肠杆菌科讲解专家讲座

主讲人：《中华医学检验全书》主编北华大学临床微生物学教授李影林年10月第10章肠杆菌科肠杆菌科讲解第1页

一、种类肠杆菌科细菌当前已经有44个属170多个种。临床上常见有

概述埃希菌属（Escherichia）沙门菌属（Salmonella）志贺菌属（Shigella）耶尔森菌属（Yersinia）枸橼酸杆菌属（Citrobacter）克雷伯菌属（Klebsiella）

肠杆菌属、多源菌属、哈夫尼亚属沙雷菌属（Serratia）

变形杆菌属、普罗菲登菌属、摩根菌属肠杆菌科中其它菌属肠杆菌科讲解第2页

第一节埃希菌属

（Escherichia）

(E.coli)(E.fergusonii)(E.hermannii)(E.vulneris)(E.blattae)不脱胺/凝聚埃希菌。(E.abecarboxylata/agglomerans)

代表菌：大肠埃希菌（Escherichiacoli）

肠杆菌科讲解第3页学习大肠埃希菌有何意义?1.大肠埃希菌为肠道正常菌群组员。2.又为条件致病菌,引发肠道外感染。3.一些血清型含有致病性。4.环境卫生学和食品卫生学惯用作粪便污染指标。5.用于基因工程研究。肠杆菌科讲解第4页一、生物学性状

（一）形态与染色1.G-两端钝圆中等大小短杆菌。2.周鞭毛，无芽胞，电镜观察有周身菌毛

。菌毛：普通菌毛、性菌毛3.一些菌株有包膜（K）。4.培养早期或分泌物中可形成球形。肠杆菌科讲解第5页1.对营养要求不高，本身合成能力很强

。2.兼性厌O215~45℃均可发育，最适温度37℃，最适pH7.4~7.6。3.在普通琼脂上可形成光滑、湿润、灰白色半透明、凸起、边缘整齐中等大小（2~3mm）菌落。4.在血平板上生长更佳，一些菌株（溶血性菌株）可产生β溶血。

（二）培养特点肠杆菌科讲解第6页（1）SSA—指示剂为中性红，分解乳糖产酸细菌（大肠埃希菌）呈红色菌落（2）中国蓝大肠埃希菌分解乳糖产酸形成大而浑浊蓝色菌落，其它不分解乳糖肠道菌为透明淡红色菌落。5.在肠道选择性培养基上，因能分解乳糖产酸，使指示剂变色形成有色菌落。肠杆菌科讲解第7页肠杆菌科讲解第8页（三）生化反应

1.可分解各种糖（醇）类葡、乳、麦、甘⊕对蔗糖、卫矛醇、棉子糖、鼠李糖则因菌株而异。2.IMVC—为++--。3.尿素酶、苯丙氨酸、丙二酸盐-。

4.克氏双糖铁⊕/⊕肠杆菌科讲解第9页IMVCIMVC++----++肠杆菌科讲解第10页

(四)Ag结构复杂

主要有O、H、K三种Ag1.O-Ag本质—是细菌细胞壁成份，其化学组成是脂多糖组成—其分子由3部分组成：

肠杆菌科讲解第11页

2.H-Ag⑴本质—其化学组成为鞭毛蛋白⑵性质—不耐热⑶其特异性取决于多肽链排列次序和空间构型

肠杆菌科讲解第12页

3.K-Ag⑴本质—化学成份是多糖⑵性质

⑶细菌种类不一样，其名称也不一样

E.coli－K-AgS.typhiîíì--不耐热作用与对应故可阻断周围因其包绕.bAbAgO，AgO.a区分点LAB①破坏其本身可凝集性100℃1h120℃2.5h100℃1h②破坏其抑制O血清凝集100℃1h120℃2.5h100℃1h③与抗体结协力破坏100℃1h121℃2.5h不破坏100℃2.5h不破坏④抗原性破坏100℃1h120℃2h100℃1h⑤本质菌毛抗原荚膜荚膜抗原表示法：上述3种抗原均用阿拉伯数字表示其型别按O:K:H比如：O111:K58:H2简写：O111:58:2O86:B7:H3简写：O86:7:3表示法：上述3种抗原均用阿拉伯数字表示其型别按O:K:H比如：O111:K58:H2简写：O111:58:2O86:B7:H3简写：O86:7:3ViAg肠杆菌科讲解第13页（五）抵抗力不强1.10g/L石炭酸15~30min被杀死;2.加热60℃10min即死;3.对酸敏感肠杆菌科讲解第14页二、致病性

