鸭疫里默氏杆菌

关于鸭疫里默氏杆菌第1页，课件共37页，创作于2023年2月主要内容鸭疫里默氏杆菌概述防治疫苗病原血清型致病因子第2页，课件共37页，创作于2023年2月一、概述

鸭疫里默氏杆菌病（鸭传染性浆膜炎），又名新鸭病，鸭疫综合征。该病是由鸭疫里默氏杆菌引起的一种慢性或急性败血症状的接触性传染病。由于该病的高发病率与高死亡率，已成为危害各国养鸭业的主要细菌性传染病之一。

第3页，课件共37页，创作于2023年2月流行病学

易感动物：

家鸭、火鸡、鹅、番鸭、野鸟，以2-8周龄的鸭最为常见。

传播途径：经污染的饲料、饮水、飞沫、尘埃等通过呼吸道和消化道，以及损伤的皮肤等途径传播。

流行季节：一年四季均可发病，以气温低、湿度大的季节发病和死亡最高

第4页，课件共37页，创作于2023年2月临床症状图1.眼周围粘湿形成“眼圈”图2.绿色下痢

第5页，课件共37页，创作于2023年2月

图3.关节炎所致的站立不稳图4.死时的角弓反张第6页，课件共37页，创作于2023年2月病理变化剖检以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎及脑膜炎为基本特征。图5.纤维素性心包炎图6.纤维素性脑膜炎第7页，课件共37页，创作于2023年2月

鸭疫里默氏杆菌(RA)是鸭疫里默氏杆菌病的病原菌。Hendrison和Hilbert于1932年首次分离鉴定。该病菌先后被列入莫拉氏菌属、巴氏杆菌属。根据培养特性、16srRNA序列和表型，明确了其分类地位，并由Segers等(1993)建议鸭疫里默氏杆菌独立出来成立鸭疫里默氏杆菌属。二、病原第8页，课件共37页，创作于2023年2月形态

革兰氏阴性小杆菌,大小为0.2-0.4um,常单个或者成对存在,有时也成长丝状,无鞭毛。瑞氏染色呈两极浓染；印度墨汁染色可见有荚膜。

图7.印度墨汁染色第9页，课件共37页，创作于2023年2月

在电镜下观察到鸭疫里默氏杆菌有特殊形态结构,即在细菌的顶端或者侧面有1-2个与菌体相连的芽状赘生物,其大小差异悬殊,直径从30-200nm不等。图8.顶端与侧面的芽状赘生物图9.即将脱落的芽状赘生物第10页，课件共37页，创作于2023年2月培养特性

鸭疫里默氏杆菌在巧克力培养基上生长旺盛，菌落不溶血，呈奶油色半透明状圆形微突起。在普通琼脂和麦康凯培养基上不能生长。从病料中分离培养鸭疫里默氏杆菌时在含CO2环境中生长更好。

图10.RA在巧克力平板上的菌落图11.RA在鲜血平板上的菌落第11页，课件共37页，创作于2023年2月三、血清型

依据鸭疫里默氏杆菌表面多糖抗原成分,可以用凝集试验和沉淀试验进行血清型分析。

图12.凝集试验

图13.沉淀试验第12页，课件共37页，创作于2023年2月Harry用平板凝集试验分为16个血清型,即血清A-P型；Brogden用沉淀试验分为7个血清型,即血清1-7型；Bisgarrd建议以阿拉伯数字表示,己有菌株血清型分别命名为血清1-13型；Sandhu等将血清型扩增到17种,即血清1-17型；现被公认的鸭疫里默氏杆菌有21个血清型,即1-21型。第13页，课件共37页，创作于2023年2月

程安春（2003）提出4个新的血清型存在,命名为22-25型；张大丙（2005）提出血清10型还存在5个亚型，并鉴定出1个变异株、2个可能的新型菌株

Sandhu（1979）认为RA各血清型之间不发生交叉反应，但张大丙(2002)发现2型与17型之间，6型、

12与16型之间存在交叉反应。第14页，课件共37页，创作于2023年2月四、致病因子

Cam基因

Crasta(2002)从RA基因文库中成功筛选出潜在致病因子cam基因，它表达CAMP（协同溶血素蛋白）。CAMP的分子量为37kD,与唾液酸蛋白酶有很高的同源性，能协同其它细菌产生溶血作用,可能与致病性有关第15页，课件共37页，创作于2023年2月明胶酶

李继样（2008）发现所测RA菌株中90%菌株能改变鸭胚成纤维细胞形态，具有较强致病作用，分析发现这些菌株具有水解明胶的活性，分离获得55ku的活性蛋白质，证实其具有水解明胶、改变细胞形态的性质，是降解明胶的蛋白水解酶，可能是RA的致病因子之一。第16页，课件共37页，创作于2023年2月

