贝克曼流式细胞仪

应用分类1、膜表面抗原和胞浆内蛋白分析2、DNA含量及细胞周期分析3、定量分析4、细胞功能分析5、凋亡研究6、细胞间相互左右7、细胞分选1.检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态2.白血病/淋巴瘤免疫分型3.HLA组织配型及HLA与某些疾病的关系4.干祖细胞的定量及成分分析.5.其它:粘附分子;TCR多态性检测;肿瘤癌基因及抑癌基因蛋白产物的检测;细胞内酶;耐药蛋白的分析等等。

临床应用疾病诊断:为疾病诊断提供直接的或支持诊断的依据免疫调节：细胞因子/受体的相互作用共刺激分子受体/配体的相互作用

发病机理：肿瘤的发病与机体的免疫力低下、以及信号传递障碍有关药物/疫苗效果的评价：肿瘤生物治疗的时机选择、以及效果的监测免疫状态评价：移植、放化疗等.细胞周期分析:在细胞周期(G0，G1，S，G2，M)的各个时期，DNA的含量随各时相呈现出周期性的变化。通过核酸染料标记DNA，并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M%。了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可利用细胞周期蛋白（CYCLIN）、Ki67、核增殖抗原（PCNA）等，对细胞周期进行精确的分期：G0、G1、S、G2、M.DNA含量及细胞周期分析G2MG0G1s0

200

400

600

8001000G0G1sG2MDNAAnalysisDNAcontentCount2N4NNormalCellCycle1.肿瘤的早期诊断。2.肿瘤的良恶性判断。3.观察细胞的增殖状态及周期分布。4.疗效监测细胞功能分析

1.吞噬功能试验

2.氧爆发试验3.根据T淋巴细胞分泌细胞因子的不同将CD4+或CD8+分为介导细胞免疫的I型细胞和介导体液免疫的II型细胞.4.药物泵的功能检测

5.NK细胞的肿瘤杀伤活性检测6.血小板的粘附,聚集功能检测树突状细胞分析（DendriticCells,DC)DC是主要的抗原递呈细胞，同时又是重要的先天免疫细胞，还是具有免疫调控功能的一个细胞群，没有发现特异性的抗原标记DC研究的主要内容包括直接分析计数、体外诱导检测,一般分为两群－PDC,MDC当前DC检测的方法：1）Lin-,CD11c,CD123,同时可能表达CD80,CD86,CD83,DR等2）利用BDCA1,2,3,4对外周血或其它组织DC进行分析3）CD14+16/CD85/CD33,CD14+16/CD85/CD123T细胞分析相对计数－淋巴细胞亚群数量检查项目和意义疾病CD3CD4CD8CD4/CD8NK自身免疫病降低增高降低降低AIDS降低严重降低增高降低SARS降低降低降低降低降低慢性活动性肝炎、肝硬化降低正常或增高降低降低肿瘤降低降低增高降低降低CD4细胞绝对计数对AIDS病人的诊断、疗效和预后有重要的指导意义，一般认为CUTOFF值为200/ul.绝对计数是加入浓度已知的标准微球与标本一起测定，流式细胞仪控制软件在设置后能自动计算出浓度对任何细胞群体都可以进行绝对计数Th1Th2细胞因子分泌细胞测定根据产生的细胞因子的类型和生物学功能,人的ＣＤ4+Ｔ细胞可以分为Ｔｈ1、Ｔｈ2Ｔｈ1细胞产生ＩＬ2、ＩＬ12、ＩＦＮγ、ＴＮＦβ等细胞因子,主要参与细胞介导的免疫反应、迟发性过敏反应,并在清除病毒等细胞内致病因子方面起着重要作用Ｔｈ2细胞分泌ＩＬ4、ＩＬ5、ＩＬ6、ＩＬ10、ＩＬ13等细胞因子,主要促进体液免疫反应,中和胞外病原体相应地，CD8+T细胞也可以分为Tc1和Tc2Th1细胞：介导细胞免疫、细胞毒性T细胞的生长和活化、巨噬细胞的活化、介导迟发型过敏反应。其功能亢进将导致炎症慢性迁延，器官特异性自身免疫病，急性排异反应和接触性皮炎等的发病和免疫病理损伤。Th2细胞：介导体液免疫，促进B细胞的生长、活化和分化，是IgG1和IgE类抗体的转换因子，其功能亢进将导致特异性过敏反应，参与高IgE综合症和嗜酸性粒细胞增多症。Th1Th2检测Tips一定要确定T细胞是否已经活化，细胞转运阻滞是否成功，胞膜打孔是否有效一定要用胞浆内同型对照（特别是FITC标记时），以便分别部分弱表达的细胞因子。TETRAMER抗原递呈细胞（APC）携带抗原片段通过与TCR复合物结合，在APC和T细胞的MHC相容和其它共刺激分子的相互作用下激活T细胞并产生细胞免疫效应。MHC-四聚体染色技术用于抗原特异性T细胞分析的原理在于体外模仿上述抗原递呈的过程来实现对特异性T细胞的鉴定，通过流式细胞仪这种高通量分析仪器对标本中这群细胞进行分析

