动物主要疫病病原监测技术规范（征求意见稿）

ICS65.020.30CCSB43DB21Techniquesspecificationforsurveyingmajorpathogenicmicroorganismof-（本稿完成日期：2024/9/11）辽宁省市场监督管理局发布IDB21/XXXXX—XXXX 12规范性引用文件 13监测疫病种类 14样品的采集 25疫病防控样品保存和运输 2 4 5 6 7DB21/XXXXX—XXXX本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起本文件代替DB21/T1906-2011《动物主要疫病病原监测技术规范》，与DB21/T1906-2011相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下:a)更改了规范性引用文件；b)更改了检测疫病种类；c)更改了检测样品的采集、保存和运输；d)更改了附录A病原检测依据标准；e)更改了附录B病原检测结果记录表；f)更改了附录C病原检测结果汇总表。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心。本文件主要起草人：。本文件为首次发布。本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北2号联系电话文件起草单位通讯地址：辽宁省动物疫病预防控制中心（沈阳市沈河区万柳塘路105号甲联系电话1DB21/XXXXX—XXXX动物主要疫病病原监测技术规范本文件规定了动物疫病病原监测方法和技术要求。本文件适用于动物疫病病原学监测、疫病诊断活动。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T16550新城疫诊断技术GB/T16551猪瘟诊断技术GB/T18090猪繁殖与呼吸综合征诊断方法GB/T18636蓝舌病诊断技术GB/T18637牛病毒性腹泻/粘膜病诊断技术规范GB/T18638流行性乙型脑炎诊断技术GB/T18639狂犬病诊断技术GB/T18641伪狂犬病诊断方法GB/T18643鸡马立克氏病诊断技术GB/T18645动物结核病诊断技术GB/T18646动物布鲁氏菌病诊断技术GB/T18647动物球虫病诊断技术GB/T18648非洲猪瘟诊断技术GB/T18649牛传染性胸膜肺炎诊断技术GB/T18935口蹄疫诊断技术GB/T18936高致病性禽流感诊断技术GB/T19167传染性法氏囊病诊断技术GB/T19438.1禽流感病毒通用荧光RT—PCR检测方法GB/T19438.2H5亚型禽流感病毒荧光RT—PCR检测方法GB/T19438.3H7亚型禽流感病毒荧光RT—PCR检测方法GB/T19438.4H9亚型禽流感病毒荧光RT一PCR检测方法GB19489实验室生物安全通用要求GB/T21675非洲马瘟诊断技术GB/T23197鸡传染性支气管炎诊断技术GB/T27982小反刍兽疫诊断技术GB/T34720山羊接触传染性胸膜肺炎诊断技术GB/T36789动物狂犬病病毒核酸检测方法2DB21/XXXXX—XXXXGB/T39602牛结节性皮肤病诊断技术NY/T536鸡伤寒和鸡白痢诊断技术NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T545猪痢疾诊断技术NY/T551鸡产蛋下降综合征诊断技术NY/T553禽支原体PCR检测方法NY/T555动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法NY/T556鸡传染性喉气管炎诊断技术NY/T557马鼻疽诊断技术NY/T561动物炭疽诊断技术NY/T562动物衣原体病诊断技术NY/T563禽霍乱(禽巴氏杆菌病)诊断技术NY/T564猪巴氏杆菌病诊断技术NY/T566猪丹毒诊断技术NY/T572兔病毒性出血病血凝和血凝抑制试验方法NY/T573弓