生物技术实践专题一微生物

生物技术实践专题一微生物生物技术实践专题一微生物第1页试验要求5-1

微生物利用

（1）微生物分离和培养（2）培养基对微生物选择利用（3）利用微生物发酵来生产特定产物掌握程度参考本考试纲领中：一、考试能力要求2、试验与探究能力5-2

生物技术在食品加工及其它方面应用

（1）从生物材料中提取一些特定成份（2）利用发酵加工食品基础方法（3）植物组织培养掌握程度参考本考试纲领中：一、考试能力要求2、试验与探究能力生物技术实践专题一微生物第2页生物技术实践专题一微生物第3页（2）按培养基物理形态分：液体培养基半固体培养基固体培养基一培养基:（3）按培养基功效分：基础培养基选择培养基判别培养基（1）按培养基化学成份分：·天然培养基·合成培养基·半合成培养基生物技术实践专题一微生物第4页选择培养基加入青霉素培养基:

分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐培养基:

分离金黄色葡萄球菌不加氮源无氮培养基:

分离固氮菌不加含碳有机物无碳培养基:

分离自养型微生物加入青霉素等抗生素培养基:

分离导入了目标基因受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷培养基:

分离杂交瘤细胞生物技术实践专题一微生物第5页各种培养基详细配方不一样，但普通都包含哪些成份？

不论哪种培养基，普通都含有水、碳源、和氮源、无机盐等营养物质。

注：另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,比如:生长因子(即细菌生长必需，而本身不能合成化合物,如维生素、一些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等要求。

生物技术实践专题一微生物第6页(1)无菌技术详细操作①对试验操作空间、操作者衣着和手进行清洁和消毒。②将用于微生物培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。③为防止周围环境中微生物污染，试验操作应在酒精灯火焰附近进行。④试验操作时应防止已经灭菌处理材料用具与周围物品相接触。二无菌技术：无菌操作泛指在培养微生物操作中，全部预防杂菌污染方法。生物技术实践专题一微生物第7页1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒……(2)常见消毒方法：生物技术实践专题一微生物第8页1、灼烧灭菌:2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.(3)常见灭菌方法：生物技术实践专题一微生物第9页条件结果常见方法消毒较为温和物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一个别对人体有害微生物(不包含芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药品消毒法灭菌强烈理化原因杀死物体内外全部微生物，包含芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌生物技术实践专题一微生物第10页(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。三、试验操作纯化大肠杆菌以及菌种保藏生物技术实践专题一微生物第11页灭菌:

将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。倒平板:

待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.

生物技术实践专题一微生物第12页倒平板:生物技术实践专题一微生物第13页1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？问题讨论

答：能够用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚才不烫手时，就能够进行倒平板了。2.为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？

答：经过灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基。注意:生物技术实践专题一微生物第14页3.平板冷凝后，为何要将平板倒置？4.在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？

答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既能够使培养基表面水分更加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染。

答：空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生，所以最好不要用这个平板培养微生物。生物技术实践专题一微生物第15页(2)纯化大肠杆菌①原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化细菌菌落。②方法：平板划线法、稀释涂布平板法。

平板划线法:经过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线操作,将聚集菌钟逐步稀释分散到培养基表面.

在数次画线后,能够分离到由一个细胞繁殖而来肉眼可见子细胞群体,这就是菌落.生物技术实践专题一微生物第16页生物技术实践专题一微生物第17页划线后培养一段时间后生物技术实践专题一微生物第18页微生物恒温培养生物技术实践专题一微生物第19页问题讨论

1.为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？

答：操作第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留菌种，使下一次划线时，接种环上菌种直接起源于上次划线末端，从而经过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。生物技术实践专题一微生物第20页

2.在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。

3.在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？

答：划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落。生物技术实践专题一微生物第21页生物技术实践专题一微生物第22页生物技术实践专题一微生物第23页问题讨论

涂布平板全部操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释无菌操作要求，想一想，第2步应怎样进行无菌操作？

