局部用药的毒性

第二十二章局部用药的毒性研究案例

★痤疮是一种毛囊皮脂炎症，多发于青年男女面部、胸部等皮脂分泌旺盛的区域，持续时间长，且易反复发作。

◆克林霉素-过氧苯甲酰凝胶是由克林霉素磷酸脂与过氧苯甲酰制成的复方制剂，临床用于痤疮治疗。要求观察其对皮肤的刺激性与过敏反应。

局部用药的毒性试验是根据局部用药部位的解剖和生理特点设计的。

涂剂、擦剂皮肤用药膏剂、凝胶剂其他透皮吸收制剂常用局部用药制剂滴眼剂、滴鼻剂喷雾剂直肠和阴道制剂肌内注射

第一节皮肤用药的毒性研究皮肤组织结构

表皮真皮皮下组织

皮肤覆盖全身。表皮较薄，厚为0.1-0.2mm。角质层

表皮颗粒层生发层真皮依附于皮下组织，厚约2mm。胶原

真皮弹性硬蛋白纤维母细胞一、化学物质对皮肤毒性作用的类型根据性质不同，由药物引起的皮肤损害包括原发性刺激炎症反应和致敏反应，偶然也可引起皮肤癌。（一）皮肤原发性刺激

原发性刺激—药物直接作用于皮肤引起的病理性反应。红斑、水肿原发性刺激的表现水疱疮溃疡

强碱脂溶性溶剂原发性刺激机理镉酸盐银、汞、砷等金属盐

特征：

有明确的毒理学量-效关系。首次接触即可产生某种特征。（二）皮肤致敏

皮肤致敏为变态反应，包括：药物致敏和光敏反应。

作用机制

药物与蛋白以共价键结合，具用免疫原性。药物在光的作用下，形成半抗原性物质。

特征

没有明确的毒理学量-效关系。再次接触该药物才能激发特定症状。（三）皮肤致癌

有机大分子化合物----多环芳烃类金属盐----无机砷盐（一）皮肤用药急性毒性实验

1.定义：

指动物完整或破损皮肤一次性接触受试物后在短期内出现的毒性反应实验。2.受试物：

使用临床制剂，如临床制剂浓度无法满足剂量要求，受试物为粉末状的用适宜基质（如凡士林、羊毛脂等）溶解混匀。

3.实验动物及实验条件每组动物数：

一般选白色家兔、小型猪4-6只，大鼠或豚鼠10只，雌雄各半；动物体重：

家兔2-3kg，豚鼠200-300g，大鼠200-250g，小型猪30-40kg。

饮食、摄水：

自由饮食、摄水。

动物房温湿度：家兔、豚鼠及小型猪控制在18-26℃；大鼠控制在20-25℃，相对湿度均为40%-70%；换气次数为10-20次/min；12h明暗交替光照。4.剂量设计

至少应设三个剂量组，另设赋形剂对照组，必要时设空白对照组。如受试物在拟用临床给药时有可能与破损皮肤接触，则应另设破损皮肤组。

5.实验操作

给药前24h对给药区（通常在背部）进行脱毛处理，给药时将受试物均匀涂于动物脱毛区，液体制剂，应将受试物涂于敷料上，再贴于脱毛或破损皮肤区，用半封闭的外罩固定敷料。涂敷24h后，除去敷料，用温水或适宜的溶剂除去残留的受试物和赋形剂。

观察期：

连续观察14d，观察1-2次/天。也可根据出现毒性反应的情况适当延长。

观察指标：

给药前后7d、14d称体重，观察给药后动物的全身反应：皮毛、眼睛、黏膜、呼吸、行为、自主活动、肌张力等，有无颤抖、震颤、抽搐、流涎、腹泻、少动、精神萎靡不振、

昏迷等毒性反应症状。若有动物死亡应立即进行尸检，

有明显异常时，应进一步进行病理组织学检查。6.观察指标7.结果评价对观察到的阳性症状结合大体解剖或病理组织学结果进行综合分析，与对照组比较，对动物的毒性反应及死亡原因作出明确判断。病理组对照组（二）皮肤给药长期毒性实验1.定义指动物完整或破损皮肤长期反复接触受试物后出现的毒性反应及其可逆程度实验。2.受试物与“皮肤给药急性毒性试验”基本相同。3.实验动物及条件与“皮肤给药急性毒性试验”一致。

4.剂量设计至少应设三个剂量组.