(一)致病物质1.黏附素使细菌紧密黏附于肠道泌尿道细胞上,防止尿液冲刷和肠蠕动排除。

⑴特点:含有高度特异性①定植抗原Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(CFA/Ⅰ、CFA/Ⅱ、CFA/Ⅲ)

②集聚黏附菌毛Ⅰ和Ⅲ(

AAF/Ⅰ、AAF/Ⅲ)

③束形成菌毛(bundleformingpili,Bfp)

⑵种类④紧密黏附素(intimin)⑤P菌毛⑥侵袭质粒抗原(invasionplasmidantigen,Ipa)蛋白

⑦Dr菌毛肠杆菌科讲解第15页

(1)志贺毒素Ⅰ和Ⅱ(Shigatoxins,Stx-Ⅰ,Stx-Ⅱ)（2）耐热肠毒素a和b（heatstableenterotoxin,STa,STb）(3)不耐热肠毒素Ⅰ和Ⅱ（heatlabileenterotoxin,LT-Ⅰ,LT-Ⅱ）(4)溶血素A2.外毒素

肠杆菌科讲解第16页

(1)志贺毒素Ⅰ和Ⅱ(Shigatoxins,Stx-Ⅰ,Stx-Ⅱ)①产生菌株及作用肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagicE.coli,EHEC)可表示志贺毒素,引发上皮细胞微绒毛破坏。②性质

Stx-Ⅰ与志贺菌产生志贺毒素基本相同。Stx-Ⅱ则有60%同源。两型毒素均由溶原性噬菌体介导。肠杆菌科讲解第17页③结构及作用A亚单位可裂解60S核糖体亚单位28SrRNA阻止与氨酰tRNA结合,终止蛋白质合成。Stx由1个A亚单位和5个B亚单位成。B亚单位与宿主细胞特异性糖脂受体结合(肠绒毛和肾上皮细胞都有高浓度糖脂受体)肠杆菌科讲解第18页④作用机制A.绒毛结构破坏引发吸收减低和液体分泌相对增加。B.溶血性贫血尿毒综合征(hemolyticuremicsyndrome,HUS)在产生志贺毒素Ⅱ(Stx-Ⅱ)EHEC中较多,因Stx-Ⅱ能选择性破坏肾小球内皮细胞,引发肾小球滤过降低和急性肾功效衰竭。C.志贺毒素(Stx)还能刺激炎症细胞因子(肿瘤坏死因子-α,白细胞介素-6)表示。D.还可加强糖脂受体表示。肠杆菌科讲解第19页①产生菌株及作用肠产毒素性大肠埃希菌(enterotoxigenicE.coli,ETEC)产生耐热肠毒素由质粒编码。STb与人类疾病无关

。②STa性质:

A.低分子量多肽;B热稳定(100℃20min不失活)C.免疫原性差。③STa作用机制:与LT-Ⅰ不一样。是经过激活肠黏膜细胞鸟苷环化酶使cGMP水平↑→引发腹泻，细菌产生肠毒素能力与两种Plasmid相关。应该指出是:STa阳性菌株同时产生LT,含有更强致病性。（2）耐热肠毒素a和b（heatstableenterotoxin,STa,STb）肠杆菌科讲解第20页

(3)不耐热肠毒素Ⅰ和Ⅱ（heatlabileenterotoxin,LT-Ⅰ,LT-Ⅱ）①产生菌株及作用肠产毒素性大肠埃希菌(enterotoxigenicE.coli,ETEC)产生耐热肠毒素由质粒编码。LT-Ⅱ与人类疾病无关LT-Ⅰ是引发人类胃肠炎致病物质,在结构和功效上与霍乱弧菌产生肠毒素亲密相关。

