兽医产科学：第六章 人工授精

第六章人工授精（Artificiallnsemination，AI）本章主要内容第一节概述第二节采精第三节精液检查第四节精液稀释第五节精液的保存第六节输精重点：采精方法、精液稀释液、精液冷冻保存、输精。难点：采精；精液稀释；牛的输精。参考书目杨利国主编，《动物繁殖学》，第二版，中国农业出版社，2002年。王元兴、郎介金主编，《动物繁殖学》，江苏科学技术出版社，1997年。本章重点难点第一节概述自然交配（NaturalMating，NM）一、交配方式人工授精（ArtificialInsemination，AI）二、人工授精的定义人工授精就是利用合适的器械采精，经检查、稀释或保存等适当的处理，再用器械将精液适时地输入到发情母畜的生殖道内，以代替公母畜直接交配的一种方法。第一节概述采精精液检查、稀释、保存输精三、人工授精过程及优点

充分利用了优良公畜；

防止了生殖道传染病的传播；

提高了母畜的受胎率；

加速品种改良，降低成本，促进国际交流。

过程优点第一节概述畜种NM时每头每年配母畜数每年采精次数每次可配母畜头数每年每头可配母畜头数猪40-5050-1004-5200-400牛20-4070-10020-50500-1000冷冻精液冷冻精液100-2006,000-12,000马30-5080-1405-12200-400羊30-5060-12020-40700-1000公畜NM与AI效率比较第一节概述第二节采精（SemenCollection）一、采精前的准备(一)采精器材的清洗与消毒要求：采精器械简单，操作方便，不影响公畜，不污染精液。原则：采精器械清洁，无菌、无毒。

第二节采精⒈玻璃器皿⒉橡胶制品⒊金属器械⒋溶液第二节采精(二)采精场的准备

宽敞、平坦、安静、清洁、固定第二节采精(三)台畜的选择和利用台畜是指在采精时，诱导并支撑采精公畜的支架或同种家畜。第二节采精要求：健康无病、体格健壮大小适中、性情温顺无腿疾真台畜：母畜、公畜、阉畜第二节采精

假台畜：模仿母畜体型高低大小，用钢管或木材做的一个支架。第二节采精假台畜优点：方便、清洁、安全第二节采精(四)种公畜的准备1、消毒

2、调教：爬跨假台畜的调教方法第二节采精⑴在假台畜后躯涂抹发情母畜阴道粘液或尿液。⑵在假台畜旁放一发情母畜，让公畜反复爬跨而不让其交配当公畜性冲动至高峰时，迅速牵走母畜，诱其爬跨假台畜采精。⑶将待调教公畜拴在假台畜附近，目睹另一头已调教好的公畜爬跨假公畜，然后诱其爬跨。⑷训练公猪时还可利用另一头公猪爬跨过的假台畜。第二节采精二、采精方法(一)假阴道法第二节采精假阴道采精时，温度比压力重要。㈠假阴道法

条件：适宜的温度、压力和润滑度第二节采精假阴道的构造第二节采精集精杯外壳气嘴内胎固定胶圈理想的充气状态充气不饱满，但可以用第二节采精牛的假阴道法采精第二节采精采精车羊的假阴道法采精第二节采精(二)手握法手掌握成空拳公猪阴茎导入握紧阴茎作一紧一松调节射精本方法主要适用于猪1、原则2、方法第二节采精

压力更重要

手握法采精.mpg第二节采精

猪手握法采精第二节采精电极直肠进入调节剌激器，选择好频率接通电源公畜伸出阴茎排出精液(三)电剌激法由低到高调节电压1、原理2、方法本方法适合多种动物第二节采精(四)按摩法公牛：直肠精囊腺公犬：阴茎的球体第二节采精犬按摩法采精第二节采精犬按摩法采精三、采精频率牛：每周2天，每天2次；猪：隔天一次，最好3天一次；羊：每周3天，每天2次；犬：隔天一次。第二节采精第三节精液检查