形虫病诊断技术NY/T575牛传染性鼻气管炎诊断技术NY/T576绵羊痘和山羊痘诊断技术NY/T1466动物棘球蚴病诊断技术NY/T1981猪链球菌病监测技术规范NY/T3235羊传染性脓疱诊断技术NY/T3190猪副伤寒诊断技术SN/T1447猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范SN/T1919猪细小病毒病检疫技术规范SN/T2018马鼻疽检疫技术规范SN/T2708猪圆环病毒病检疫技术规范SN/T2710山羊传染性胸膜肺炎检疫技术规范SN/T2717马传染性贫血检疫技术规范SN/T3509实验室样品管理指南SN/T4104猪支原体肺炎检疫技术规范3监测疫病种类非洲猪瘟、高致病性禽流感、口蹄疫、小反刍兽疫、新城疫、猪瘟、布鲁氏菌病、棘球蚴病、狂犬病、猪繁殖与呼吸综合症、马传染性贫血病、马鼻疽、蓝舌病、结核病、牛结节性皮肤病、非洲马瘟、牛传染性胸膜肺炎。4样品的采集4.1血清学监测样品的采集4.1.1禽血样品的采集方法3DB21/XXXXX—XXXX雏禽心脏采血：左手抓雏禽，术者手持采血针，平行颈椎从胸前口插入回抽见有回血时，即把注射器活塞向外拉使血液流入注射器，每只采集全血1.5mL～2.5mL。成年禽心脏采血：侧卧保定时，助手抓住禽两翅及两腿，右侧卧保定，在手指触心搏动明显处，或胸骨脊前端至背部下凹处连线的1/2处消毒，垂直或稍向前方刺入2cm～3cm,回抽见有回血时，即把注射器活塞向外抽使血液流入注射器，每只采集全血1.5mL～2.5mL。仰卧保定时，胸骨朝上，用手指压离嗦囊，露出胸前口，用装有长针头的注射器，将针头沿其锁骨俯角刺入，顺着体中线方向水平穿行，直到刺入心脏，每只采集全血1.5mL～2.5mL。翅静脉采血：在翅下静脉处消毒，手持注射器，将注射器针头从无血管处向翅静脉丛刺入，见有血液回流，即把注射器活塞向外拉使血液流入注射器，每只采集全血1.5mL～2.5mL。4.1.2猪血样品的采集方法耳缘静脉采血：站立保定，助手用力在耳根捏压静脉的近心端。术者手指轻弹耳缘后，用酒精棉球反复涂擦耳静脉使血管怒张，将针头沿血管刺入，见有血液回流，缓慢抽取所需量血液或接入真空采血管，每头采集全血3mL～5mL，然后用棉球按压止血。前腔静脉采血：站立保定时，保定器保定让猪头仰起，露出右腋窝，从右侧向心脏方向刺入，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流人采血针，每头采集全血3mL～5mL。仰卧保定时，把前肢向后方拉直。一般用装有20号针头的注射器采血，其穿刺部位在胸骨端与耳基部连线上胸骨端旁开2cm的凹陷处，向后内方与地面呈60℃角刺入2cm～3cm,当进入约2cm时可一边刺入一边回抽针管内芯；刺入血管时即可见血进入针管内，每头采集全血3mL～5mL，采血完毕，局部消毒。股静脉采血：助手仰卧固定动物。术者用摸脉法在腹股沟找到股静脉，用手指按压静脉上部，使血管怒张，将针头刺入静脉内，有回血，则缓慢抽取，每头采集全血3mL～5mL，采血完毕，用棉球按压止4.1.3牛、羊血样品的采集方法采血部位下方颈静脉沟血管，促使颈静脉怒张，另一手执针头，与皮肤呈45°角由下向上方刺入，牛尾静脉采血：固定动物，使牛尾往上翘，手离尾根部约30cm。在离尾根10cm左右(第4、5尾椎骨交界处)中点凹陷处，先用酒精棉球消毒，然后将采血针针头垂直刺入(约1cm深)、针头触及尾骨后再回抽1mm抽血，每头采集全血3mL～5mL，采血结束，消毒并按压止血。乳房静脉采血：奶牛、奶山羊可选乳房静脉采血，奶牛腹部可见明显隆起的乳房静脉，消毒后在静脉隆起处，针头向后肢方向快速刺人，见有血液回流，接入真空采血管，每头采集全血3mL～5mL。4.1.4样品处理全血样品采集完毕后，不可立即放入冰盒中，最好在室温下(20℃)放置2h～4h(防止暴晒),环境温度较低时可在恒温培养箱20℃~37℃环境下放置1h,待全血凝固并析出血清后，注入1.5mL或5mL离心管，8000r/min离心4min或3000r/min离心20min,取上清液置于另一离心管内。