微生物与制药

微生物与制药微生物与制药第1页药品抗菌试验

药品体外抗菌试验包含用于区分药品是抑菌或杀菌药品抑菌试验；测定药品杀菌活性杀菌试验；以及检验两种药品联合作用联合抗菌试验等。普通抑菌药品只能抑制微生物生长，不能杀死微生物，抑菌药品被除去，微生物又能够恢复继续生长。杀菌药品能杀死微生物，杀菌药品除去后，微生物依然不能生长。微生物与制药第2页药品抑菌作用或杀菌作用是在一定条件下相对而言。在咱们检测时，药品作用受到用药时培养基组成、温度、PH值及所用菌种、菌量等各个原因相关。即使说体外抗菌试验有很多优点，不过因为体外抗菌试验没有复杂体内原因影响，所以药品体外抗菌试验和体内抗菌试验可能会出现不一致结果。所以，普通咱们在体外对药品进行测试后，有效药再要进行体内试验，假如体内试验再次证实此药有效话，才能推荐应用到临床。微生物与制药第3页第一节药品体外抑菌试验一、药品体外抑菌试验（一）体外抑菌试验药品体外抑菌试验是常见抗菌试验方法，其中最常见方法用系列稀释法和琼脂扩散法。微生物与制药第4页

稀释法

稀释法有液体培养基连续稀释法和固体稀释法（斜面法）两种。这两种方法都能够用来测定药品最小抑菌浓度（MIC）：是指该药品能抑制细菌生长最低浓度，通常见μg∕ml或U/ml表示。详细液体培养基连续稀释法见书本，固体培养基连续稀释法，又可分为平板法和斜面法。微生物与制药第5页2.琼脂扩散法

利用药品在琼脂培养基中扩散，并在一定浓度范围内抑制细菌生长原理进行。普通用于细菌和酵母菌药敏试验。1.

滤纸片法（纸碟法）滤纸片法是最常见方法，适合用于新药初筛试验（初步药品是否有抗菌作用）及临床药敏试验（细菌药品第三性试验、方便选择用药）。滤纸片分湿、干两种，能够在试验时用无菌纸片沾取药品溶液放在含菌平板表面，也以预先做成一定浓度干燥纸片。普通来说预先做成干燥纸片实用一些而且准确一些。微生物与制药第6页干燥纸片制备方法：选取吸水力强而且质地均匀滤纸，用打洞机制成6mm直径圆纸片，120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好各种适宜浓度抗生素溶液，每100张纸片加入0.5ml药液，使它均匀浸润，放在无菌平皿中，37℃，使它干燥，分装小瓶中，封口，4℃保留.普通药敏试验常采取滤纸片法，咱们能够依据抑菌圈大小，来判断菌种对药品敏感性，是敏感，中度敏感还是耐药。微生物与制药第7页世界卫生组织要求了抗菌药品敏感性评定标准，在标准试验条件下依据抑菌圈大小来判断，比如：抗生素或化疗药品抑菌圈直径（mm）耐药中敏敏感氯霉素≤1213-17≥18红霉素≤1314-17≥18四环素≤1415-18≥19卡那霉素≤1314-17≥18微生物与制药第8页2.

打洞法含菌琼脂平板上打洞,所以说微量法适于药品血浓度监测。优点是微量（血清用量少）敏感，操作简便。除此之外还有管碟法、直接滴加法和挖沟法：适合用于测试一个药品对几个细菌抗菌作用。方法是先制备普通琼脂平板，并在平板上挖直沟，在沟内滴加药液，在沟侧接种细菌。经过培养以后观察加细菌生长情况。咱们能够依据沟和细菌间抑菌距离长短，来判断该药品对这些细菌抗菌能力。微生物与制药第9页(二）、

体外杀菌试验杀菌试验是用来评价药品对微生物致死活性。1.

最低杀菌浓度（MBC）（最小致死浓度MLC）测定按液体培养基稀释法操作方法测了药品MIC。然后把未长出菌各个试管培养液分别移种到无菌平板上，培养后凡是平板上无菌生长药品最低浓度就是最小致死浓度（MLC）。假如是细菌话能够称为最小杀菌浓度（MBC）。微生物与制药第10页2.

