第六章环境三致物的生物检测

环境三致物的生物检测

环境三致物：指能致畸、致癌、致突变的物质DNA基因染色体的作用检测DNA损伤，DNA损伤修复等检测三致物对基因突变，包括正向突变和回复突变染色体畸变试验；微核试验；SCE试验特点：时间短、成本低、结果可靠第一页，共十六页。项目九

蚕豆根尖微核监测技术

一、蚕豆根尖微核技术的原理

让我们复习一下细胞有丝分裂的过程吧第二页，共十六页。第三页，共十六页。有丝分裂各时期第四页，共十六页。植物细胞的有丝分裂第五页，共十六页。有丝分列各期图像第六页，共十六页。项目九

蚕豆根尖微核监测技术

一、蚕豆根尖微核技术的原理

蚕豆根尖细胞在进行有丝分裂过程中，染色体经常发生断裂，但一般情况下，断裂可以自行愈合，如果受到有害因子的攻击，染色体就不能愈合，甚至增加断裂，形成染色体片段，这些染色体片段由于缺乏着丝点而不能到达细胞的两极，而留在细胞质中，一旦新细胞核形成，这些片段就形成大小不同的小核，即微核。因此，我们可以根据微核率的高低说明诱变物的强弱。

第七页，共十六页。项目九蚕豆根尖微核监测技术二、受试生物材料

松滋青皮豆，或其他蚕豆品种1.蚕豆浸种催芽

25℃，浸泡26～30h

浸种

催芽：用纱布松松包裹吸涨的种子置解剖盘内，保持湿度，在25℃的温箱中催芽12～30h。待种子初生根露出2～3mm，再选取发芽良好的种子，放入铺满薄层湿脱脂棉的解剖盘内，仍在25℃下催芽36～48h，当大部分种子的初生根长至2～3cm时，即可用于处理

三、试验步骤第八页，共十六页。项目九蚕豆根尖微核监测技术2.处理根尖

每一处理选取6～8粒初生根生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，让被测液浸泡住根尖即可，用自来水（或蒸馏水）作对照处理，方法相同。处理时间为4～6h。

3.根尖细胞恢复培养

将处理后的种子，用自来水（或蒸馏水）浸洗3次，每次2～3min，然后把洗净的种子再放入湿脱脂棉盘中，按前述培养条件恢复培养22～24h第九页，共十六页。项目九蚕豆根尖微核监测技术4.根尖细胞的固定

将恢复后的种子，从根尖顶端切下lcm长幼根放入青霉素空瓶中，加卡诺氏液固定24h5.孚尔根（Feulgen）染色

(1)固定好的幼根，在青霉素瓶中用蒸馏水浸洗2次，每次5min(2)吸净残水，再加5mol/LHCI将幼根泡住，连瓶放入28℃水浴锅中水解幼根25min左右，至幼根被软化即可

(3)用蒸馏水浸洗幼根2次，每次5min第十页，共十六页。项目九蚕豆根尖微核监测技术(4)在暗室或遮光的条件下加席夫（Schiff）试剂，染色1～4h

(5)除去染液，用SO2洗涤液浸洗幼根2次，每次5min(6)用蒸馏水浸洗1次，5min(7)将幼根放入新换的蒸馏水中，置4℃的冰箱内保存，可供随时制片之用。

6.制片

45%醋酸压片法第十一页，共十六页。项目九蚕豆根尖微核监测技术7.镜检及微核识别标准

◆大小是主核大小的1/3以下，并与主核分离；◆形状为圆形、椭圆形或不规则形；◆着色与主核相当或稍浅

每一处理观察3个根尖，每个根尖随机计数1000个细胞中的微核数

第十二页，共十六页。项目九蚕豆根尖微核监测技术五、实验数据的统计处理和污染程度的划分

（一）数据处理

1.按以下公式计算各测试样品（包括对照组）的微核千分率（MCN‰）

MCN‰=某测试点（或对照组）观察到的MCN数某测试点（或对照组）观察到的细胞数×100％2.如果被监测的样品不多，可直接用各样品MCN率平均值与对照比较（t检验），从差异的显著性判断水质污染与否

第十三页，共十六页。项目九蚕豆根尖微核监测技术3.如果被检测的样品较多，可先用方差分析（F检验）看各样品的MCN‰平均值与对照的差异显著性。

（二）结果评价

1.利用“MCN‰”进行评价

<10‰ 无污染10‰～18‰ 轻污染18‰～30‰ 中污染>30‰ 重污染

第十四页，共十六页。项目九蚕豆根尖微核监测技术2.利用“污染指数”

进行评价

PI值越高，说明污染越重。0～1.5基本没有污染1.5～2轻污染

2～3.5中污染>3.5重污染

（三）结果报告

第十五页，共十六页。内容总结环境三致物的生物检测。检测DNA损伤，DNA损伤修复等。特点：时间短、成本低、结果可靠。因此，我们可以根据微核率的高低说明诱变物的强弱。◆大小是主核大小的1/3以下，并与主核分离。五、实验数据的统计处理和污染程度的划分。1.按以下公式