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文档简介

试验用具一、材料和标本乳鼠、HeLa细胞（人宫颈癌细胞）二、器材和仪器手术器械、平皿、培养瓶、吸管、离心管（灭菌后备用）、酒精灯、烧坏、超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜。三、试剂含有5%小牛血清MEM培养液、0.01mo1／LPBS，0.25%胰蛋白酶／0.02%EDTA混合消化液、75%乙醇。细胞的原代和传代培养第1页试验内容

一、原代细胞培养

(一)原理细胞培养（Cellculture）是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题研究。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短，性状与体内相同，适合用于研究。普通说来，幼稚状态组织和细胞，如：动物胚胎、幼仔脏器等更轻易进行原代培养。细胞的原代和传代培养第2页试验方法单层细胞培养法酶消化组织使其分离成单个细胞或较小细胞团，接种培养。组织块培养法把组织小块（0.5－1mm3）直接贴附培养瓶壁，细胞自组织块边缘向外长出生长晕，最终连接成片形成单层细胞。此次试验采取组织块培养法。细胞的原代和传代培养第3页操作步骤1．取材颈椎脱位法使乳鼠快速死亡，把整个动物浸入盛有75%乙醇烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超净台。用消过毒剪刀剪开用碘酒和乙醇再次消毒后皮肤，剖腹取出肝脏或肾脏，置于无菌平皿中。2．切割Hanks液清洗，移入青霉素小瓶或表面皿上，眼科手术剪刀将组织重复剪碎，直到成0.5－lmm3左右小块，再用吸管加入2－3滴细胞培养液，使组织块悬浮在培养液中。细胞的原代和传代培养第4页3．接种用吸管分次吸收组织块悬液，将其均匀分布在培养瓶底壁上，翻转培养瓶，加入2－3ml培养液，盖好，做好标识，二氧化碳培养箱中培养。2－3h后，组织块牢靠贴壁，迟缓翻转培养瓶，使培养液浸泡组织块，继续培养。

细胞的原代和传代培养第5页4．观察组织块静止培养2－3d后，天天小心取出观察。注意有没有污染，贴壁组织块边缘有没有细胞长出。另外，依据培养液颜色改变，补加或更换培养液，除去悬浮组织块。普通细胞生长良好，约10－15天长成致密单层，这时能够传代培养。细胞的原代和传代培养第6页细胞的原代和传代培养第7页二、传代细胞培养（了解）（一）原理体外培养原代细胞或细胞株要在体外连续地培养就必须传代，方便取得稳定细胞株或得到大量同种细胞，并维持细胞种延续。培养细胞形成单层汇合以后，因为密度过大生存空间不足而引发营养枯竭，将培养细胞分散，从容器中取出，以1：2或1：3以上比率转移到另外容器中进行培养，即为传代培养。

细胞的原代和传代培养第8页操作步骤1.

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