(可设赋形剂对照组，必要时设空白对照组。)高剂量：原则上应使动物产生明显的毒性反应，甚至出现个别动物死亡；低剂量：原则上应高于动物药效学实验的等效剂量，并不使动物出现毒性反应；中剂量：动物可出现轻度毒性反应。5.给药期限药物临床疗程皮肤给药长期毒性实验给药期限可以支持的临床研究阶段单次给药2周Ⅱ期，Ⅲ期（及生产）≤2周1个月Ⅱ期，Ⅲ期（及生产）2周~1个月1个月Ⅱ期3个月Ⅲ期（及生产）≤3个月3个月Ⅱ期6个月Ⅲ期（及生产）≤6个月6个月Ⅱ期，Ⅲ期（及生产）>6个月6个月Ⅱ期，Ⅲ期（及生产）6.给药频率★给药期限<3个月，原则上应每天给药；★给药期限≥3个月，每周至少应给药6d；

★也可根据临床给药频率给药。7.恢复旬期限给药结世束后保输留部分绿动物，钓继续观胀察其可顽能出现鼓的延迟论性毒性鄙反应，蚁并了解米毒性反拢应的可脾逆程度碗。根据受生试物的老药代动溪力学特目点、靶帐器官或碑靶组织仔的毒性参反应和冬实际恢相复情况关确定恢偶复期的勒长短。8.实验吗操作首次给读药前2致4h对毯给药区除在背部徐进行脱岩毛处理和。每天搂给药1次，每次远至少接恋触6h。保证受颂试物与给星药部位具最有良好接呆触并避免械动物食入灾药物。可磨用纱布等弦无刺激性众辅料包裹同或给动物耻穿上特制狼的通透性插好的外套希。9.观察榜指标除增加智给药部疯位皮肤霉及其周霞围组织克乃至全瓶身皮肤变化和皮肤病迈理学检赛查外，其余炸指标与长乖期毒性实提验要求一洲样。10.结唇果评价局部毒矛性反应痛的结果另评价与长毒实叹验要求一谦样，应汇根据各枕检测指超标及病暂理组织牲学检查框结果综传合分析使。除此芬以外还饲应注意堵评价给跃药局部倚及其周爸围组织健的毒性尖反应。（三）砍皮肤刺泼激性实掀验1.定义飘：皮肤刺然激性：指经皮肤答给药后，略在皮肤上飘产生的可陶逆性炎性裙病变。（若给药巧部位产生携了不可逆蜡性的组织穴损伤则称石为腐蚀性梅。）皮肤刺激回性实验：是观察雄动物的瞧皮肤接奥触受试锹物后是欠否引起西红肿、煮充血、泳渗出等理局部反线应。2.受工试物应采用与傲临床应用制吃剂一致纺，符合勾临床用北质量标贼准规定的受试物拌进行实验脚，同时注武明其名称垦、来源、储批号、含林量（或规耗格）、赋饲形剂、保起存条件及馆配制方法必等，其中石赋形剂和粉杂质等的问名称和量尘应尽可能消明确，并希附有研制醉单位的自锋检报告。闷所用赋形怠剂应该标未明批号、许规格和生滑产厂家，去并符合实艰验要求。3.实劳验动物多种哺缘瑞乳动物惜可以选阔择，一搏般首选而白色家秀兔，每疯组动物莲数4～嚼8只，龟雌、雄覆各半。复也可以斑选用其护他种属挎的动物聪(如胡小型猪厉等)剂,选择浊家兔和进小型猪风以外的椅动物应啄阐明合李理性。4.实验陡操作设赋形就剂对照嚷，采用树同体左右侧东自身对恳比法。试验前扩24h荡对给药竹区进行狗脱毛处煎理。去早毛范围柜各3cm框×3c习m。(给忧药前应脆检查去秋毛皮肤同是否因台去毛而殃受损伤昌，有损唇伤的皮续肤不宜园进行实过验。)进行破篮损皮肤松的刺激据性研究内时，在劲用药部斧位用砂白纸磨或假划“井需”字并岔以渗血环为度。4.实弦验操作受试物药主量一般是论固体或半召固体0.贪5g，液瓶体0.5纱ml，直唱接涂布于羊一侧已去划毛的皮肤科上，然后测用两层纱始布(2.忌5cm×形2.5饶cm)和肉一层玻璃阔纸或类似院物覆盖，师再用无刺怎激性胶布警和绷带加状以固定；另一侧耍涂布赋仇形剂做奴对照。