②特点:不耐热

③结构:A亚单位(毒素活性部位)B亚单位与肠黏膜上皮细胞表面GM1神经节苷脂结合后,使A亚单位穿过细胞膜与腺苷环化酶作用肠杆菌科讲解第21页

LT-Ⅰ↓小肠上皮C腺苷环化E刺激前列腺素释放和炎症因子↓产生ATP→cAMP↓促进肠粘膜分泌功效深入造成水

↓分丧失引发腹泻④致病作用肠杆菌科讲解第22页

(4)溶血素A在尿路致病性大肠埃希菌所致疾病中有主要作用。肠杆菌科讲解第23页3.侵袭力（1）K-Ag—抗吞噬有抵抗抗体和补体（2）菌毛—帮助细菌粘附于粘膜表面。

4.内毒素5.Ⅲ型分泌系统是一个向真核靶细胞内输送毒性基因产物细菌效应系统。肠杆菌科讲解第24页

（二）所致疾病(一)

1.肠外感染（1）尿路感染—常见有O1、O2、O6、O7、O11、O25、O75，这些大肠埃希菌含有K-Ag（抗吞噬）和菌毛（粘附泌尿道抗冲洗）。（2）败血症—如烧伤引发G-败血症（3）胆囊炎、肺炎以及新生儿或婴幼儿脑膜炎。

肠杆菌科讲解第25页（二）所致疾病(二)

2.胃肠炎（1）产毒素大肠埃希菌(ETEC)引发婴幼儿及旅游者腹泻。（2）致病性大肠埃希菌(EPEC)主要引发婴儿腹泻。（3）侵袭性大肠埃希菌(EIEC)引发较大儿童和成年人腹泻，有时可形成暴发性流行。（4）肠出血性大肠埃希菌(EHEC)：由O157:H7引发腹泻，有2％～7％发展成溶血性尿毒综合征，出现溶血性贫血，血小板降低性紫癜和急性肾衰竭。（5）肠凝聚性大肠埃希菌(EAEC)：成人慢性腹泻，儿童急性腹泻。肠杆菌科讲解第26页

三、微生物学检验法

（一）肠外感染细菌学检验主要指普通大肠埃希菌1.标本采集

视疾病种类不一样而异呼吸系—痰烧伤及化脓感染—脓汁及分泌物尿路感染—尿液菌血症（败血症）—血液N症状—脑脊液胆囊炎—胆汁卫生细菌学—水等肠杆菌科讲解第27页2.检验方法(1)涂片染色检验法除血液标本外,均作。(2)分离培养血平板、SSA、MAC肠杆菌科讲解第28页(3)判定

（1）初步判定

①形态染色特点②菌落特征（EMB、中国蓝、麦康凯)③KIAA.A+-④生化反应初步判定为大肠埃希菌

ïïîïïíì硝酸盐还原+氧化触E+-E、IMVC++--MIU++-肠杆菌科讲解第29页（2）最终判定①触E+②氧化E-③葡⊕或/+乳⊕/迟缓+肌醇-IMVC++--④脲酶-H2S-⑤苯丙脱氨E-⑥硝酸盐还原+⑦动力多+肠杆菌科讲解第30页（二）肠道内感染细菌学检验

ïïïîïïïíì)EaggEC()EHEC()EIEC()EPEC()ETEC(5肠凝聚型大肠埃希菌肠出血性大肠埃希菌肠侵袭性大肠埃希菌肠致病性大肠埃希菌产肠毒素型大肠埃希菌组包含肠杆菌科讲解第31页检验方法标本接种选择培养基挑选可疑菌落判定大肠埃希菌ELISA核酸杂交PCR其它其它分子生物学技术检测不一样类型胃肠炎Ecoli肠毒素毒力因子和血清型等特征肠杆菌科讲解第32页卫生细菌学检验Ecoli随粪便排除污染环境、水源、饮料、食品等检测样品中Ecoli间接表明肠道致病菌污染大肠菌群指数每1000ml(g)样品中大肠菌群数。大肠菌群系指在37℃24h内发酵乳糖产酸产气需氧和兼性厌氧肠道杆菌。包含埃希菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属及肠杆菌属。我国卫生标准要求:饮水＜3个/L汽水果汁＜5个/L肠杆菌科讲解第33页防治标准1.疫苗免疫预防正在研究中。2.抗生素治疗要在药敏试验指导下进行。3.尿道插管和膀胱镜检验应无菌操作。4.腹泻病人应进行隔离治疗,及时校正水和电解质平衡。5.采取办法降低医院感染。6.保持高卫生标准,降低接触引发胃肠炎大肠埃希菌菌株危险。7.污染水和食品是肠产毒素性大肠埃希菌(ETEC)主要传输媒介;肠出血性大肠埃希菌(EHEC)常由污染肉类和未消毒牛奶引发。要充分烹饪。肠杆菌科讲解第34页