活菌计数法

将定量试验菌加入到一定浓度定量药品中，作用一定时间后，取样进行活菌数计数，从存活微生物数量计算出药品对试验菌致死率，从而判断药品杀菌能力。活菌计数普通是将定量药品与试验菌作用后混合液稀释后，混入琼脂培养基做成平板，培养后数平板上形成菌落数，因为一个菌落是由一个细菌繁殖而来，所以能够用菌数乘以稀释倍数，计算出混合液中存活细菌数。或者也能够用微孔滤膜过滤药品与试验菌混合液，洗净药液，将滤膜放在平板上培养后数菌落数（CFU)。微生物与制药第11页3.

酚系数测定（石炭酸系数测定）酚系数是以酚为标准，将待测化学消毒剂与杀菌效力相比较，所得就是杀菌效力比值。苯酚系数=消毒剂杀菌稀释度/苯酚杀菌稀释度（苯酚系数大于2或等于2才合格）因为各种化学消毒剂杀菌原理各不相同，因而这种方法仅仅适合用于酚类消毒剂杀菌效力测定。详细测定方法:是分别将酚及待测化学消毒剂按不一样百分比稀释，各取5ml放到试管中，再加入经二十四小时培养后菌悬液各0.5ml，混匀后放入20℃水浴中，5、10、15分钟分别取一接种环混合液移种到另一支5ml肉汤培养基中，37℃培养二十四小时统计生长情况。微生物与制药第12页（三）、

联合抗菌试验1、联合抗菌试验主要用于测定两种抗菌药品联合应用时相互影响。①无关作用小，两种药品联合作用活性等于其单独活性；②拮抗作用，两种药品联合作用显著低于单独抗菌活性；③累加作用，两种药品联合作用时活性等于两种单独抗菌活性之和；④协同作用，两种药品联合作用显著大于其单独作用总和。微生物与制药第13页常见方法

1.

棋盘格法棋盘稀释法是常见定量方法，首先分别测定拟联合抗菌药品对检测菌MIC。药品稀释分别在方阵纵列和横列进行，这么在每管（孔）中可得到不一样浓度组合两种药品混合液。接种菌量为5×105CUF／ml，35℃孵育18h后观察结果。计算个别抑菌浓度（FIC）指数0．5为协同作用；0．5－1为相加作用；1～2为无关作用；＞2为拮抗作用。

微生物与制药第14页[棋盘法设计]棋盘法主要优点在于甲、乙两药每个药品浓度都有单独和与另一个药品不一样浓度联合，所以能准确测定两种抗菌药品在适当浓度百分比下所产生相互作用。在进行棋盘法之前应先测定两种抗菌药品单独对受试菌MIC，然后以两药MIC8倍、4倍、2倍、1倍以及MIC1/2、1/4、1/8浓度（或4倍、2倍、1倍、1/2、1/4浓度）分别进行联合。可见举例，如表—1青霉素G与链霉素联合药敏试验和表2TMP+SMZ联合作用。微生物与制药第15页药品及浓度青霉素G(IU／m1)链霉素单药对照4210.50.25链霉素（µg／ml）64------32------16------8---+++4---+++青霉素G单药对照---++细菌对照-：无细菌生长+：有细菌生长FIC指数=1／1+16／16=2——无关微生物与制药第16页

2.纸条试验

在含菌平板上垂直放两条浸有不一样药液滤纸条，培养后观察两药形成抑菌区图形来判断两药联合应用时，是无关、协同还是拮抗作用。

微生物与制药第17页3.

