热原试验演示文稿

热原检查法家兔热原试验每日一话题

试验目的将一定剂量的供试液(医疗产品的萃取液)，静脉注入家兔体内，在规定的时间内观察家兔体温升高的情况，以判定供试品是否具有潜在的致热作用。依据方法：GB/T14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法；中国药典2010；ISO10993-12:2005{GB/T16886.12-2005}.热原试验的应用热原试验应用于药物及医疗产品的检测（注射器、输液器、输血器、引流管、手术器械等等）热原概念热原：引入或释放到机体内后能引起恒温动物体温异常升高的物质。它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。热原引起机体发热机理

外源性致热原多为大分子物质，特别是细菌内毒素分子量非常大，不能通过血脑屏障直接作用于体温调节中枢，而是通过激活血液中的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核一吞噬细胞系统，使其产生并释放内源性致热原，通过下述机制引起发热。热原引起机体发热机理热原—白细胞(WBC)—吞噬—白细胞崩解，释放内源性致热源原—作用于体温调节中枢—产热增加、散热减少—体温上升

实验设备及材料超净工作台、电热干燥箱、水浴锅、天平、电子称、肛门体温计（仪器设备需经国家相关部门检定）、注射器、三角烧瓶、棉球、家兔固定架、时钟等等。所用试剂：医用生理盐水、75%乙醇、凡士林。

供试液的制备依据标准：ISO10993：12（GB/T16886.12）按0.2g:1ml（样品:生理盐水）的比例进行萃取，条件为37±1℃，时间为72±1小时。萃取液应在2小时内使用完毕。试验家兔饲养环境1在做热原检查前1~2日，供试用家兔应处于同一温度环境中；2实验室和饲养室的温度相差不得大于3℃，实验室的温度应控制在17~25℃；3在试验全部过程中，应注意室温的温度变化不得大于3℃，防止动物骚动并避免噪声干扰。

试验家兔的选择1.未曾用于热原检查的家兔；

2.或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6℃的家兔；

3.或3周内未使用的家兔，均应在检查供试品前3~7日内预测体温，进行挑选。挑选试验用家兔的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0~39.6℃的范围内，且最高与最低相差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。

试验家兔的选择㈠家兔应健康，雌雄不限，体重1.7kg以上，雌兔应无孕。预测体温前7日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象(科学饲养)。㈡

用于热原试验后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再本试验用，其中体温升高0.6℃以上的家兔，至少休息两周后以上。如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。每一家兔的使用次数，用于一般药品的检查，不应超过10次。

试验家兔的选择

（一）家兔在试验前至少1小时开始停止给食并置于适宜的装置中，直到试验完毕。应使用精密度为±0.1℃的测温装置测量家兔体温。测温探头或肛温计插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6cm，时间不少于1.5分钟，每隔30分钟测量体温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2℃.试验前家兔的准备

试验前家兔的准备（二）

以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。当日使用的家兔，正常体温应在38.0~39.6℃的范围内，且各兔间的正常体温之差不得超过1℃.

试验前器械的准备注射器（带针头）及一切与供试品溶液接触的器皿应是无菌、无热原，如试管等应采用干热灭菌法置烘箱中用250℃加热至少30分钟，也可用其他适宜的方法除去热原。试验刷方法取适绢用的馒家兔3只，革测定除其正达常体押温后15分钟爪以内鸽，自细耳静臂脉缓强缓注掀入规滋定剂仍量(10帮ml怪/k呀g)并温框热至会约38疮℃的供且试品扫溶液吩，然弦后每晶隔30分钟夏按前辆法测誓量其慢体温1次，蹈共测6次，欢以6次体该温中最高烫的一锁次减去正常助体温，即使为该痰兔体府温的遮升高影温度佣。试验窜方法如3只家陆兔中盼有1只体相温升户高了0.调6℃或0.拘6℃以上母，或3只家添兔体沈温升猴高均只低于0.书6℃，但虑体温译升高塑的总租和达1.揉3℃或1.耕3℃以上雅，应剂另取5只家富兔复机试，碌检查棚方法唐同上心。结果矮判断㈠在初毛试的3只家专兔中保，体辜温升竹高均问低于0.录6℃，并纠且3只家积兔体波温升番高总讯和低自于1.虫3℃；或佛在复扬试的5只家替兔中泻，体哄温升银高0.拨6℃或0.稻6℃以上置的家匙兔不半超过1只，繁并且感初试倚、复柜试合奋并8只家劫兔的竖体温扣升高骗总和办为3.拉5℃或3.士5℃以下龟，均疮判为渔供试搭品的言热原孤检查堪符合肉规定延。结果哥判断㈡在初诉试的3只家翻兔中湾，体衣温升元高0.飞6℃或0.具6℃以上莫的家铃兔超屯过1只；竿或在稀复试踢的5只家录兔中平，体勒温升击高0.每6℃或0.旬6℃以上肺的家松兔超夜过1只；酷或在搁初试寨、复掏试合葛并8只家蒙兔的胜体温检升高颂总和颠超过3.汪5℃，均沈判为纯供试的品的泡热原恢检查坊不符澡合规林定当家留兔体释温升负高为但负值选时，众均以0℃计。展望检查胆结果扰的准减确性设和一勒致性书取决帆于试送验动牙物的笼状况盟、试磁验室撞条件柔和操凭作的费规范苍性。家兔巨法检晋测内奖毒素霉的灵赢敏度冈为0.昂00警1μ捆g/帐ml跑,试验侍结果劫接近买人体歇真实谷情况剃，但笨操作考繁琐监费时铃，不石能用特于注赶射剂友生产犬过程帮中的布质量蹲监控纽奉，且桶不适斗用于示放射启性药杆物、吹肿瘤票抑制渐剂等异细胞轧毒性舌药物转制剂底。注意烟事项（1）试适验室别内保概持安静，避诞免强兽烈直宜射阳驱光、守灯光涨等刺辣激。（2）试茂验过奴程中效避免衰家兔骚动，保胸持体吸温稳聚定。稀（3）试爱验室筋、饲需养室崖温度还及其蒸变化通应符久