明胶酶是分解细胞外基质蛋白的基质金属蛋白酶(MMPS)的一种，属于基质金属蛋白酶n型，含72kDa(A型,MMP-2)和92kDa(B型,MMP-9)两种。研究表明,明胶酶的表达和胃癌、结肠癌和乳癌等癌症的发展有关。第17页，课件共37页，创作于2023年2月

细菌液化明胶的能力可因细菌种类不同而有显著差异,因此明胶液化试验很早以来就被用来作为鉴定细菌的重要生化指标之一。第18页，课件共37页，创作于2023年2月利用明胶-营养琼脂平板对分离鉴定的RA进行明胶液化特性测定。有毒力的菌株能液化明胶,无毒力的菌株不液化明胶。图14.RA不同菌株的明胶液化特性第19页，课件共37页，创作于2023年2月明胶酶对RA侵袭力的影响

10日龄试验鸭颈部皮下接种后，对16h静脉血中细菌进行计数。图15．明胶酶对细菌侵袭力的影响第20页，课件共37页，创作于2023年2月表1.明胶酶对细菌侵袭力的影响第21页，课件共37页，创作于2023年2月明胶酶对动物致死率的影响表2.动物死亡数统计第22页，课件共37页，创作于2023年2月

外膜蛋白外膜蛋白是致病菌细胞外膜中的一个主要组成成分，参与细菌黏附与侵袭体细胞。

图16.大肠杆菌外围结构示意图第23页，课件共37页，创作于2023年2月

Hu(2011)通过对含外膜蛋白（OmpA）菌株与不含外膜蛋白的菌株特性研究证实RA外膜蛋白是其一个重要的致病相关因子。第24页，课件共37页，创作于2023年2月第25页，课件共37页，创作于2023年2月图17.RAompA缺失株的构建技术原理第26页，课件共37页，创作于2023年2月获得opmA缺失株Th4ΔompA用BamHI、MscI、XhoI、SphI处理RA的ompA基因用MscI、XhoI将SpecR从质粒pFW5切下将片段连接在BamHI-和SphI-处理过的载体pMEG375上合成载体pMEG375-LSR(SpecR)载体pMEG375-LSR转化至E.coliDH5aλPir第27页，课件共37页，创作于2023年2月细菌黏附与侵袭试验图18.Th4ΔompA缺失株及其亲本株的黏附与侵袭试验结果第28页，课件共37页，创作于2023年2月

外膜蛋白的致病作用外膜蛋白有助于细菌对宿主细胞的吸附外膜蛋白有助于细菌通过防御屏障外膜蛋白有助于细菌逃避免疫防御外膜蛋白的致病机理第29页，课件共37页，创作于2023年2月其他的致病因子荚膜多糖：病原菌的荚膜多糖对宿主来说都是致病因子,可使菌体免受吞噬细胞与抗体的攻击,在细菌毒力中起着极其重要的作用。荚膜多糖亦是鸭疫里默氏杆菌的一种主要抗原,对其研究对生产实践有着重要的意义。第30页，课件共37页，创作于2023年2月五、疫苗含菌体成分苗灭活苗活苗现阶段的疫苗第31页，课件共37页，创作于2023年2月

活苗

Sandhu等(1991)用1、2、5型鸭疫里默氏杆菌自然弱毒菌株制备了三价活疫苗，经口服和气雾免疫1日龄北京雏鸭后不引起任何明显的副作用，对同血清型强毒的攻击保护期长达42天。据了解该疫苗已在美国等国家上市销售使用。第32页，课件共37页，创作于2023年2月

灭活苗

Sandhu等(l979)将鸭疫里默氏杆菌1、2、5型培养后用福尔马林灭活制成三价灭活菌苗；在三价灭活苗的基础上，将大肠杆菌O78与鸭疫里默氏杆菌(1、2、5型)的福尔马林灭活液混合制备二联疫苗，该种联苗对鸭疫里默氏杆菌的保护效果优于鸭疫里默氏杆菌单苗。

胡海清等(2002)用鸭疫里默氏杆菌制成三价油乳剂灭活苗。

程安春等(2004)将鸭疫里默氏杆菌1、2、4、5血清型制成铝胶复合佐剂四价灭活疫苗。

黄承锋等(2006)将鸭疫里默氏杆和大肠杆菌制成双联灭活蜂胶苗。第33页，课件共37页，创作于2023年2月含菌体成分苗包括亚单位疫苗和基因工程苗。目前