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文档简介

抗血清的制备抗血清/免疫血清/PcAb

多个B细胞克隆产生的针对抗原多种表位的混合抗体，用免疫动物的方法获得。概念抗血清制备示意图多价抗原多个B细胞克隆（致敏的B细胞）PcAb免疫家兔抗血清制备三阶段：免疫原的制备→动物免疫→血清分离、纯化和鉴定一、用于免疫的动物种类：家兔、豚鼠、绵羊、马、鸡、山羊等。（一）动物种系与个体（1）Ag与免疫动物种系差异越大，效果越好；（2）动物个体适龄（体重符合要求）、健壮、无感染性疾病（宜雄性）；（3）选用多只条件相同的动物同时进行免疫。（二）抗原的性质（1）蛋白质→家兔、山羊（余多数也适合）（2）类固醇激素→家兔（3）酶类→豚鼠适宜（1）IgE→绵羊（2）多种酶→山羊（3）胰岛素→家兔不适宜（三）抗血清的要求（1）R型（兔型）→等价带宽→诊断试剂（2）H型（马型）→等价带窄→治疗试剂（3）抗体数量需求多→大动物二、免疫剂量、途径和时间一定范围内，免疫原的剂量越大，产生抗体效价越高。剂量皮内、皮下（多点注射）、肌肉、静脉、腹腔、脾脏、淋巴结。途径首次与第二次一般间隔7-20d（最重要），以后的加强免疫每次间隔7-10d，总免疫次数为5-8次。时间三、动物采血法动物免疫3～5次后，可取少量血清检测抗体效价与特异性，测试合格后，应在末次免疫后5～7d及时采血分离血清。采血前动物禁食24h。方法：颈动脉放血、心脏采血、静脉采血等。采血多，用于家兔（50-100mL）、绵羊、山羊等，避免放血速度过快。劲动脉放血用于家兔（20-30mL）、豚鼠和大鼠等步骤：固定→定位→去毛→定位→消毒→采血此法易致动物死亡心脏采血可多次采血（家兔→耳中央静脉；绵羊、山羊→颈静脉）静脉采血小鼠眼底静脉丛取血、摘除眼球、断头、断尾。其他四、抗血清的鉴定和保存鉴定内容：效价、特异性、纯度及亲和力。保存：抗血清除菌，小份包装保存。①4℃保存，存3～6个月，加防腐剂。②低温保存，－20℃～－40℃，在3～5年。③真空冰冻干燥，水分＜0.2％，5-10年。效价鉴定方法：放射免疫法/凝集反应/双扩（举例）等。Ab1:21:41:81:161:321:64Ag可出现沉淀线的血清最高稀释度——抗体效价特异性鉴定方法：双扩（举例）。粗AgAb（1）无沉淀线：免疫失败（2）1条沉淀线：单价特异性Ab（3）左边（多条线）+右边（1条线）：免疫成功但有杂Ab纯AgAb纯度鉴定方法：区带电泳、双扩。五、抗血清中抗体的纯化（1）单价特异性Ab提取：亲和色谱法、吸附法单价特异性：抗血清只与其特异性Ag发生反应如免疫Ag有7种（6种杂质Ag）：Ag1、Ag2、Ag3....Ag7免疫后产生7种抗体：Ab1、Ab2、Ab3....Ab7现需分离出Ab1，怎样分离？亲和色谱提取Ab1进样口凝胶出样口Ag2Ag3Ag4Ag5Ag6Ag7Ab1什么时候获得？

待分离Ab混合物吸附法提取Ab1磁珠Ag2Ag3Ag

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