PBS缓冲液的配制方法

PBS缓冲液配方不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是我们实验室的配方，供大家参考。我们实验室的配方：A液：0.1mol/L磷酸二氢钾：磷酸二氢钾（KH2PO4，MW136.09）1.361g，加双蒸水至100ml。B液：0.1mol/L磷酸氢二钠：酸酸氢二钠（Na2HPO4.2H2O，MW177.99）1.78g，加双蒸水至100ml。或者酸酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O，MW358.14）3.58g，加双蒸水至100ml。pH－－A液（ml）－－B液（ml）5.60－－9.50－－0.255.91－－9.00－－1.006.24－－8.00－－2.006.47－－7.00－－3.006.64－－6.00－－4.006.81－－5.00－－5.006.98－－4.00－－6.007.17－－3.00－－7.007.38－－2.00－－8.007.73－－1.00－－9.008.04－－0.50－－9.50一般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO4•12H2O（磷酸氢二钠）

NaH2PO4•2H2O（磷酸二氢钠）Nacl

用于细胞培养的PBS需含有氯化钾称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可0.01MPBS缓冲液

称取NaCl

8g，KCl

0.2g，Na2HPO4•12H2O

3.63g,

KH2PO4

0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是我的总结：

母液的配制：

0.2M

Na2HPO4：称取

71.6g

Na2HPO4-12H2O，溶于

1000ml

水

0.2M

NaH2PO4：称取

31.2g

NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml

水

各种浓度PB(pH=7.4)的配制：

先配

0.2M

PB

(pH=7.4，100ml)：取19ml

0.2mol/L的

NaH2PO4，

81ml

0.2mol/L

的

Na2HPO4,

即可。

然后

只需将0.2M

PB

(pH=7.4)按相应比例适当稀释

即可，如：溶解。（3）0.2mol/LpH7.4的PB的配制：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4和81ml0.2mol/L的Na2HPO4·12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.0）pH

0.2mol/LNaH2PO4(ml)

0.2mol/LNa2HPO4(ml)5.7

93.5

6.55.8

92.0

8.05.9

90.0

10.06.0

87.7

12.36.1

85.0

15.06.2

81.5

18.56.3

77.5

22.56.4

73.5

26.56.5

68.5

31.56.6

62.5

37.56.7

56.5

43.56.8

51.0

49.06.9

45.0

55.07.0

39.0

61.07.1

33.0

67.07.2

28.0

72.07.3

23.0

67.07.4

19.0

81.07.5

16.0

84.07.6

13.0

87.07.7

10.5

89.57.8

8.5

91.57.9

7.0

93.08.0

5.3

94.7关于磷酸缓冲溶液的知识，我在网上搜索了好多帖子，但是还是不能确定正确的答案。现在把他们链接过来，希望有高手们参与讨论，我会把最终的正确解答整理出来，提供给大家。

PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是

1.磷酸盐缓冲溶液（phosphatebufferedsolution）、

2.磷酸盐缓冲盐水（phosphatebufferedsaline）及

3.磷酸盐缓冲钠（phosphatebufferedsodium），

其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。

如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液（phosphatebufferedsolution）。

无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）

（0.15Mol/LPH7.2）

NaCl8.0g

KCl0.2g

Na2HPO41.15g

（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）

KH2PO40.2g

将上述试剂依次溶于1000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。我们用的都是第二种

问题1：磷酸盐缓冲盐水（phosphatebufferedsodium），为什么用第三种或第一种呢:

这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液，其他两种说法的英语名称常见到，不过我一直都以为他们是差不多的东西。不同的汉语翻译倒是第一次听说。

我们公司用的PBS有很多种，抗体组用的中和PBS配方就比较简单，没有K+离子，只起到缓冲PH的作用；Na2HPO4+KH2PO4按照不同比例混匀，可以得到不同PH的缓冲液，用于不同目的，这个在分子生物学中用得很多；用于活细胞或者细菌处理的，为了保持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是NaCl和KCl调节离子浓度。以上是个人的理解，欢迎批评。:

问题2：既然抗体组的PBS是起到缓冲PH的作用，那加入80G的NACL作用是什么？需要平衡渗透压吗？还有加入K离子的是不是因为细胞上NA-K泵的原因啊，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？

我觉得之所以这么配，其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？我没说血清撒。。。。。。我们用的又没加K，我是说加了K的的

问题3：不加NACL会怎么样啊？多省钱啊

在中和磷酸盐缓冲液中，NaCl的主要作用应当是保持一定的离子浓度，以维持抗体的活性。在离子浓度过高或过低的情