实验一：培养基的制备和灭菌

试验目的〔〕〔〕〔〕根本原理培育基是依据微生物生长生殖所需要的各种养分物质用人工方法配制而成的基质〔〕将培育基调整到肯定的pH范围，如，细菌培育基中性偏碱、放线菌培育基偏碱、霉菌、酵母菌培育基偏酸。基的成分与液体一样，仅在液体培育基中参加凝固剂作支持物，通常参加0.5~2.0%的琼脂，半固体参加0.3~0.5%琼脂作支持物，有时也可用明胶或硅胶作为凝固剂。基的配制方法是从事微生物学试验工作的重要根底。高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸气急剧地将锅内冷空气从排气阀中驱尽，100C的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌的目的。三、实验器材〔一〕药品：待配各种培育基的组成成分〔牛肉膏、蛋白胨、NaCI〕、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。〔〕〔〕瓷缸、量筒、三角瓶、培育皿、玻璃漏斗等。〔〕

pH号笔、标签纸、纱布、棉花、牛皮纸、线绳、剪刀、镊子、白瓷盘等。四、试验步骤〔一〕玻璃器皿的洗涤和包装量筒等浸入含用。灭菌前玻璃器皿的包装皿包成一包。0.5cm1~1.5cm。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。试验图-3移液管的包扎先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长45C角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移灭菌。(二液体及固体培育基的配制过程液体培育基配制称量：一般可用O.OIg天平称量配制培育基所需的各种药品，先按培育基配方计算出各成分的用量•然后进展准确称量。溶解：将称好的药品置于一烧杯中，先参加少量水(依据试验需要可用自来水或蒸馏水)，用玻璃棒搅动，加热溶解。定容：待全部药品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需体积。如某种药品用调pH:—般用pH试纸测定培育基的pH1mol/LNaoH1mol/LHCl溶液进展调整。调整pH时，应逐滴参加NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培育基中成分。边加边搅拌，并不时用pHpH为止。过滤：用滤纸或多层纱布过滤培育基。一般无特别要求时，此步可省去。固体培育基的配制〔1.5~2%〕蒸发而失去水分。〔三〕棉塞的制作及试管、锥形瓶的包扎为了培育好气性微生物，需供给优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必需对塞等。试管棉塞的制作制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的一般棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入，棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管不下落为准。棉塞的2/3在试管内，1/3在试管外。目前也有承受硅胶塞代替棉塞直接盖在试管口上。试验图-4棉塞的制备 试验图-5正确与不正确的棉塞将装好培育基并塞好棉塞或硅胶塞的试管捆成一捆，外面包上一层牛皮纸。用记号笔注明培育基名称及配制日期，灭菌待用。三角瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进展液体振荡培育加大通8层纱布代替棉塞包在瓶口上，目前也有承受硅胶塞直接盖在瓶口上。在装好培育基并塞好棉塞或包扎八层纱布或盖好硅胶塞的三角瓶口上， 再包上一层牛皮纸并用线绳捆好，灭菌待用。〔四〕培养基的灭菌培育基经分装包扎后，应马上按配制方法规定的灭菌条件进展高压蒸汽灭菌。〔五〕斜面和平板的制作斜面的制作将已灭菌装有琼脂培育基的试管，趁热置于木棒或玻棒上，使成适当斜度，1/2基时，灭菌后则应垂直放置至凝固。平板的制作50C培育皿中。温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50C，培育基易于凝固而无法制作平板。平板的制作应在火旁进展，右手拿三角瓶的底部或试管，左手拿培育皿，同时用食指夹住皿盖，靠近火焰，将皿盖掀开一缝至瓶口正好伸入，将已熔化的培育基10~15mL倒入无菌平皿，快速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平皿，使培育基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。〔六〕培养基的灭菌检查1~2〔瓶37C温箱1~2天，确定无菌前方可使用。〔七〕无菌水的制备250mL100mL的蒸馏水并塞上棉塞或硅胶塞。在每支试4.5mL蒸馏水，塞上棉塞或硅胶塞。再在棉塞上包上一张牛皮纸，高压蒸汽灭菌，O.IMPa灭菌20~30min。留意事项留意事项1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；22腾外溢；4、分装量依据试管大小和实际需要而定，固体培育基装量约为管高的1/5,1/4,半固体分装试管一般以管高度三分之一为宜，三角