圣贴敷时剖间至少桶4h。利贴敷结包束后，帖除去受味试物并推用温水储或无刺谁激性溶托剂清洁案给药部辅位。注：多船次给药始皮肤刺欠激性实衡验应连坛续在同汗一部位沫给药，钉每次给章药时间昏相同，猎贴敷期三限一般既不超过掘4周。刺激反应分值刺激反应分值红斑无红斑0轻度红斑（勉强可见）1中度红斑（明显可见）2重度红斑3紫红色红斑到轻度焦痂形成4水肿无水肿0轻度水肿（勉强可见）1中度水肿（明显隆起）2重度水肿（皮肤隆起1mm，轮廓清楚）3严重水肿（皮肤隆起1mm以上并有扩大）4总分值85.观察驴指标在自然光状线或全恋光谱灯茂光下观察鬼皮肤反章应。按烫表给出栏的评分驶标准对栋皮肤红糟斑和水抖肿进行夺评分。6.结娱果评价单次给跟药实验：计算每一经观察时间小点各组受帆试物及赋首形剂皮肤碰反应积分价的平均分硬值，按表福进行刺激蚂强度评价剪。多次给持药实验：首先计算亦每一观察瞒时间点各筹组积分均波值，然后虹计算观察违期限内每盲天每只动牲物积分均余值，按表蜂进行刺激感强度评价罚。分值评价分值评价0~0.49无刺激性0.5~2.99轻度刺激性3.0~5.99中度刺激性6.0~8.0强刺激性（四）突皮肤点吸收试染验（1）果整体皮饱肤吸收酬试验化合物剖经皮渗刮透的量裁同皮肤避微灌流位量直接殖相关，由通过测帆量与皮卡肤灌流叛量相关哑的电压倘，测算阻出化学巡寿经皮吸蚊收速率跑。1）L饼DV法用64召3.8陵nm氦灾-氖激私光，照摊射血管汗中流动匹中的红被细胞，娘测量用融药前后泻变化，授测定出吐皮肤吸嘱收速度联。PPG鲁法LED射语出的80育0-94企0nm红编外线照射吧，收集反农射光转变违成电压波丢谱，通过拒电压波谱靠变化，计致算皮肤吸嗓收量的大冷小。（2）离遥体皮肤吸耍收试验静态渗透恶装置上室防药绍剂，下室娘接受液，怜下室中间芒方皮肤并趁密封，药灿剂放于皮内肤之上，胆每隔一定局时间后，淋测定接受续液，计算鄙皮肤渗透浪率。流动渗枣透装置上述方茧法的改取进，接姑受液为材血浆或枕白蛋白王，以5蒸ml/妻小时的字速度灌苹流，测朱定不同悼时间灌悉流液的斑药量。确以次测轿定皮肤度的透过斥率。（五）松皮肤过敏脑试验目的通过动物很皮肤重复影接触受试偶物，观察把机体免疫仗系统反映砌在皮肤上价的表现。方法实验材孩料1）动文物-豚矛鼠2）受裂试药物炸-膏剂友、液体悲不稀释雪直接涂嚷敷3）阳收性致敏少物：2,4仙-二硝尖基氯代也苯1%-致爪敏浓度荒0饥.1%-壮激发浓度试验方仁法1）试捎验分组随机分成丘三组：给药组忠、赋形址剂组、万阳性对拍照组2）致跃敏接触0.1-秧0.2m苹l(g)师涂于脱毛盏区，接触融6小时，第7天本和14么天亦同寇样方法惕重复。3）激圣发接触末次给搂药后第仪14天桃，激发在给药，东6、2惩4、4歇8和7虫2小时益观察皮谋肤过敏铲情况。结果判断鲁与评价皮肤过昨敏反应脏评分标增准刺激反胃应幸程度案分值蔑刺激址反应杠程葛度庆分值红斑形轰成菜水芹肿形成无红斑余0叹无水肿槐0轻度红庄斑津1判轻度水兵肿末1中度红六斑扑2夸中度水特肿银2重度红斑浴3垒重叫度水肿控3水肿性红具斑痛4最高总艰分值确7致敏率分问类过敏反杆应强度饶致呜敏率%弱致敏扩性袍0-1艳0轻度致湾敏性港10-嘱30中度致剃敏性缺30-杠60高度致妈敏性门60-小80极度致占敏性币80-偶100红斑形躲成总分担+水肿凯形成总赴分反应平均锣值=合计动物棚总数（六）赖皮肤旦光敏试侄验目的观察受试窗物接触皮完肤后遇光怖照否有光帖敏反应试验方法1）光嫌敏反应猫试验评价标准2）光毒判性试验评价标采准第二节排眼睛用孟药刺激岩性试验眼睛的结祖构角膜结膜服炎炎症咏角膜碎表面水虑肿上皮脱顺落刺激作撇用真结屿膜充血绩、水肿灼痛、江流泪、敢畏光慢性结膜崇炎、睑腺网炎、分泌铸物增多试验目的角膜浑浊刺激性个试验试验方法虹膜结果与驶评价结膜水肿分泌物目的观察动个物眼睛济接触受解试物所炮产生的菊刺激反鸣应方法家兔，原汤液（原膏浅）加入眼隶睛肿0.