天然药物化学试验

天然药物化学(huàxué)实验须知〔一〕实验要求〔二〕实验室规那么〔三〕实验室平安本卷须知〔四〕实验报告格式第一页，共24页。1实验一药用植物化学成分的提取一实验目的1了解天然药物成分的分析方法2掌握预实验的实验技术二实验原理：1单项预试法：寻找特定成分。2系统预试法：在未知情况下对可能含有的各类成分进行全面(quánmiàn)检查。第二页，共24页。2三实验步骤(bùzhòu)：1制备样品试液〔1〕石油醚提取液——挥发油、油脂、甾醇三萜〔2〕乙醇提取液——黄酮内酯、生物碱、酚类香醇、萜类内酯、强心苷、鞣质、有机酸〔3〕水提取液——氨基酸、多肽、蛋白质、糖类、皂苷有机酸2选择适宜的展开系统3薄层层析取长春花粉末20g,加70%乙醇150ml加热回流0.5h,抽滤，滤液减压浓缩至浸膏。展开系统：氯仿：甲醇=10：1第三页，共24页。3实验二薄层层析及中药成分预实验一实验目的：1了解薄层层析的原理及应用。2掌握薄层层析的实验技术。

二实验原理薄层色谱即TLC，属固液吸附色谱，利用吸附剂〔硅胶〕对不同组分吸附能力的差异，从而到达别离目的的方法。三TLC的应用1可用于判断两个化合物是否相同。2可用于确定(quèdìng)混合物中含有的组分数。3可用于为柱色谱选择适宜的展开剂。4可跟踪有机反响。第四页，共24页。4实验步骤1点样：画出起点线，即距离薄层板一端约1cm处。2展开：浸入深度0.5cm,待展开剂前沿离顶端1cm处，取出用铅笔画出展开剂前沿。展开剂：氯仿：石油醚=5：1显色：〔1〕紫外灯；〔2〕碘缸；〔3〕5%硫酸乙醇溶液4计算比移值Rf=原点距斑点中心距离/原点距展开剂前沿距离思考题：1、在混合物的薄层色谱中，如何(rúhé)判定各组分在薄层上的位置？2、展开剂的的高度假设超过了点样线对实验结果有何影响？3、对一个未知混合物如何(rúhé)选择展开剂？第五页，共24页。5实验三硅胶柱层析一实验目的(mùdì)1、了解硅胶柱层析的原理。2、掌握硅胶柱层析的技术。二实验原理硅胶柱层析属吸附色谱，是利用吸附剂硅胶对被别离物质的吸附能力不同，用溶剂洗脱，以使组分别离。第六页，共24页。6三实验步骤1装柱湿法：量取一定量体积的洗脱剂〔V0〕，倒入色谱柱中，然后，将硅胶放置于烧杯中，参加一定量的洗脱剂搅拌至无气泡，参加柱内，并将活塞翻开，一边沉降一边加，直到加完硅胶，仍使洗脱剂流滴一段时间，使色谱柱中高于硅胶的溶剂几乎全部留入接收瓶中，正确计量接收器中的溶剂量〔V1〕，计算色谱柱的保存体积〔V0-V1〕2上样干法：称取一定量硅胶〔色谱柱中硅胶量的10%〕，置于蒸发皿中，用滴管慢慢参加样品(yàngpǐn)溶液，用滴管慢慢参加样品(yàngpǐn)溶液，边加边搅拌，待硅胶已完全被样品(yàngpǐn)溶液湿润时，在水浴锅上蒸除溶剂，蒸除溶剂后的吸附有样品(yàngpǐn)的硅胶在1000C加热除去水分，第七页，共24页。73洗脱