第二节

志贺菌属（Shigella）

志贺菌属痢疾志贺菌（S.dysentriae）福氏志贺菌(S.flexneri)鲍氏志贺菌(S.boydii)宋内志贺菌(S.sonnei)肠杆菌科讲解第35页一、生物学性状

（一）形态与染色从形态学上看，志贺菌属与普通肠杆菌科细菌无显著区分。突出点是无鞭毛不能运动。1.G-短小杆菌2.无特殊结构3.有菌毛肠杆菌科讲解第36页

（二）培养特点

1.营养要求不高，可在普通培养基上生长。2.普通琼脂平板光滑、湿润、圆形凸起，无色半透明，边缘整齐，中等大小菌落。

3.在肠道选择性培养基上，为不发酵乳糖菌落值得提出是，宋内志贺菌培养48h后可转为乳糖发酵菌落。也常出现扁平粗糙型菌落

肠杆菌科讲解第37页

SSA肠杆菌科讲解第38页（三）生化反应

较为复杂

葡萄糖、MR阳性

尿乳蔗枸赖脱，V-P、H2S均阴性

SSA无色半透明菌落克氏双糖铁斜面粉红,底层黄+肠杆菌科讲解第39页IMVC肠杆菌科讲解第40页（四）Ag结构及分类

1.Ag结构

特点——无H-Ag（1）O-Ag——是分类依据①型特异性Ag②群特异性Ag肠杆菌科讲解第41页（2）K-Ag肠杆菌科讲解第42页2.分类依据O-Ag不一样将shigella分为4个群(P122，表7-12)

-肠杆菌科讲解第43页我国福氏最多，宋内次之。南方鲍氏也不少。

A群:即痢疾志贺菌有12个血清型①均不发酵甘露醇②无鸟氨酸脱羧酶③与其它各群无血清学关系④我国常见为2型，又叫舒密志贺菌（西藏），I（靛基质）+，其它型-

B群又叫福氏菌群有6个血清型,2个变种(X、Y)其特点：①分解甘露醇②无鸟氨酸脱羧酶-③Ag结构较复杂，各型间有交叉Ag肠杆菌科讲解第44页

C群又叫鲍氏菌群，有18个血清型其特点：①分解甘露醇②鸟氨酸脱羧酶-③各型间无交叉Ag

D群又叫宋内菌群，只有一个血清型其特点：①分解甘露醇②鸟氨酸脱羧酶+③迟缓分解乳糖④本群菌有光滑型（S）和粗糙型（R）两种肠杆菌科讲解第45页较其它肠杆菌科细菌弱

。（五）抵抗力1.不耐热60℃10min即可杀死2.对普通消毒剂敏感3.耐4~8种药品肠杆菌科讲解第46页

二、致病性与免疫性

（一）致病物质

1.侵袭力

2.内毒素

3.外毒素肠杆菌科讲解第47页派伊尔淋巴结M细胞经过Ⅲ型分泌系统向上皮细胞和巨噬细胞分泌4种蛋白志贺菌IpaAIpaB黏附并侵入IpaCIpaD诱导细胞膜凹陷造成细菌内吞志贺菌溶解吞噬小泡进入细胞质内繁殖宿主细胞内肌动纤维重排,推进细菌进入毗邻细胞细胞到细胞传输①细菌逃避了免疫去除作用而得到了本身保护②经过诱导细胞程序性死亡从吞噬中得到了存活③引发白细胞介素-1β释放吸引多形核白细胞到感染组织肠壁完整性破坏④细菌抵达较深层上皮细胞,加速了细菌扩散1.侵袭力