应从操作各个细节确保“无菌”。比如，酒精灯与培养皿距离要适当、吸管头不要接触任何其它物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。生物技术实践专题一微生物第24页(3)菌种保留1、暂时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保留。

2、长久保留：甘油冷冻管藏法生物技术实践专题一微生物第25页一、土壤中分解尿素细菌分离与计数1．选择适当培养基(1)依据培养基用途可分为选择培养基和判别培养基(2)分离分解尿素细菌培养基即为选择培养基。培养基中氮源只有尿素，理论上只有能合成脲酶微生物才能在上面生长。生物技术实践专题一微生物第26页分离分解尿素细菌选择培养基，其配方以下：KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素(唯一氮源)1.0g琼脂15.0g生物技术实践专题一微生物第27页培养基种类特点用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要微生物生长，促进所需要微生物生长培养、分离出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；用尿素为唯一氮源培养基用于分离分解尿素细菌)判别培养基依据微生物代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品判别不一样种类微生物，如可用伊红—美蓝培养基判别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)生物技术实践专题一微生物第28页2．统计菌落数目标方法(1)显微镜直接计数法①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积样品中微生物数量。②方法：用计数板计数。③缺点：不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)①原理：当样品稀释度足够高时，培养基表面生长着一个菌落，起源于样品稀释液中一个活菌，经过统计平板上菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。生物技术实践专题一微生物第29页统计菌落数目

常见稀释涂布平板法统计样品中活菌数目。样品稀释度足够高时，培养基表面生长一个菌落，起源于样品稀释液中一个活菌。经过统计平板上菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为确保结果准确，普通选择菌落数30—300平板计数。生物技术实践专题一微生物第30页②操作a．设置重复组，增强试验说服力与准确性。b．为了确保结果准确，普通选择菌落数在30～300平板进行计数。③计算公式：每克样品中菌株数＝C/V×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长平均菌落数，V代表涂布平板时所用稀释液体积(mL)，M代表稀释倍数。3．细菌分离与计数试验流程土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物培养→观察并统计结果→细菌计数。生物技术实践专题一微生物第31页二、分解纤维素微生物分离1．纤维素酶是一个复合酶，它包含C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。2．纤维素分解菌筛选原理(1)刚果红能够与纤维素形成红色复合物，但并不和水解后纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。(2)纤维素分解菌能增生纤维素酶分解纤维素，从而使菌落周围形成透明圈。生物技术实践专题一微生物第32页生物技术实践专题一微生物第33页3．土壤中纤维素分解菌筛选(1)方案土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到判别纤维素分解菌培养基上→挑选产生透明圈菌落。(2)选择培养目标：增加纤维素分解菌浓度，确保能够从样品中分离到所需要微生物。(3)包括微生物技术主要有：培养基制作、无菌操作、稀释涂布平板法、选择培养基作用、土壤取样等。生物技术实践专题一微生物第34页【例1】从自然菌样筛选较理想生产菌种普通步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

(1)不一样微生物生存环境不一样，取得理想微生物第一步是从适合环境采集菌样，然后再按一定方法分离、纯化。培养嗜盐菌菌样应从_____________环境采集。

(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长特定环境条件，使其在群落中数量大大增加，从而分离出所需微生物培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物富集培养应选择__________________

培养基，并在________条件下培养。海滩等高盐以淀粉为唯一碳源高温生物技术实践专题一微生物第35页(3)下面两图是采取纯化微生物培养两种接种方法接种后培养效果图解，请分析接种详细方法。取得图A效果接种方法是________________，取得图B效果接种方法是________________。(4)配制培养基时各种成份在溶化后分装前必须进行____________，接种前要进行________________，在整个微生物分离和培养中，一定要注意在________条件下进行。稀释涂布平板法平板划线法pH调整高压蒸汽灭菌无菌生物技术实践专题一微生物第36页2．(·宁夏理综，40)(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑________、________和渗透压等条件。因为该细菌具有体积小、结构简单、变异类型轻易选择、________、__________

等优点，所以常作为遗传学研究试验材料。

(2)在微生物培养操作过程中，为预防杂菌污染，需对培养基和培养