分子生物学名词解释及问答题

名词讲解操控子：是原核生物基因的一个基本转录单位，由编码序列及上游的调控序列组成。编码序列平时包含几个功能相关的结构基因，调控序列有启动序列（启动子）、操控序列（操控基因）及其余调治序列组成。顺式作用元件：是真核基因变大调控转录过程的特别DNA序列，于转录因子结合而起作用，平时包含启动子、增强子、默然子等。反式作用元件：与其余基因的顺式作用元件结合，调治基因转录活性的蛋白质因子，依据功能不同样分为基因转录因子和特异性转录因子。启动子：位于结构基因上游、与RNA聚合酶鉴别、结合的特异DNA序列，与基因转录起始相关。同源重组：是指发生在同源序列见得重组，它经过链的断裂和再连接，在两个DNA分子同源序列间进行单链或双链的交换。又称基因重组。DNA克隆：指在体外对DNA分子依据既定目的和方案进行人工重组，将重组分子导入适合细胞内，使其在细胞扩增和生殖，进而获取该DNA分子大批拷贝的过程称为分子克隆，又叫基因克隆或重组DNA技术。基因工程：在体外将目的基因和载体DNA依据既定的目的基因进行人工重组，并将重组体导入宿主细胞，经过无性生殖和表达获取所需核酸、蛋白质、生物新品种。包含转基因动物、植物、基因工程生产药物、基因诊断和基因治疗等。限制性核酸内切酶：指一类能鉴别和切割双链DNA分子内特定的碱基序次的核酸水解酶，绝大多数是从原核细胞中提取的，可分为三类，此中Ⅱ型是分子克隆中最常用的工具酶。pBR322：是研究最早、最清楚的质粒，其所有序次为4363bp，含有一个复制原点、一个Ampr和Tetr标志，有限制酶酶切位点，可供外源性基因插入，利用这种遗传标志，有益于精选出重组转变菌。gDNA文库：即基因组DNA文库，是指存在于转变菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA的会集。它涵盖了基因组所有基因信息。cDNA文库：是细胞总mRNA的克隆，文库只包含表达蛋白质或多肽的基因。感觉态细胞：用适合的理化方法办理受体菌后，使宿主细胞处于最适摄入和容忍重组体的状态，此时的宿主细胞即称为感觉态细胞。基因诊断：又称DNA诊断，是利用分子生物学即分子遗传学的技术和原理，在DNA水平解析、判断遗传性疾病所涉及的基因异常。基因治疗：向有功能缺点的细胞导入拥有相应功能的外源基因，以纠正活补偿其基因缺点，进而达到治疗的目的，包含体细胞基因治疗和性细胞基因治疗。目的基因：要分别和克隆的相应基因常称为目的基因，因目的基因片段需要插入载体，导入而宿主细胞内进行复制或表达，因此对宿主细胞DNA言，又称它为外源性基因或外源性DNA。质粒：是独立于细菌染色体以外，能自主复制的共价闭合环状双链DNA。细胞信号转导：细胞针对外源信息所发生的细胞内生物学变化及效应的全过程。受体：（receptor）是细胞膜上或细胞内能鉴别外源化学信号并与之结合的成分，其化学实质是蛋白质，个别糖脂。鸟苷酸结合蛋白（G蛋白）：亦称GTP结合蛋白，是一类信号转导分子，此类蛋白因为其生理活性有赖于三磷酸鸟苷（GTP）的结合以及拥有GTP水解酶的活性而得名，在各种细胞信号转导路子中转导信号给不同样的效应蛋白。核酸分子杂交：指用已知的DNA或RNA来检测样品中未知核苷酸序次的分子生物学技术，若两者结合后，经显影或显色可知结合的地址和大小，这一过程称为核酸分子杂交。印迹技术：将凝胶中分其他生物大分子转移（印迹）或直接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。核酸探针：指用来检测某一特定核苷酸序次或基因序次的有同位素或非同位素标志的已知DNA或NA片段。Southern印迹：由E.Southern创立，利用毛细作用将凝胶中的DNA片段转移到载体膜上（NC膜），并将DNA固定于膜上的过程称为Southern印迹。