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文档简介

微生物检测-大肠菌群测定大肠菌群数？大肠菌群指一群在37℃、24小时能发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。主要包括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。菌落总数简介

实验原理

37℃，24h，乳糖，产酸（溴甲酚紫），产气（小倒管）三步法：初发酵、分离培养、复发酵器材与试剂水样、无菌蒸馏水、乳糖蛋白胨培养基，伊红美蓝培养基，革兰染液吸管、试管、平皿、载玻片初发酵水样、无菌水、三倍乳糖蛋白胨，吸管、酒精灯、吸球器材与试剂大肠菌群数测定实验步骤：

1.初发酵（1）2个大试管（内有倒管），100ml水样+已灭菌的3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液（50ml）（2）10支试管（内有倒管），10ml水样+已灭菌的3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液（5ml）（3）培养：37℃，24h

（4）观察指标：产酸（黄色），产气（倒管内有气泡）吸取水样加注水样初发酵结果左2为阳性结果，培养基变成黄色（产酸），小倒管内有气体产生。大肠菌群数测定实验步骤

2.分离培养（1）制备伊红美蓝平板：

45℃，无菌，倾注，15ml

（2）选产酸产气的发酵管（3）接种至伊红美蓝平板分区划线法（4）培养：37℃，24h分离培养器材与试剂初发酵结果、酒精灯、接种环、伊红美兰平板培养基分区划线法第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环分区划线法操作要点

1.划下一个区前必须灭菌接种环

2.划线时接种环同平板呈30-40°角

3.每次划线应该压到上一个区域的2-3条线

4.用接种环的“面”而不是“弧”在平板上滑动大肠菌群数测定实验步骤

2.分离培养：

（5）菌落特征：深紫黑色、有金属光泽紫黑色、无或略有金属光泽淡紫红色、中心颜色深（6）革兰染色、镜检：选特征菌落革兰染色法器材与试剂结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、酸性复红、生理盐水、酒精灯、载玻片、滤纸革兰染色法涂片：接种环，挑取菌落，生理盐水一滴，涂匀热固定：通过火焰若干次初染：结晶紫一滴，1min，水洗媒染：卢戈碘液一滴，1min，水洗脱色：95%乙醇，30s或至无色为止复染：复红一滴，30s涂片热固定初染媒染脱色复染革兰氏染色阴性革兰氏染色阳性革兰染色法复发酵器材与试剂培养24小时后的伊红美兰平板、酒精灯、接种环、复发酵管大肠菌群数测定实验步骤

3.复发酵（1）选取鉴定为无芽孢G-杆菌的菌落1-3个（2）接种至

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