纸条梯度平板试验

将琼脂培养基倒入平皿，平皿斜放凝固后制成斜面培养基。将平皿放平加入含抗菌药品琼脂培养基，这么在制成双层琼脂平板中含有梯度浓度抗菌药品。要求其最小抑菌浓度位置约处于平板二分之一。然后将试验菌液均匀涂布在平板表面。取纸条浸透另一待检药液，按梯度中药品浓度递减方向置于平板表面，培养后观察形成抑菌区图形以判断两种药品之间相互作用。微生物与制药第18页意义目标在于：①治疗混合性感染；②预防或推迟细菌抗生素耐药性发生；③联适用药能够降低剂量以防止到达毒性剂量；④联适用药比单一用药时效果更加好。微生物与制药第19页二、药品体内抗菌试验

药品体内抗菌试验又称为动物试验治疗试验或保护力试验。当抗菌药品进入机体后，其效力发挥要受体内各种原因影响。如血液及组织内蛋白质或磷脂、脓汁内核酸均与药品结合，降低药品活性；坏死组织内酸性环境也能影响药品活性。机体内微生物，代谢活动较低，对药品敏感性降低，有时还可形成细胞壁缺点型细菌，对一些药品不敏感。机体内各组织中药品吸收，分布不一样，使药品浓度难以恒定。所以在评定新药药效时除做体外抗菌试验外还需要做体内抗菌试验。

微生物与制药第20页三、影响抗菌试验原因

1.

菌种在抗菌试验中所用到菌种，必需是国家卫生部生物制品检定所菌各保藏中心专门提供标准菌株。在特殊情况下，也能够采取临床新分离并经过判定、纯化及合理保藏菌株。而且咱们要用到试验菌种应该选择是对数期生长菌。因为那时菌种生命力最旺盛，这对于我试验测定结果也会准确些。微生物与制药第21页1.

培养基试验所用到培养基应按各试验菌营养要求进行配制，严格控制各种原料、成份质量及培养基配制过程。要注意当有些药品含有抗代谢作用时，培养应不能存在代谢物，不然抑菌作用将会被消除。培养基内假如含有血清等蛋白质时，有可能与一些抗菌药品结合，使抗菌药品失去，所以就要防止培养基混进这类营养物。微生物与制药第22页3.

抗菌药品药品物理状态、浓度、稀释方法等都会直接影响抗菌试验结果，必需准确配制。假如是固体药品，必需使药品溶解或使药品呈均匀悬液。PH值应调至中性，以确保药品稳定性和不影响细菌生长。中草药因为有颜色和含有鞣质，结果判断，应尤其注意。微生物与制药第23页4.

对照试验为确保试验结果科学性和准确性，试验时应同时进行各种对照试验。试验菌对照：在无药情况下，应能在培养基内正常生长。溶剂及稀释液对照：配制抗菌药品时所用溶剂及稀释液均应无抗菌作用。已知药品对照：应使已知抗菌药品对标准菌株出现抗菌效应。

微生物与制药第24页复习题：1.

药品体外抑菌试验常见方法有哪几个？详细试验操作方法？

2.

怎样测定药品最小致死浓度？

3.

联合抗菌试验常见方法有哪些？

4.

药品体内抗菌试验方法？

5.

抗菌试验影响原因有哪些？微生物与制药第25页试验细菌对药品敏感性试验（药敏片扩散法）目标意义：

掌握药敏片扩散法进行药敏试验普通方法体会药敏试验在临床用药上指导意义基础原理：

药敏片是含有抗生素滤纸片，将其置于涂满待测菌固体培养基上，抗菌药品经过向培养基内扩散，抑制细菌生长，从而出现抑菌环。依据抑菌环大小能够判定细胞对此药品敏感度。微生物与制药第26页器材及试剂:药敏片：含各种抗生素市售产品培养基平板：普通牛肉膏蛋白胨固体培养基，待检细菌培养物。眼科镊、无菌棉拭子、酒精灯等。微生物与制药第27页试验步骤:1、用无菌棉拭子沾取小量待测菌液，均匀涂布平板，待稍干后，用无菌眼科镊将各种药敏片分别平贴在平板培养基表面，每板4-6个，相互间应有一定距离（15mm）。2、置37℃，培养8-12h，观察结果。3、结果判定：观察有没有抑菌圈及测量其直径，按下表判定对药品敏感性。微生物与制药第28页中国药典二部微生物程度标准(单位：个/g或个/ml)