作用肠杆菌科讲解第48页2.内毒素内毒素肠黏膜通透性内毒素吸收促进发热神志障碍中毒性休克作用内毒素肠黏膜破坏炎症溃疡形成经典脓血黏液便内毒素肠壁自主神经系统作用于肠功效紊乱肠蠕动失调和痉挛肤痛里急后重肠杆菌科讲解第49页3.外毒素其功能同肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagicE.coli,EHEC),引发上皮细胞微绒毛破坏。①产生菌株及功效A群志贺菌(痢疾志贺菌)Ⅰ型和Ⅱ型可产生志贺外毒素。肠杆菌科讲解第50页②结构及作用A亚单位可裂解60S核糖体亚单位28SrRNA阻止与氨酰tRNA结合,终止蛋白质合成。Stx由1个A亚单位和5个B亚单位成。B亚单位与宿主细胞特异性糖脂受体结合(肠绒毛和肾上皮细胞都有高浓度糖脂受体)毒素作用:损伤上皮细胞。个别病人志贺毒素可介导肾小球内皮细胞损伤,造成溶血性尿毒综合征(HUS)肠杆菌科讲解第51页急性、亚急性、慢性菌痢，急性最常见，中毒性痢疾。（二）所致疾病肠杆菌科讲解第52页(三)免疫性病后,在血液中可产生循环抗体,此抗体无保护作用。其抗感染免疫主要是消化道黏膜表面分泌型IgA(SIgA)。病后免疫期短,不巩固。其原因:1.感染只停留在肠壁局部。2.型别多。肠杆菌科讲解第53页三、微生物学检验法

（一）标本采集1.用无菌棉拭取病人新排出粪便粘液或脓血便。2.无便者，用无菌棉拭从肛门或直肠直接取。3.对昏迷病人、不排便者——灌肠。4.慢性患者——用直肠镜。

肠杆菌科讲解第54页注意事项：1.用药前采集标本2.要快（要马上送检）最好1h内或床边接种3.取材不要粪尿相混（本菌怕酸）4.如不能马上送检者，马上用3%甘油盐水保留液，远道可放在冰壶中

肠杆菌科讲解第55页（二）检验程序

肠杆菌科讲解第56页（三）检验方法

1.分离培养SSA及MacConkey——无色透明中等大菌落2.初步判定

（1）试探性玻片凝集先用志贺菌属多价诊疗血清→再用单价血清（2）初步生化反应KIA、MIU

KIA MIU 抗血清斜面 底层 气体 H2S动力 吲哚 脲酶 多价 单价- + -/+ - - +/- - + +肠杆菌科讲解第57页

3.最终判定

（1）生化反应,除KIA、MIU外，甘露醇（+/-）、蔗糖（-/+）、C（-）、苯丙氨酸脱氨酶（-）、ONPG（β-半乳糖苷酶）（-）、鸟氨酸脱羧酶（-）（宋内+）(2)血清学判定：生化特点符合,且多价、单价血清均呈阳性者，应转入分型判定。肠杆菌科讲解第58页测定志贺菌侵袭力可用Sereny试验豚鼠眼结膜试验另一只眼用大肠埃希菌作对照

4.毒力试验受试18~24h培养物接种结囊内发生结膜炎Sereny试验阳性表明受试菌有侵袭力志贺毒素测定HeLa细胞Vero细胞PCR直接检测其毒素基因stxA和stxB肠杆菌科讲解第59页（1）免疫荧光菌球法——特异性较强（2）免疫染色法(3)协同凝集试验(4)胶乳凝集试验(5)分子生物学方法5.快速检验法肠杆菌科讲解第60页

第三节沙门菌属（Salmonella）动物致病沙门菌从对人引发疾病角度

本属代表菌——伤寒沙门菌（S.typhi）。

引发肠热症副伤寒沙门菌伤寒沙门菌人致病菌ïïîïïíìïïþïïýüBparatyphi.S(A)typhi.S(毒污染乳肉蛋引发食物中肠炎沙门菌猪霍乱沙门菌鼠伤寒沙门菌人畜共患ïîïíìïþïýü-)senteritidi.S()suischolera.S()mtyphimuriu.S(c肠杆菌科讲解第61页