四聚体技术的优势是：可以对特异性免疫细胞进行定量；用流式细胞仪检测可以快速测定大量细胞，可以同时进行其它表面染色，可以直接用外周血测定而不需要培养；四聚体染色不会杀伤细胞，因此染色后的细胞可以进行分选或其它功能分析；四聚体对所有的特异性T细胞都能够结合，而不仅仅是对有功能的细胞进行检测。不同厂家的MHC四聚体产品不太一样：贝克曼库尔特公司创造性地构建和表达了MHC分子α3链的区域突变的蛋白（iTAg），能降低其与非特异性T细胞结合，大大提高了特异性。并且将MHC四聚体直接标记荧光，和常用的抗原多肽负载后整体商品化，也有单独的MHC分子（iTAg）单独出售，极大方便了研究者CD艺4C环D2勇5Tr梢eg调控张性T细胞幕的主确要功盒能是挺抑制扣机体铁免疫嫁功能蛛，太拳强则执免疫寨耐受灰，太顷弱会技引起育自身恒免疫督反应调控鸣性T细胞朽调节泊抗原信递呈景细胞春对抗但原的会递呈调控险性T细胞盘的表盲型是CD飘4+浙CD立25雷br施ig帖ht欠，逐渐服发现锈越来侄越多篮的其房诚它分伴子可赌能能陈够更醋精确滔限定园（eg咏.F危OX孤-1期?)CD诸25也是牛免疫坏细胞们晚期静活化照的标喂记，性但表改达的狡平均滚荧光留强度遣不足亦够强非特洽异性剧的先虑天免用疫细品胞δＴ细匹胞:负占外幼周血T细胞位的1弄0％蜂以下雀，非瓣抗原肤依赖姥型免衔疫细渡胞，厅在传请染病溪、肿续瘤病赶人外沉周血纷数量穗增加栽，表需达CD新3量较驰普通T细胞设多NK细胞块：占箩外周识血淋梢巴细絮胞8责－2占5％供，传拖染病捞和肿恳瘤病磁人数障量偏牲低。NK细胞悠可以纠根据NK停R的不仰同而号分类病，丙培型肝欧炎的染发生欢和预乎后可白能与NK细胞研的表趋型相依关DC勒：分布管与淋灭巴组柿织和氧外周碍血，辱为非主成熟石状态迟，遇笛到相早应的粗抗原拦后主移要分舒泌IF模N-宇al撑ph非a来发挑挥左份右其它意重要妹分子绍的流候式分烈析的远意义粘附倒分子典：物扒种间蕉高度蜘保守资，与剩细胞竟间通皂讯，呀干细扮胞HO避MI牢NG恨，肿瘤樱的发剂生可触能有染很重兔要的田关系添，如CD经11滑C/丈CD烫18姿-C阴D5矩4与DC成熟受和迁怎移有茫关；CD声20滚9-剂CD阳10侨2与抗棒原递传呈有谢关CD补26咽:移植迅后造诞血干盗细胞卫表达蓝可能牵不利小于该疏细胞疫的ho筹mi废ng萍，有证趁据表国明抑翼制造牺血干押细胞掉有利仓用移聪植成浑功流式排细胞澡术在扁移植疼中的轻应用移植源配型资和群员体反的应性颂抗体淹的检需测荧光川示踪镰标记房诚的移椅植细茫胞：CF蛙SE是一眠个确谨定的洁荧光胁标记侦物，伯开发沈其它语稳定尼的荧锅光素帽应该逢更有秃帮助流式筹细胞庙仪分目选为达改到最汽高的哲分选登效率棵，实愉用中穿最好游先用预磁珠超分选申系统谷进行岩初步顺分选活细间胞分振选非扁常有欠用流式解细胞努术在跨生物疾医学僚研究伤的新文方向细胞尾多态逗性分溉析：详受体粒、抗仁原折茎叠、HL园A等，线包括CX口CR沈4,蛛CC胖R5诞,D亡C-拼SI房诚GN杯(与AI姜DS易感晒性有所关）晨，NK框R(中国朴科大侍研究鼓领先户项目唤）信号浑传导势（实恐际主信要为的胞浆达内磷拖酸化透及去食磷酸址化蛋燥白的捐检测仍）新型含荧光爱特异颤性探偿针：鹿胞内繁病原随体检解测、业转录轮因子退检测给、细汗胞器啊或细危胞生贝命活砌动指蜜标的匹新荧收光素轨的应搜用利用况分选探的细东胞进姐行体跨内和愚体外倚功能修研究与其另它定耍位性彩的荧橡光设羡备联付合使灵用（扁如MP嘱E,桂CO外NF朝OC厉AL驰,I年C1母00等）Ce锤ll芹L毫ab泼I俊C物10骡0Co眉mp熟le笼te系d崇at炊a尾mi伯ni鞭ng码a沾nd德a州na评ly愧si介sFl凳ex惰ib登le鸽A辉na射ly介si犁sPl快ug衫-i晒n秤ar周