4.2病原学检测样品的采集4.2.1家禽喉拭子和泄殖腔拭子采集方法4DB21/XXXXX—XXXX取无菌棉签，插入禽喉头内或泄殖腔转动3圈，取出，立即将拭子浸入棉拭子保存管(见附录A)内的保存液中，密封低温保存。4.2.2羽毛采集方法拔取受检鸡含羽髓丰满的翅羽或身上其他部位大羽，将含有羽髓的羽根部分按编号分别剪下收集于小试管内，于每管内滴加蒸馏水2～3滴(羽髓丰满时也可不加),用玻璃棒将羽根挤压于试管底，使羽髓浸出液流至管口，用滴管将其吸出。4.2.3猪扁桃体样品采集方法从活体猪采取扁桃体样品时，应使用专用扁桃体采集器，先用开口器开口，可以看到突起的扁桃体，把采样钩放在扁桃体上，快速扣动扳机取出扁桃体放离心管中，冷藏送检。4.2.4猪鼻腔拭子、咽拭子采集方法应用灭菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉分泌物，蘸取分泌物后，立即将拭子浸入棉拭子保存管内的保存液中，密封低温保存。4.2.5猪肛拭子采集方法用灭菌棉拭子插入肛门采集其内容物和分泌物后，立即将拭子浸入棉拭子保存管内的保存液中，密封低温保存。4.2.6牛、羊咽食道分泌物(O-P液)样品采集方法被检动物在采前禁食(可饮少量水)12h,以免胃内容物反流污染O-P液。采样探杯在使用前经装有0.2%柠檬酸或1%～2%氢氧化钠溶液的塑料桶，浸泡5min,再用与动物体温一致的清水冲洗探杯后使用，每采完一头动物，探杯要再次进行消毒并充分清洗。采样时动物应站立保定，将探杯随吞咽动作送入食道上部10cm～15cm处(主要是感觉吞咽动作),轻轻来回抽动2～3次，然后将探杯拉出。取出8mL~10mLO-P液，倒入含有等量0.5%水解乳蛋白液或磷酸缓冲液(0.04mol/L、pH7.4)的灭菌广口瓶中，充分摇匀加盖封口，放冷藏箱及时送检，未能及时送，应置于-30℃冷冻保存。4.2.7粪便样品采集方法病毒检验：分离病毒的粪便必须新鲜。少量采集时，以灭菌的棉拭子从直肠深处或泄殖腔黏膜上蘸取粪便，并立即投入灭菌的试管内密封，或在试管内加入少量pH7.4的保护液再密封。须采集较多量的粪便时，可将动物肛门周围消毒后，用器械或用戴上乳胶手套的手伸入直肠内取粪便，也可用压舌板插入直肠，轻轻用力下压，刺激排粪，收集粪便。所收集的粪便装入灭菌的容器内，经密封并贴上标签，立即冷藏或冷冻送实验室。细菌检验：采集做细菌检验的粪便，应在动物使用抗菌药物之前，从直肠或泄殖腔内采集新鲜粪便。采样方法与供病毒检验的方法相同。粪便样品较少时，可投入无菌缓冲盐水或肉汤试管内；较多量的粪便则可装入灭菌容器内，贴上标签后冷藏送实验室。寄生虫检验：采集做寄生虫检验的粪便样品，应选自新排出的粪便或直接从直肠内采得，以保持虫体或虫体节片及虫卵的固有形态，一般寄生虫检验所用粪便量较多，需采取5g～19g新鲜粪便，大动物一般不少于60g,并应从粪便的内外各层采取。粪便样品以冷藏不冻结状态保存。5疫病防控样品保存和运输5DB21/XXXXX—XXXX5.1样品保存要求样品置于保温容器中运输，保温容器必须密封，防止渗漏。5.2样品运输的温度要求样品应在特定的温度下运输：在4h内送到省级实验室，可只用冰袋冷藏运输；超过过4h要作冷冻处理。应先将样品置于-30℃冷冻，然后再在保温箱内加冰袋运输，经冻结的样品必须在24h内送到；24h不能送到省级实验室，需要在运输过程中保持-20℃以下。6DB21/XXXXX—XXXX动物疫病高致病性禽流感蓝舌病动物结核病牛结节性皮肤病牛传染性胸膜肺炎根据本省实际情况进行监测的动物疫病禽支原体病7DB21/XXXXX—XXXX分类动物疫病依据标准根据本省实际情况进行监测的动物疫病鸡伤寒和鸡白痢NY/T536动物球虫病GB/T18647免病毒性出血症NY/T572弓形虫病NY/T573绵羊痘/山羊痘NY/T576羊传染性脓疱NY/T3235衣原体病NY/T562山羊传染性胸膜肺炎SN/T2710牛病毒性腹泻/粘膜病GB/T18637牛传