样品加完后翻开活塞放出液体至柱面相同时，参加洗脱剂至液面高出柱面约10cm,在柱面上参加一个小滤纸片，再加2cm厚的硅胶，再加一团脱脂棉。洗脱剂：石油醚：乙酸(yǐsuān)乙脂：=3：1洗脱收集：每份洗脱液按30ml收集显色合并：第八页，共24页。8槐花(huáihuā)米中芦丁的提取别离第九页，共24页。9实验(shíyàn)目的通过芦丁的提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理与操作。了解(liǎojiě)苷类结构研究的一般程序和方法了解(liǎojiě)UV在黄酮类化合物结构鉴定中的应用第十页，共24页。10实验(shíyàn)原理芦丁溶于热水，难溶于冷水，且分子具较多酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶，在酸中易析出(xīchū)沉淀，故可采用碱提酸沉法提取芦丁。第十一页，共24页。11实验(shíyàn)方法1、芦丁的提取(tíqǔ)、精制槐米粗粉〔40g〕置1000ml烧杯(shāobēi)中，加水600ml，搅拌下参加石灰乳，调pH8—9，加热至微沸，保持30分钟，趁热抽滤。残渣滤液在60—70℃下用浓盐酸调pH4—5，静置1小时，抽滤沉淀〔粗品芦丁〕滤液第十二页，共24页。12粗品芦丁(lúdīnɡ)将沉淀悬浮(xuánfú)于蒸馏水中，加热煮沸15min，趁热抽滤残渣(cánzhā)滤液在60—70℃下用浓盐酸调pH4—5，静置1小时，抽滤芦丁精品注：①加石灰乳时pH不能过高，否那么钙能与芦丁形成螯合物而不溶于水而析出；②加热过程中须不断补充蒸发掉的水分，以保持pH8—9；③pH过低会使芦丁形成盐而降低产率；④可利用芦丁在冷热水中溶解度差异来到达结晶目的。得到的沉淀要粗称一下，按芦丁在热水中1：200溶解度加蒸馏水进行重结晶。第十三页，共24页。132、芦丁(lúdīnɡ)的鉴定〔1〕芦丁的定性反响：取芦丁3~4mg，加乙醇(yǐchún)5~6ml使溶解，分成三份做下述试验。①取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，再酌加少许镁粉注意观察颜色变化情况。②取上述溶液1~2ml，然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记录颜色变化情况。③取上述溶液1~2ml，加等体积的10%α—萘酚乙醇(yǐchún)溶液，摇匀，沿着管壁滴加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色变化第十四页，共24页。14思考题苷类结构的鉴定大体程序如何？怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素3-O-上？怎样证明芦丁分子(fēnzǐ)中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖？第十五页，共24页。15大黄中蒽醌类成分的提取(tíqǔ)别离第十六页，共24页。16实验(shíyàn)目的1．掌握PH梯度(tīdù)萃取的原理及操作技术；2．掌握蒽醌类化合物鉴定方法；3.了解液液萃取法别离混合物的实验方法；第十七页，共24页。17实验(shíyàn)原理利用乙醇为提取溶剂，可把不同类型性质(xìngzhì)互异的蒽醌类成分提取出来；总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度，故回收乙醇后得总提取物可用乙醚提取总苷元；根据蒽醌衍生物的酸性强弱，用不同的碱液进行萃取，最后得到不同的蒽醌苷元。第十八页，共24页。18实验(shíyàn)方法1、大黄(dàihuáng)中总蒽醌成分的提取别离大黄(dàihuáng)粗粉100g置1000ml圆底烧瓶中，参加95%乙醇250ml，回流提取2hr，趁热抽滤醇液药渣参加95%乙醇200ml，回流提取1.5hr，趁热抽滤醇液药渣第十九页，共24页。19乙醇(yǐchún)提取液静置冷却(lěngquè)，抽滤滤液(lǜyè)

减压回收乙醇至糖浆状，将浓缩物转移至250ml三角瓶中

乙醇总提物放冷，参加乙醚60ml冷浸，振摇20′将乙醚液倾入500ml三角瓶中乙醚层浸膏40ml乙醚+16ml丙酮冷浸三次〔每次15′〕乙醚层浸膏乙醚总提液第二十页，共24页。202、游离(yóulí)蒽醌的别离乙醚(yǐmí)总提液5%NaHCO3水溶液萃取3次，每次40、30、30ml，至水层(shuǐcénɡ)颜色变浅乙醚层碱水层5%Na2CO3水溶液萃取3次，每次40、35、35ml碱水层乙醚层2%NaOH水溶液萃取3次，每次30ml，乙醚层碱水层滴加HCl酸化，静置沉淀，抽滤，水洗至中性，枯燥沉淀I，大黄酸

酸化，抽滤水洗，枯燥沉淀Ⅱ大黄素

酸化，抽滤水洗，枯燥沉淀Ⅲ大黄素甲醚、大黄酚

第二十一页，共24页。213、蒽醌类化合物的检识〔1〕薄层鉴别吸附剂：硅胶展开剂：石油醚-正己烷-苯-甲酸乙酯-甲醇-水〔25：75：5：35：6：25〕显色：紫外灯下观察(guānchá)，斑点为黄色〔2〕呈色反响①滴加2%NaOH水溶液，观察(guānchá)颜色变化②滴加0.5%醋酸镁乙醇溶液，观察(guān