PCR及RT—PCR：PCR即聚合酶链反应，是体外DNA的合成、扩增和放大技术。经变性、退火、延伸的若干循环，极微量的目的基因被特异扩增和放大，RT-PCR即逆转录PCR，又称RNA-PCR，是以mRNA为模板，经逆转录和体外扩增放大获取大批cDNA的一种PCR技术。基因组文库（gDNAlibrary）：包含某一个生物的所有基因组DNA序列的克隆集体，以DNA片段的形式储藏着某一世物的所有基因组DNA信息。cDNA文库：包含某一组织细胞在必然条件下所表达的所有mRNA经反转录而合成的cDNA序列的克隆集体，它以cDNA片段的形式储藏着该组织细胞的基因表达信息。基因芯片：指在固相支持物上原位合成寡核苷酸也许直接将大批DNA探针以显微打印方式有序的固化于支持物表面，尔后与标志的样品杂交，经过对杂交信号的检测解析，即可得出样品遗传信息。蛋白质芯片：将高密度集摆列的蛋白质分子作为探针点阵固定在固相支持物上，当与待测样品反应时，可捕捉样品中靶蛋白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量解析的一种技术。写出以下代号的中文名称：PCR-RFLP:PCR结合限制性片段长度多态性解析（将正常和致病基因的PCR产物经同一限制内切酶消化，可得长度不等的限制性片段，据此判断致病基因有无的解析方法。）PCR-ASO:PCR产物与等位基因特异寡核苷酸探针的杂交解析PCR-SSCP:PCR产物的单链构象多态性解析DGGE:变性梯度凝胶电泳DMD:杜氏营养不良症SRY基因：Y染色体性别决定基因CT-PCR：模板竞争PCRRAPD：随即扩增的多态性DNADDRT-PCR：RNA差别显示逆转录PCR转基因技术：采纳基因转移技术使目的基因整合入受精卵细胞或胚胎干细胞，尔后将细胞导入动物子宫，使之发育成个体。核酸转移技术:核转移技术是将动物的一个体细胞核导入另一个体得去除了胞核的卵细胞内，将该卵细胞导入动物子宫，使之发育成个体。基因剔除技术:有目的地去处动物体内某种基因的技术或基因靶向灭活，其基根源理是成立在同源重组的基础上。功能克隆和定位克隆：功能克隆是指对一种致病基因功能的认识出发克隆该致病基因。定位克隆是指从一种致病基因的染色体定位出发渐渐减小范围，最后克隆该基因。基因诊断：经过直接检测基因的结构及其表达水平可否正常，进而对疾病做出诊断的方法，平时用于遗传病、病原体、肿瘤等基本，基因补充：将目的基因导入病变细胞或其余细胞，经过目的基因的非定点整合，使其表达产物补偿缺点基因的功能或使原有的功能得以增强。基因疫苗：指DNA疫苗将编码外源性抗原的基因插入到真核表达质粒中，直接导入人体内，使抗原基因在一准时间内连续表达，不停刺激机体免疫系统，达到防病或治病目的。自杀基因：指宿主细胞获取的外源基因，表达某种酶能将对宿主细胞无毒或低毒的药物前体转变成细胞毒性物质，致使宿主细胞死亡。该基因称为自杀基因，可用于肿瘤的基因治疗。写出以下代号的中文名称：RFLP：限制性片段长度多态性VNTR：可变串通重复多态性SSCP：单链构象多态性PCR-ASO：聚合酶链式反应-等位基因特异性寡核苷酸问答题试述乳糖操控子的调控体系。（1）乳糖操控子的机构中含有Z、Y、A三个结构基因，分别编码利用乳糖乳糖的β-半乳糖苷酶、通透酶、乙酰基转移酶。其他还有一个操作序列O、一个启动序列P及上游的分解代谢物基因激活蛋白（CAP）结合位点，组成乳糖操控子的调控区。在操控子的上游还有一个调治基因I,编码一种隔断蛋白，后者可与O序列结合而使操纵子处于关闭状态。（2）乳糖操控子的负调控：当细菌以葡萄糖为能源时，i基因编码一种隔断蛋白，与O序列结合，阻拦RNA聚合酶与P序列结合和向结构基因搬动，而控制结构基因的转录。3）乳糖操控子的正调控：当细菌只好以乳糖为能源时，乳糖转变成半乳糖，后者与阻遏蛋白结合，使其构象变化而不能够联合O序列，进而引诱转录过程。同时，细胞内cAMP

