TSSX 007-2023 植物油生育酚及生育三烯酚含量测定反相高效液相色谱法

ICS67.050A019团 体 标 准T/SSX007—2023植物油生育酚及生育三烯酚含量测定反相高效液相色谱法Vegetableoils-Determinationoftocopherolandtocotrienolcontentsbyreversed-phasehighperformanceliquidchromatography2023-03-24发布 2023-04-24实施陕西省食品科学技术学会发布T/SSX007—2023T/SSX007—2023PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前  言 II范围 1规范性引用文件 1术语定义 1原理 1试剂 1仪器和设备 2取样 2操作步骤 2结果表示 3精密度 3附录A（资料性）4种生育酚和4种生育三烯酚混合标准物质色谱图 4前  言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由陕西省食品科学技术学会提出并归口。本文件负责起草单位：陕西师范大学、西安市粮油质量检验中心。本文件参与起草单位：陕西省粮油科学研究院、西安市产品质量监督检验院。本文件主要起草人：李建科、武利梅、吴丽华、孟永宏、张玉环、赵晶晶、龚珊、王峰、赵佳、蔡静薇、雷亚楠。本文件由陕西省食品科学技术学会负责解释。本文件为首次发布。T/SSX007—2023T/SSX007—2023PAGEPAGE1植物油生育酚及生育三烯酚含量测定反相高效液相色谱法范围本文件规定了用高效液相色谱仪同时测定植物油中α-、β-、γ-、δ-生育酚及α-、β-、γ-、δ-生育三烯酚含量的方法。当取样量为0.5g，定容25mL时，α-生育酚的检出限为2.5μg/g，定量限为8.5μg/g；β-、γ-、δ-生育酚、α-、β-、γ-、δ-生育三烯酚的检出限为1μg/g，定量限为3.5μg/g。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T5524动植物油脂扦样GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T15347化学试剂L(+)-抗坏血酸GB/T26635动植物油脂生育酚及生育三烯酚含量测定高效液相色谱法术语定义下列术语定义适用于本文件。生育酚含量Tocopherolcontentsα-、β-、γ-、δ-生育酚含量的总和。生育三烯酚含量Tocotrienolcontentsα-、β-、γ-、δ-生育三烯酚含量的总和。原理植物油样用正己烷溶解，甲醇水溶液均质萃取后，甲醇水层通过高效液相色谱仪将各生育酚及生育三烯酚单体分离，依据标准溶液色谱保留时间对目标物质定性，采用外标法定量。试剂除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。实验用水为GB/T6682规定的一级水。生育酚及生育三烯酚标准物质。α-生育酚：CAS号：10191-41-0，纯度≥95%；β-生育酚：CAS号：148-03-8，纯度≥95%；γ-生育酚：CAS号：54-28-4，纯度≥95%；δ-生育酚：CAS号：119-13-1，纯度≥95%；α-生育三烯酚：CAS号：10191-41-0，纯度≥95%；β-生育三烯酚：CAS号：190-23-3，纯度≥95%；γ-生育三烯酚：CAS号：54-28-4，纯度≥95%；δ-生育三烯酚：CAS号：25612-59-3，纯度≥95%。0.22μm尼龙过滤器过滤后使用。GB/T15347的规定。2,6-BHT。仪器和设备高效液相色谱仪：配有荧光检测器。均质机。高速冷冻离心机。紫外分光光度计。氮吹仪。取样采用GB/T5524扦样。操作步骤标准溶液制备标准储备液：准确称量4种生育酚和4种生育三烯酚标准品各10.0mg于10mL容量瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，转移至棕色试剂瓶中，密封后，在-20℃下避光保存，有效期６个月。临用前需要进行浓度校正：用带10mm比色皿的紫外分光光度计（6.4），在270nm～310nm之间选择适当的波长（见表1）测吸光度。测得的吸光度应在0.2~0.8之间。用吸光度除以表1中相应的校正系数计算浓度（用mg/mL表示）。标准溶液中间液：用移液管分别吸取4种生育酚和4种生育三烯酚单体储备液0.5mL至棕色试管，在30℃的条件下，用氮吹仪除去正己烷。用移液管向试管中准确加入10mL流动相振荡溶解残余物，此溶液中4种生育酚和4种生育三烯酚浓度为50μg/mL。密封后，在-20℃下避光保存，有效期半个月。标准系列工作溶液：准确吸取生育酚和生育三烯酚混合标准溶液中间液0.0125mL、0.025mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.2mL、1.6mL、2mL于10mL棕色容量瓶中，用流动相定容至刻度，该标准系列4种生育酚和4种生育三烯酚浓度分别为0.0625μg/mL、0.125μg/mL、0.25μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL、8μg/mL、10μg/mL。标准工作液在0℃~4℃之间避光储存，现用现配。表1校正系数波长/nm物质校正系数292α-生育酚0.0076296β-生育酚0.0089298γ-生育酚0.0091298δ-生育酚0.0087注：以上参数是根据生育酚的E值（1%/1cm）换算得到。例如，α-生育酚在292nm（在甲醇中）的E值（1%/1cm)为76，因此，1μg/mL的α-生育酚在292nm的吸光度为0.0076。生育三烯酚与对应的生育酚校正系数相同。样品制备0.5g0.01g50mL0.1gBHT1g5mL正6mL90%9000r/min90s4°C5min，收25mL棕色容量瓶，90%325mL0.22μm尼龙过滤器过滤，待测，整个操作须在避光环境中完成。测定色谱参考条件色谱柱：Poroshell120PFP250mm×4.6mm，填充平均粒径为4μm；流动相：甲醇+水=90+10（v+v）；294nm328nm；柱温：30；进样体积：10.0μL；流速：0.8mL/min。标准曲线的制作将生育酚和生育三烯酚混合标准系列工作溶液（8.1）按质量浓度由低到高顺序依次进行分别注入高效液相色谱仪进行测定，以标准系列溶液中目标化合物的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。试样测定依次将空白溶液和试样溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，以色谱保留时间进行定性。根据标准曲线得到试样溶液中各生育酚和生育三烯酚的浓度，平行测定次数不少于两次。8种生育酚和生育A。结果表示样品中生育酚及生育三烯酚单体含量根据外标法计算，公式（1）如下：………………（1）式中：X——植物油中生育酚或生育三烯酚单体的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C——由标准曲线算出生育酚或生育三烯酚的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；D——样品定容后的稀释倍数，如未进行稀释，则D=1；V1——定容体积，单位为毫升（mL）；m——试样质量，单位为克（g）。精密度重复性在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对值不得超过