DB5206T100-2018铜仁市牛冷冻精液人工授精技术操作规程

的的ICS.65.020B43铜仁市DB5206地方标准DBT018代替DB522200/T115-2011铜仁市牛冷冻精液人工授精技术操作规程renCityofthebovinefrozensemenforartificial铜仁市质量技术监督局发布IDB5206/T100—2018前言本标准按照GB/T1.1－2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准代替DB522200/T115—2011《铜仁地区牛冷冻精液人工授精技术操作规程》。本标准与DB522200/T115—2011相比除编辑性修改外主要差异如下：——修改了本规程的范围见1；——增加了一条规范性引用文件见2；——修改了术语与定义的部分内容见3.1、3.2、3.3、3.4；——增加了术语与定义的一节内容：妊娠诊断见3.5；——增加了对冷冻精液质量的规定见5.1；——增加了对冷冻精液运输的规定见5.3；——删除了原规程中牛的保定规定，修改增加到本规程配种前准备见6.3.4、2011版7。本标准由铜仁市农业委员会提出并归口。本标准起草单位：铜仁市畜牧技术推广站、思南县、印江县、松桃县、石阡县、德江县、江口县、碧江区、万山区、玉屏县、沿河县畜牧技术推广站。本标准主要起草人：郑晓刚、任明晋、龙真权、毛同辉、冉隆权、李华磊、樊蓉、石建华、黄仁芳、侯芳、王华、田茂书、裴国海、邓万红、张前卫、杨昌平、何永杰、王娟、吴继标、杨蛟、张妮妮。本标准的历次发布情况为：——DB522200/T115-20111DB5206/T100—2018铜仁市牛冷冻精液人工授精技术操作规程1范围本标准规定了牛冷冻精液人工授精技术的术语与定义、人工授精点建设、冷冻精液质量、贮存和运输、配种前的准备、冷冻精液的提取、冷冻精液的解冻、精液品质检查、母牛发情鉴定、输精和妊娠诊断。本标准适用于铜仁市辖区内各养牛场(户)母牛的冷冻精液人工授精技术应用。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB4143牛冷冻精液GB/T5458液氮生物容器NY/T1335牛人工授精技术规程3术语与定义下列术语和定义适用于本标准。3.1冷冻精液指利用器械以人工方法采集种公牛精液，通过检查，用稀释液等温稀释、平衡后快速冷冻，在液氮中保存。冷冻精液包括颗粒冷冻精液、安瓿冷冻精液和细管冷冻精液，本规程中所指冷冻精液是指细管冷冻精液。3.2冷冻精液解冻细管冷冻精液直接置于38℃－40℃水浴中，使冷冻精子重新恢复活力的处理方法。3.3人工授精用人工方法采取公牛精液，经检查处理后，用器械输入发情母牛生殖道内，使其受胎的技术。3.4发情鉴定通过观察或检查母牛外部行为征兆和内部生殖器官变化，判断卵巢卵子发育和排出等活动情况以此确定母牛发情程度的方法。2DB5206/T100—20183.5妊娠诊断通过直肠检查确定母牛是否妊娠的技术。4人工授精点建设4.1人工授精点应建设在交通方便、能繁母牛相对集中的村寨或规模养殖场，并且符合当地良种牛的推广改良规划的要求。4.2从事牛冷冻精液人工输精操作人员必须身体健康，具有一定文化程度，经县级以上畜牧行政主管部门培训，持证上岗。4.3人工授精点设置冻精贮存室，并有必备设施见附录A。应有配种记录、产犊记录。室内清洁、干燥，窗明台净。严禁贮放农药、化肥、烤烟等刺激性物品，室内严禁吸烟、饮酒。室外安装有牛保定架。