理化鉴别薄层色谱鉴别法

中药制剂分析技术理化鉴别——薄层色谱鉴别法ShandongCollegeofTraditionalChineseMedicine一、概述薄层色谱法是将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层，在同一块薄层板上点加供试品和对照品，在相同条件下展开，显色剂显色，检出色谱斑点，对比供试品与对照品的色谱图进行定性鉴别。薄层色谱鉴别法

二、仪器与材料

薄层板及固定相涂布器点样器展开箱显色与检测仪器薄层色谱鉴别法1.薄层板具有一定机械强度、化学惰性、耐一定温度、表面平整、厚度均匀，价格合理，常用为玻璃板。玻璃板的常用规格：5×20cm、10×20cm、20×20cm，要求光滑、平整、洗净后不附水珠、干燥。任务3理化鉴别法2.固定相

硅胶：常用极性吸附剂，具表面活性中心，略带酸性；氧化铝：常用极性吸附剂，具表面活性中心，略带碱性；硅藻土：中性吸附剂；纤维素：液-液分配色谱担体（水为固定液），具一定粘性；聚酰胺：特殊有机薄层材料。硅胶G(含粘合剂煅石膏)，GF254(含波长254nm荧光剂)，硅胶H(不含粘合剂)，硅胶HF254薄层色谱鉴别法3.涂布器有手工、半自动、全自动薄层涂布器薄层色谱鉴别法4.点样器材

常用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器微升毛细管全自动点样器手动点样器薄层色谱鉴别法5.展开箱

上行展开可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭；水平展开用专用的水平展开缸。薄层色谱鉴别法6.显色与检测仪器显色有喷雾法及浸渍法薄层色谱数码相机成像系统喷雾显色荧光显色薄层色谱鉴别法三、操作方法制板供试液及对照液的制备点样展开显色与检视结果判断与记录薄层色谱鉴别法1.制板

市售薄层板：临用前，110℃活化30min

聚酰胺薄膜不用活化自制薄层板一份固定相研磨混匀涂布器涂布三份水（或含有黏合剂的水溶液）自然干燥用前活化铺制薄层板薄层色谱鉴别法自制薄层板的质量要求：使用前应在反射光及透射光下检查其质量，表面应均匀、平整、光滑，无麻点、无气泡、无破损、无污染。2.对照物的选择与对照品溶液的制备对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单体）、对照药材和对照提取物三种。

对照物的设置方式：①对照品对照②对照品与对照提取物或对照药材对照(“双对照”)

薄层色谱鉴别法3.点样原点一般为圆点状或窄细的条带状。原点距薄层板底边10～15mm，高效板原点基线离底边8～10mm。原点直径一般不大于4mm；条带状的宽度一般为5～10mm。高效板条带宽度为4～8mm，原点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般不少于8mm，高效板样品间隔不少于5mm。薄层色谱鉴别法注意：点样时勿损伤薄层表面薄层色谱鉴别法4.展开

展开剂的制备：新鲜配制展开：点样后的薄层板放入加有展开剂的层析缸中，密闭，一般上行展开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规定展距后立即将薄层板取出，晾干，以备检测。

展距：一般8～15cm，高效板5～8cm预吸附中展开中薄层色谱鉴别法5.显色与检视显色：喷雾法或浸渍法喷雾显色法荧光显色法薄层色谱鉴别法5.显色与检视荧光淬灭斑点荧光淬灭法的GF254薄层板日光检视紫外光365nm或254nm下检视薄层色谱鉴别法四、注意事项

制备薄层板应清洁干燥后制板；预制薄层板选择符合要求的产品；使用新鲜溶剂配制展开剂；保持恒温恒湿展开槽应密闭良好注意防止边缘效应配制多元展开剂时，各种溶剂应分别量取后再混合。同一物质，在同一薄板上，用同一展开剂展开，出现边缘部分的比移值大于中央部分的比移值的现象薄层色谱鉴别法

例：首乌丸的薄层色谱鉴别

提取方法：甲醇提取固定相：硅胶G+0.5%NaOH展开剂：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15:2:1）1大黄素2大黄素甲醚3-4何首乌对照药材5首乌丸首乌丸的薄层色谱薄层色谱鉴别法T