的含量高升，

cAMP

与

CAP

结合，使

CAP

结合到

CAP

结合位点上，促进转录过程。何谓限制性核酸内切酶？Ⅱ型限制酶的作用特色是什么？指一类能鉴别和切割双链DNA分子内特定的碱基序次的核酸水解酶，绝大多数是从原核细胞中提取的，可可分为Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ型，此中Ⅱ型是分子克隆中最常用的工具酶。Ⅱ型限制酶的作用特色：（1）之内切方式切断双链

DNA

的磷酸二酯键；

（2）能鉴别切割

4~8bp

回文结构；（3）切割可有两类切口，产生三种尾端。何谓载体？分子克隆中优异的载体应具备哪些条件？能够携带外源

DNA

（目的基因）进入受体细胞，实现外源

DNA

的无性生殖或表达有意义的蛋白质所采纳的一些

DNA

分子。优异载体应具备的条件：

a、一定有自己的复制子，能在宿主细胞内独立自主复制并能携带重组

DNA

片段一同扩增。

b、一定有限制性内切酶酶切位点（即多克隆位点）以供外源

DNA

插入。

c、拥有可供选择的遗传标志（如抗药基因、酶基因、营养缺点型以及形成吞噬瘢的能力等），以供阳性重组体的精选。d、分子量应尽量小，以便容纳较大的外源DNA片段，拥有拷贝数高，与宿主细胞核酸易分裂，抗剪切力强等特色。e、表达型载体还应装备与宿主细胞相适应的启动子、前导序次、增强子等调控元件。简述DNA克隆的基本步骤。1）目的基因的获取2）基因载体的选择与成立3）目的基因与载体的体外拼接4）重组DNA分子导入受体细胞5）精选并没有性生殖含有重组分子的受体细胞（转变子）常用的工具酶有哪些？其主要用途是什么？（1）限制性核酸内切酶（一定）：鉴别并特异切割DNA碱基序列，（2）DNApolⅠ：催化缺口平移，制备高比度DNA探针（3）Klenow片段（掌握）：合成cDNA的第二条链，补齐或标志双链DNA3′端4）多核苷酸激酶：催化多聚核苷酸5′-羟基尾端磷酸化，或标志探针5）逆转录酶：催化合成cDNA6）尾端转移酶：将3′-羟基尾端进行同质多聚物加尾7）DNA连接酶（一定）：催化2条DNA链之间形成磷酸二酯键8）碱性磷酸酶：切除常用的基因获取方法有哪些？制备基因组文库建cDNA文库PCR扩增目的基因人工合成DNA技术常用的基因与载体连接方法有哪些？（1）粘性尾端连接:将靶基因片段和载体DNA经同样限制酶分别切割，使它们两端产生同样的黏性尾端。尔后经黏性尾端碱基配对，再经DNA连接酶作用，共价连接成新的重组DNA分子，（2）平头尾端连接：将平尾端的DNA分子在T4DNA连接酶催化下，使DNA分子在3′OH和5′P进行共价结合（3）人工接头法：是指利用人工接头加在平端DNA片段的两端，尔后用相应限制酶切割人工接头以产生黏性尾端，再与带同样黏性尾端的载体相连，（4）同源多聚尾联接法：在尾端脱氧核苷酸转移酶催化下，在线形载体分子的两端加上单一核苷酸加dG组成的多聚尾，而在目的DNA分子的两端加上dC尾，两者混杂退火，尔后经DNA聚合酶Ⅰ或Klenow填充裂口处缺失的核苷酸，再经过DNA连接酶修复成环状的双链DNA什么是蓝白斑精选法？这种方法是依据组织化学的原理来精选重组体。主若是在载体的非必需区插入一个带有大肠杆菌-半乳糖苷酶的基因片度，携带有lac基因片段的载体转入lac的宿主菌后，在含有5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷X-gal）平板上形成浅蓝色的噬菌斑，外源基因插入lac后，重组的能（的噬菌体将丧失分解X-gal力，转入lac宿主菌后，在含有5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷（X-gal）平板上形成白色的噬菌斑，非重组的噬菌体则成为蓝色噬菌斑。简述细胞信号转导的基本路线。细胞外信号→受体→细胞内多种分子的浓度、活性、地址变化→细胞应答反应简述细胞在转导信号过程中所采纳的基本方式。①改变细胞内各种信号转导分子的构象②改变信号转导分子的细胞内定为③促进各种信号转导分子复合物的形成④改变小分子信使的细胞内浓度或散布阐述：G蛋白欧联受体怎样经过发挥信号转导的作用，举例说明。重点：G蛋白偶联受体（GPCR）得名于这种受体的细胞内部分总是与异源三聚体G蛋白结合，受体信号转导的第一步反应都是活化G蛋白。GPCR是七跨膜受体信号转导路子的基本模式：配体+受体→G蛋白→效应分子→第二信使→靶分子→生物学效应例子：胰高血糖素受体经过AC-ｃＡＭＰ－ＰＫＡ通路转导信号核酸分子杂交的基根源理、操作重点和常有种类。基根源理：是利用ＤＮＡ变性和复性这一基天性质来进行DNA和RNA定性或定量的解析技术。双链DNA在变性因子作用下，氢键断裂成为单链，而当除去变性因子，则两条相互分开的单链重新结合并形成双链。基本操作：核酸制备→核酸分子电泳→转印至固相载体或核酸分子直接固定在固相载体→杂交→检测（放射自显影和化学检测）核酸分子杂交常有种类：Southernblot、Northernblot、斑点杂交、原位杂交、DNA芯片技术试述PCR系统的原理、过程及应用。基根源理：（

1）体细胞分裂中

DNA

的半保留复制机理（

2）体外

DNA

分子的热变性和退火（3）

dNTP

存在时，耐高温的

TaqDNA

聚合酶使引物沿单链模板延伸为

dsDNA故经过高温变性、低温退火、适温延伸的若干循环，目的

DNA

被扩增、放大过程：（

1）DNA

模板的高温变性：在

95℃时，

dsDNA

→

ssDNA

（2）

ssDNA

与引物适温退火形成模板—引物复合体（

3）延伸：

DNA

聚合酶

72℃催化以

dNTP

为底物的目的

DNA

合成，经过

25—

30

次循环，目的基因被扩大至可供检测或应用的量应用：

a、目的基因克隆

b基因的体外突变

c、

DNA

或

RNA

的微量解析

d、DNA

的序列测定e、基因突变解析说明PCR系统的组成及其在医学上的应