5冷冻精液质量、贮存和运输5.1冻精的质量5.1.1活力、密度、有效精子数、畸形率、细菌数等质量符合NY/T1335要求。5.1.2细管完整，字迹清楚，应有生产单位简称、品种、编号、生产日期。装细管冻精的纱布干净、标签清楚。5.1.3冻精在输精前应进行质量检测。精贮存5.2.1冷冻精液应侵泡在液氮生物容器中贮存，液氮生物容器应符合GB/T5458的规定。5.2.2在液氮罐中贮存的冷冻精液必须浸没于液氮中，液氮在不足总容积三分之一时，应及时补充。5.2.3取放冷冻精液时，提筒只允许上提到液氮罐的瓶颈段以下，严禁提出罐外。在罐内脱离液氮的时间不得超过10s，必要时须再次浸没后再提取。5.2.4在向另一液氮贮存罐内转移冷冻精液时，精液提筒脱离液氮不得超过5s。5.2.5取放冷冻精液后，应及时盖上罐塞，尽量减少开启容器盖塞的次数和时间，以防止异物落入罐内，减少液氮消耗。5.2.6严防不同品种和编号的冷冻精液混杂存放，难以辨识的应予以销毁。5.2.7对长期贮存冷冻精液的液氮罐应定期清理和洗刷，如发现液氮消耗显著增加，或容器外挂霜，应及时更换。精运输运输冻精时，应使用专用液氮容器(有保护外套),添满液氮，固定容器盖，液氮罐不得倒放及碰撞和强烈震荡。远途运输冻精时，备足液氮，及时补加。6配种前的准备3DB5206/T100—20186.1技术员的准备技术员应身体健康，采精前剪短指甲并抹平，用肥皂洗手后擦干，穿上洁净工作服。6.2消毒药品的准备消毒药品包括75%的酒精、0.9%的生理盐水0.3‰的新洁尔灭、脱脂药棉、高锰酸钾等，并加以标识。6.3器械的清洗与消毒6.3.1器械的清洗将输精所有器械用2％~3％的碳酸钠或洗涤剂清洗干净，再用清水冲洗2~3次。6.3.2器械的消毒输精金属器械、玻璃器皿、细管剪、镊子等蒸煮消毒15分钟，用前再用生理盐水冲洗数次，也可用75%的酒精棉球由输精枪顶端开始向后擦拭两遍，待酒精挥发完毕后再用生理盐水洗涤三次放入盘中待用。6.3.3输精器用后及时清洗、消毒。每输配一头母牛，使用一支输精枪，塑料外套管只能使用一次。6.3.4牛的保定采用站立保定，尾巴向右上方拴系提起。7冷冻精液的提取冻配点提取精液时，应将所提取的品种、牛号、数量等记录完善见附录B并核对无误后妥善保存。提取精液应做到轻拿轻放，严防碰撞。8冷冻精液的解冻8.1细管冷冻精液可用38℃左右的温水直接浸泡解冻，时间为10s-15s。8.2解冻后精液温度不得超过外界环境温度，一般应控制在10℃以下。8.3细管冻精解冻后，先检查其质量，有裂纹、封口不严、空管等现象不能用。8.4细管冷冻精液应在1h内及时输精。8.5解冻后精液需作运输时，应置于4℃-5℃温度下不得超过8小时。9精液品质检查9.1精液质量应符合GB4143的要求。9.2检查精子活力用的显微镜载物台应保持35℃-38℃。9.3在显微镜视野下，呈直线前进运动的精子数占全部精子数的百分率来评定精子活力。100%的精子呈直线运动者评为1.0，90%的精子呈直线运动者评为0.9，以此类推。9.4冻精解冻后精子活力应达0.3以上(1200万有效精子)方可输精。10母牛发情鉴定4DB5206/T100—201810.1发情鉴定采用“一问二看三查”的外部观察和直肠触摸卵泡相结合方法，以直肠检查卵泡发育程度为主要依据。10.1.1询问畜主：了解母牛年龄、胎次、食欲情况、发情行为表现、开始时间、是否与公牛交配。10.1.2观察母牛发情表现：一看阴唇肿胀程度，二看粘液色泽分泌量、粘稠情况，三看阴唇粘膜色泽变化，以便确定输配时间。10.1.3三是直肠检查方法：直肠触摸子宫、卵巢，判断其长短、粗细、质地。