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文档简介

生物制药工艺课程蛋白酶的发酵制药

蛋白酶蛋白酶是指催化蛋白质肽键断裂的一类酶，将蛋白质降解为蛋白胨、多肽及游离氨基酸，广泛存在于动植物以及微生物细胞内，按其作用形式可分为肽链内切酶、肽链外切酶。在蛋白酶的生产应用中按其作用条件分为酸性蛋白酶(如凝乳酶)和中性蛋白酶。工业最大用途洗涤剂，为碱性蛋白酶。蛋白酶的生产工艺流程1.生产菌

2.发酵工艺

3.提取工艺

4.酶的质量测定1.生产菌

蛋白酶分布广，但由于动植物资源有限，工业上生产蛋白酶制剂主要利用细菌和霉。酸性蛋白酶(最适pH2-5)产生菌主要是黑曲霉、米曲霉、根霉等;中性蛋白酶(最适pH7-8)产生菌主要是枯草芽孢杆菌、米曲霉、栖土曲霉、灰色链霉菌等;碱性蛋白酶(最适pH9-11)主要产生菌为枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌等。2.发酵工艺（1）培养基米曲霉的培养基:豆饼粉7.5%，(NH4)2S040.8%，水40%，KH2P040.25%，麸皮51.45%。黑曲霉的培养基(g/L):新鲜麸皮8.25，米糠4.5，豆饼粉1.5，(NH4)2S04O.3，K2HP04O.06，CaCl20.075，水8.6mL，pH5.5。（2）工艺流程（3）发酵条件装料量30g/250mL三角瓶，采用变温培养，32℃堆积培养48h，进行翻料，将温度调至28℃继续培养至120h。3.提取工艺

取发酵原料，以缓冲溶液浸提后，离心获得粗酶粉。浓缩酶制备工艺流程为:发酵液→絮凝→离心→活性炭脱色→纸板过滤→超滤浓缩。1)絮凝取刚下罐的发酵液100mL，加人质量分数为0.1%的絮凝剂NaAl02，室温搅拌10min，然后倒人100mL量筒中观察沉降情况，并记录清液出现时间为分层时间，每隔5min测定清液高度，至120min为止。2)离心将发酵液装人离心管中，在4℃条件下8000r/min离心。3)脱色选择中颗粒活性炭进行发酵液脱色，用量为1%。4)纸板过滤过滤纸板由孔径30-50µm的棉花纤维、石棉和硅藻土组成，纸板过撞机的压力为0.3MPa。5)膜浓缩由于蛋白酶的分子质量为28kDa，因此选用聚丙烯膜的MMCO(截留分子质量)为20kPa，操作压力为0.05MPa，温度控制在lO℃左右。4.酶的质量测定酶性质的测定:将一定量冷冻干燥后的酶粉溶于pH3.0乳酸缓冲溶液中，制成酶溶液，测定酶的最适温度和pH，通过Sephadex-G75凝胶过滤层

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