诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒（仙台病毒）5、动物细胞融合过程动物细胞融合细胞核病毒颗粒细胞核灭活的病毒颗粒黏附在细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿过细胞膜连接动物细胞融合细胞融合，形成杂种细胞6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段

特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体阅读课本53页细胞融合方法化学：PEG（聚乙二醇）物理：电融合生物：灭活的病毒（仙台病毒）仙台病毒紫外线丧失感染性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较什么是抗体？由何种细胞产生？主要分布在哪里？起何作用？效应B细胞血清特异性免疫作用抗体：机体受抗原刺激后产生的，并且能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。

．

克隆（clone）：亦称无性繁殖系或简称无性系。克隆（clone）：亦称无性繁殖系或简称无性系。克隆（clone）：亦称无性繁殖系或简称无性系。单克隆抗体该法制备抗体的特点：

产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。自主阅读P52：抗体的传统生产方法及缺陷是什么？思考：如何获取某种特定抗体？讨论：怎样才能获得单克隆抗体？提示1：仅用细胞培养技术可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞单克隆抗体二、单克隆抗体

由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体，称为单克隆抗体。

1、概念:B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养2、单克隆抗体的制备过程第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高2.诱导其融合的方法有哪些？3.融合后培养液中有几种细胞?4.怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点?原因？1.注射抗原的目的是什么?5.为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选?6.大量增殖杂交瘤细胞和获得单抗的方法?产生相应的B淋巴细胞选择培养基既能在体外无限增殖，也能产生特定的抗体具有双亲细胞的遗传物质培养液中或小鼠腹腔中培养从培养液或小鼠腹水中提取3.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大

①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合优点：准确、高效、简易、快速②用于运载药物：制成“生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。

下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案3、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。1、该实验方案的目的是__________2、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______4、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段。制备单克隆抗体B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC练一练A、B细胞为动物细胞,请据图回答问题:A细胞B细胞C细胞D细胞(1)若A细胞为骨髓瘤细胞B细胞为淋巴细胞,那么D细胞称为

细胞,D细胞具有两个亲本细胞的特征,一方面因具有骨髓瘤细胞的

性质,通过

方式产生大量细胞,我们称之为

过程;另一方面能分泌大量的抗体,我们把该过程分泌的抗体称

.杂交瘤连续分裂有丝分裂单克隆单克隆抗体练一练(2)D细胞中产生的抗体其化学本质是

,合成该物质的场所是

,它是由

控制合成的,合成过程包括

和

两个重要步骤.球蛋白核糖体基因转录翻译(3)D细胞中产生的抗体具有

作用,与血清抗体相比其优越之处在于

强,

高.免疫特异性灵敏度(4)若A为人细胞,B为鼠细胞,用同位素标记A细胞膜上的蛋白质,B不标记,在C细胞时,检测结果发现整个细胞一半有放射性另一半没有.在D细胞时,检测结果发现整个细胞都有放射性,请解释原因

.构成细胞膜的蛋白质分子大都可以流动练一练思考：1、本过程利用了哪些原理？免疫原理细胞融合原理动物细胞培养原理（1）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合?（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，B淋巴细胞能够产生抗体，这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体,细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。（2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗?有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。（3）整个制备过程为何要经过两次筛选?（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。）如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？

融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，