（SemenEvaluation）

一、检查的目的1.确定种公畜的配种能力；2.确定精液的稀释倍数；3.检查精液的处理方法是否正确；4.检查精液产品的质量。第三节精液检查二、检查的项目（一）直观项目

（二）微观项目第三节精液检查（一）直观项目检查第三节精液检查1、射精量及精子密度畜种奶牛水牛马猪鸡山羊射精量ml5-103-650-100150-3500.4-1.00.5-1.5密度(亿/ml)10-1512-182-32-325-4020-30射精量原因过少采精过频、性机能衰退、睾丸炎、发育不良过多副性腺发炎、假阴道漏水、尿潴留第三节精液检查2.色泽猪：浅灰白至白色；牛羊：乳白色或乳黄色。精液色泽依从浓到稀：乳黄-乳白-白色-灰白鲜红生殖道下段出血或龟头出血暗红副性腺或生殖道出血绿色副性腺或尿生殖道化脓褐色混有尿液第三节精液检查3.云雾状是指新鲜精液在33-35℃下，精子成群运动所产生的上下翻卷的现象。+++翻卷明显而且较快++翻卷明显但较慢+仔细看才能看到精液的移动-无精液移动

云雾状的明显程度代表精子活率的高低。第三节精液检查4.气味

5.pH值

第三节精液检查（二）微观项目检查第三节精液检查1.精子的活率定义：37℃下,精液中直线运动的精子占总精子数的百分率。测定方法：估测法。第三节精液检查我国牛冷冻精液每剂量解冻后的活力的国家标准为：奶牛、肉牛≥35%（即≥0.35），水牛≥30%（即≥0.30）；牛冷冻精液每剂量解冻后的前进运动精子数的国家标准为：奶牛、肉牛≥800万个，水牛≥1000万个。

例：牛精子活率检查的程序载玻片预热精液稀释取样检查镜检活率估测活率记录生理盐水与精液等温，按1:10稀释取10ul放在载玻片中间，盖上盖玻片用100倍和400倍观察

视野中直线运动精子占的百分率按10级制评分第三节精液检查2.精子的密度检查第三节精液检查

目测法

比色法

血细胞板计数法各种家畜精液建议稀释比例畜种牛羊猪马鸡稀释倍数10020040404003%氯化钠ul原精液ul5005100052005200520005第三节精液检查注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！用吸管

注入精液用移液器注入精液第三节精液检查精子计数或从左上角到右下角五个中方格四角一中心共5个中方格以图示次序计数，以精子的头部为准，数上不数下，数左不数右的原则进行计数。第三节精液检查精子密度计算公式精子密度=

5个中方格总精子数×5×10×1000×稀释倍数第三节精液检查例：牛精子密度测定程序计数板放于载物台上取稀释精液精液注入计数室镜检精子计数密度计算3%氯化钠将精液100倍稀释取25ul从计数板与盖玻片的接缝中加入,自行吸入计数室中第三节精液检查3、精子畸形率的检查第三节精液检查0.5克龙胆紫用20ml酒精助溶，加水至100ml，过滤至试剂瓶中备用。美蓝或红墨水。第三节精液检查染色剂涂片方法正常精子第三节精液检查双头精子畸形精子脱尾精子顶体脱离尾部卷曲双尾精子第三节精液检查第四节精液稀释(SemenDilution)

精液稀释：在采得的精液里，添加一定量的按特定配方配制的、适合精子存活并保持受精能力的溶液，这一过程我们称为精液稀释。一、定义二、目的⒈扩大精液容量。⒉降低能量消耗，补充营养；4.便于精子的保存和运输。3.抑制有害微生物活动；第四节精液稀释三、精液稀释液的主要成分