胞1ml掩(0.1株g)，鄙闭合5糠-10分刺钟。6、24缸、48和只72小时暂至7天眼起刺激情况城。结果与念评价眼刺激反借应评分眼刺激反特应亦分值角膜浑堪浊贼0-蜻4虹膜会0-2结膜拒0-纷3水肿妙0-带4分泌物穗0-昼3总分设16眼刺激波性评价殿标准刺激程度匠积分无刺激性候0-3轻度刺厘激性合4-8中度刺激涉性秒9运-12重度刺激口性俭1问3-16第三节知肌内注恋射用药我局部刺朱激性试装验目的肌内注泳射后药寸物对肌已肉的刺挽激性反乐应情况活。方法家兔6只栽，一侧骨德四头肌注桌射供试物便，另一侧琴注射生寨理盐水总1-2楼ml作封为对照投，48小时蔑处死动物唐，取骨四格头肌纵向择剖开，肉眼观给察，观虚察注射拴部位刺拜激情况证，必要时面作组织度病理学毙检查。家兔股四颂头肌肌肉俊组织结果与咳评价肌内注午射刺激僵反应评艘分标准反应级特数呜刺激反暴应0文给药部浅位无明显共反应1签给药部尘位轻度充料血，直径渐0.5c查m以下2溉给药部盒位中度充萍血，直径碗1.0c桃m以下3富给药部田位中度充并血，红肿跨，肌肉有绒变性4拾出现肌仿肉褐色变兽性，坏死及0.5c扯m以下5辩肌糖肉严重屯变性，薪出现大怠片坏死超过2认嫂为不符合截规定，不客可进行肌犯内注射第四节抽静滩脉给药触局部刺丹激性试者验见第二十僚章：全身滤用药毒性恨试验中-寇血管刺激渔性试验第五节筹滴鼻剂和兰吸入剂的涨毒性试验一、滴鼻怠剂和吸入丽剂急性毒厅性试验目的观察受本试物一牺次滴入妹或吸入锋后对动舰物产生中的毒性祝反应或镜死亡情禾况。方法3个剂佣量组，去组距0民.65叶-0.听85,睡滴入跑或吸入胆；4小时唱后即可论以及7读-14滨天观察刚动物。结果评价二、滴钥鼻剂和恭吸入剂铅刺激性确试验目的观察受所试物一浓次滴入互或吸入角后对动嘉物产生屡的刺激裕反应。方法将受试燃物滴入已或喷雾篮于动物谦，24托小时后先处死动蛛物，观克察有无科充血、墙红肿等傲。结果评价第六节斤应用于直考肠、阴道标制剂的毒鸡性试验一、直识肠、阴夫道用药都急性毒定性试验目的受试物检对动物气直肠或固阴道产卵生的毒尤性反应袍或死亡等情况。方法栓剂、顷膏剂或田液体等匆，将受少试物轻琴置入直递肠或阴笛道内。至少接姨触4小汉时，观急察即可搜以及7舍-14般天的情搁况。结果评织价二、直殊肠、阴称道用药抽长期毒寸性试验目的方法结果评价三、直肠枯、阴道用截药刺激性好试验目的方法结果评同价四、有关嘴问题1、给妇药量与桐给药浓溪度2、给药球途径3、多次肾给药问题4、对照蹲组的建立1.实便验动物越的选择依据拟采范用的实验届模型和观阿察指标选胖择实验动乐物，一般排每个实验骡选择一种伐动物进行摸评价。2.给药板的频率与判期限给药的频俭率与期限存应依据拟秤定临床应诊用的情况顷来决定。衣重复给药与的制剂，群一般每天块给药一次齿，给药期础限最长不清超过4周音。单次给石药的制剂蔑可用单次织给药的方塞法进行实忍验。3.可逆