顺序是：手戴乳胶手套，涂以滑润剂，五指并拢伸入肛门，清除宿粪后，手掌伸平，掌心向下，在骨盆底的正中有一长而稍扁的棒状物为子宫颈。顺着子宫颈向前伸进，可摸到子宫角间沟，沟的两旁各有一条向前弯曲的圆筒状物，是左右子宫角，沿着子宫角大弯向下侧面摸，可摸到扁圆、柔软而有弹性的卵巢。用手指触摸卵巢表面的卵泡发育程度，以确定是否输精。最佳输配时间是母牛发情中期末和发情后期。10.2发情初期母牛鸣叫不安，食欲开始减退，想爬跨它牛，但拒绝公牛爬跨，外阴轻微红肿，阴道粘膜充血，流出稀薄透明液体。直肠检查子宫变软，卵巢有一侧增大，在卵巢上有卵泡，无弹性。此期维持10h左右，不能输精。10.3发情中期母牛极度不安，食欲停止，性欲旺盛，求配心切，爬跨它牛，外阴部明显肿胀，流出粘液增多。直肠检查子宫松软，卵泡体积增大，直径1.0cm-1.5cm，突出于卵巢表面，弹性强，有波动感。此期约维持8h-12h，输精偏早。10.4发情末期母牛性欲减退，不再爬跨它牛，由不安转为安静，外阴部肿胀减退，粘液变稠，呈黄白色。直肠检查子宫颈变松软，卵泡壁变薄，波动很明显，呈熟葡萄状，有一触即破感觉。此期约维持8h-10h，为最佳输精时期。11输精11.1母牛需经发情鉴定和健康检查后才能予以输精。11.2母牛在输精前外阴部应先用清水清洗，然后用新洁尔灭或0.1%高锰酸钾溶液消毒，待干燥后再用生理盐水擦拭。11.3发情母牛每次输入1支将解冻后的细管冻精，冻精剪去顶部封口(切不可错把细管的棉塞端剪去)后插入输精枪(将输精枪的钢芯插入细管的棉塞端口内)，套上塑料外套管备用。11.4采用直肠把握子宫颈深部输精法。11.5输精员左手戴长臂一次性手套，用水沾湿，手呈锥形，手心向上伸入直肠内掏出宿粪，清洗消毒外阴部、擦干，然后再手心向上伸入直肠后手心转下，寻找子宫颈，并握住子宫颈的外口端，同时臂肘向下轻压，使阴门开裂。5DB5206/T100—201811.6右手将准备好的输精枪插入阴道，先自阴门向前向上与水平线呈45度角插入约5cm-10cm(避开尿道口)，再改向前平插，两手相互配合，使输精枪尖端对准子宫颈口，缓缓导入子宫颈部内，然后注入精液。11.7输精应做到轻入、慢注、缓出、适深、适时。发情母牛一个情期输精两次的，其间隔11.8输精母牛须作好记录，各项记录真实准确见附录C。11.9输精后畜主必须在下一个情期(一般在输精后的18-22天左右)观察母牛有无发情表现，若连续2个情期无发情，则基本可判断为受孕，否则，畜主应及时通知输配人员重新输配。11.10若连续3个情期输配后未受孕，须考虑作产科检查，待疾病消除后再行输配。12妊娠诊断妊娠诊断操作主要采取直肠检查法：经配种后发情的母牛，进行直肠检查确诊是否妊娠。首先操作者须磨光指甲、涂上润滑剂，伸入直肠掏出宿粪，用手指触摸子宫颈，顺着子宫角，通过子宫角的收缩、大小、对称情况判断是否妊娠。母牛妊娠各月特征：12.1妊娠2个月，两子宫角不对称，孕角较空，约增大两倍，孕角基部宫壁软薄、波动、无收缩。12.2妊娠3个月，孕角大如婴儿头，子叶如蚕豆大小，子宫中动脉有妊娠搏感。12.3妊娠4个月，子宫颈移至趾骨前缘，子宫垂入腹腔，子宫中动脉变直变粗，搏动明显。12.4随着妊娠时间的增加，胎儿逐步长大，触摸较容易。6DB5206/T100—2018(资料性附录)人工授精点必备的设施5L液氮罐(运输用)、30L液氮罐(贮存用)、普通显微镜、输精枪、外套、手套、剪刀、镊子、水杯、消毒锅、水温计、搪瓷盘。7DB5206/T100—2018(资料性附录)牛输配点提取冻精登记表表B.