(一)稀释剂

扩大精液容量。

(二)营养剂

提供营养，补充精子所消耗的能量。

第四节精液稀释(三)保护剂

1、缓冲物质：保持pH值；三羟甲基氨基甲烷Tris2、非电解质：降低精清中电解质浓度；

3、防冷剌激物质：防止精子冷休克；

4、抗菌；

5、抗冻物质。乙二醇，DMSO，甘油缓冲、抑菌、防止精子受低温打击第四节精液稀释(四)其它添加剂1、酶类：过氧化氢酶→分解H2O2

；β-淀粉酶→促进精子获能；2、激素类：催产素、PGs；3、维生素类：VitB1

、VitB2

、VitC、VitE；4、其它添加成分：二氧化碳、EDTA、己酸.第四节精液稀释牛冷冻精液稀释剂配方第四节精液稀释第四节精液稀释第四节精液稀释四、稀释液的配制注意事项1.容器洗涤、消毒；2.稀释用水为蒸馏水，pH值为中性；3.药品纯净、称量准确；4.高温消毒或过滤除菌；5.注意保持酶类等物质的活性。第四节精液稀释五、精液的稀释倍数畜种牛羊猪马稀释倍数10-402-42-42-3计算公式稀释倍数=原精液密度×解冻预测活率×稀释后每份精液体积稀释后每份精液中所含的有效精子数第四节精液稀释1.操作温度应在30℃左右；2.稀释液与精液温度一致；3.将稀释液缓慢倒入精液中；4.高倍稀释应分次进行；5.稀释后立即镜检。

六、精液的稀释方法第四节精液稀释第四节精液稀释恒温低速摇床第五节精液的保存(SemenStorage)

㈠精液的保存常温保存（15－25℃）低温保存（0－5℃）冷冻保存（-79℃或-196℃）一、概述㈡各种精液保存方法的理论

1、暂时抑制或停止精子的运动；

2、降低其代谢速度，减缓其能量消耗。第五节精液的保存㈢降低代谢水平的几种途径⒈降低温度；⒉控制稀释液的pH值（弱酸）；⒊与空气隔绝；⒋加适量的抗生素；⒌加适量的营养物质，补充能量消耗。第五节精液的保存二、常温保存

常温保存主要适用于公猪的精液。

⒈向稀释液中充CO2；⒉利用精子代谢所产生的CO2调节pH值；⒊在稀释液中加酸类物质和充以氮气，如己酸稀释液。第五节精液的保存三、低温保存㈠原理

在抗冷剂保护下，防止精子冷休克；缓慢降温至0-5℃，利用低温抑制精子的活动，降低精子能量消耗，抑制微生物生长；加入必要的营养成分，并隔绝空气。第五节精液的保存㈡方法

防止冷休克：卵黄、奶类；严格遵守逐步降温的操作规程。第五节精液的保存四、冷冻保存（SemenFreezing）精液冷冻保存是利用液氮、干冰或其他冷源，将精液经过适当处理后，保存在超低温中，以达到长期保存精液的目的。第五节精液的保存(一)保存原理

1.冷冻保存的温度为-70℃以下的超低温；2.超低温条件下精子代谢处于静止状态；3.精子内外水分子在低温下的变化：

a.晶体化（0-60℃）

b.玻璃化（-60

-250℃）

第五节精液的保存(二)精液冷冻保存稀释液含有低温保护剂（卵黄、牛奶）防冻保护剂（甘油）维持渗透压物质（糖类、柠檬酸钠）抗菌素以及其它添加剂第五节精液的保存

1.精液的稀释

2.逐步降温和平衡

3.分装、冷冻和保存

(三)冷冻精液的制作过程第五节精液的保存精液分装第五节精液的保存(四)冷冻保存精液剂型1.塑料细管型0.25ml,2.颗粒型0.1ml第五节精液的保存(五)精液冷冻保存冷源及容器干冰－79℃液氮－196℃保存的容器：液氮罐第五节精液的保存第六节输精(Insemination)

1.母畜的发情鉴定和保定；2.输精器具的消毒；3.技术人员的准备；4.精液解冻；5.精液品质的要求。一、输精前的准备精液解冻

在冷冻精液解冻研究方面,目前英、法、日、墨西哥、印度等国家采用低温(5℃)缓慢解冻,新西兰、芬兰、瑞典、澳大利亚等国采用室温(15℃)中速解冻,匈牙利、比利进等20多个国家多采用37-40℃体温快速解冻,挪威等国家采用75℃高温快速解冻,均取得了良好的效果。

二、输精的基本技术要求牛