一、生物学性状

（一）形态与染色

基本同E.coli1.G-细长中杆菌2.无芽胞、无荚膜，除雏白痢沙门菌和鸡沙门菌外均含有周身鞭毛3.多数菌株有菌毛

肠杆菌科讲解第62页（二）培养特点

3.生长现象（1）普通琼脂平板圆形，无色半透明，光滑湿润，边缘整，粗糙型表面干燥边缘不整（呈锯齿状）。

(2)产生H2S细菌在SSA上形成带黑心菌落。肠杆菌科讲解第63页肠杆菌科讲解第64页肠杆菌科讲解第65页

（三）生化反应

1.沙门菌与大肠埃希菌区分

乳蔗I

E.coli⊕⊕+Salmonella---

尿素

Proteus+Salmonella-

葡

麦

甘

鼠

鸟C（柠）

其它沙门菌

⊕⊕⊕⊕/-++/-

伤寒沙门菌+++---/+3.伤寒沙门菌与其它沙门菌主要区分

2.沙门菌与变形杆菌区分

4.依据生化反应，沙门菌属分为6个亚属肠杆菌科讲解第66页肠杆菌科讲解第67页IMVC肠杆菌科讲解第68页

（四）Ag结构及分类

1.菌体（O）Ag（1）组成

就是细胞壁脂多糖

（2）性质较稳定（3）成份依据O-Ag组成成份不一样，共有58种，用阿拉伯字母1、2、3……表示，当前已排至67，其中有9个数码被删去，故数字不是连续。而且将含有相同成份沙门菌都归为一群（即每群都有它共同Ag），这么使种沙门菌归为A、B、C、D、E、F、I……一直至Z，在以O51～O67群表示(4）O-Ag→机体→产生IgM型AbO-Ag与O-Ab呈颗粒状凝集îíì石炭酸破坏不被酒精可达耐热、②h5.2℃，100①肠杆菌科讲解第69页2.鞭毛（H）Ag（1）组成——Pr（2）性质不稳定

（3）含有鞭毛细菌经甲醛固定后即制成H-Ag，因为H-Ag将O-Ag遮盖，故O-Ag不能再与O-Ab发生凝集（4）H-Ag→机体→产生IgG型AbH-Ag与H-Ab呈絮状凝集

肠杆菌科讲解第70页（5）H-Ag分两相

同时含有两相H-Ag叫双相菌仅有一相H-Ag，叫单相菌

3.表面Ag当前已证实，本属细菌中个别血清型具有Vi-Ag、M-Ag和5Ag三种表面Ag。

ïïïîïïïíì¼¼-¼¼¼¼)7(4,3,12,，70)117P,117(zz,z,z，z)(zd,c,b,a，，65321种以上当前有表示伯字母几个沙门菌共有。用阿拉第二相又叫非特异相各种当前有表见表示以后则用小写直至表示用小写特异性高第一相又叫特异相,肠杆菌科讲解第71页（五）抵抗力

本属细菌在自然界中生活能力较强，仅次于大肠埃希菌，在土壤、水中可活几周~几个月，在粪便中可活较长时间。1.耐冷不耐热

2.易被普通消毒剂杀死

3.胆盐、煌绿及其它染料对沙门菌抑制作用较其它肠道菌为小。

肠杆菌科讲解第72页

二、致病性和免疫性

1.侵袭力

有Vi-Ag伤寒沙门菌比无Vi-Ag者要强得多。2.内毒素3.有些菌型尚能产生肠毒素（如鼠伤寒沙门菌），其性质类似产毒素大肠埃希菌。

（一）致病物质肠杆菌科讲解第73页派伊尔淋巴结M细胞经过两个Ⅲ型分泌系统沙门菌黏附并侵入诱导细胞膜凹陷造成细菌内吞沙门菌溶解吞噬小泡进入细胞质内繁殖细胞到细胞传输造成宿主细胞死亡1.侵袭力

繁殖输送外源性Ag到其下方巨噬细胞沙门菌致病岛Ⅰ(SPIⅠ)沙门菌致病岛Ⅱ(SPIⅡ)沙门菌侵袭蛋白向M细胞宿主细胞内肌动纤维重排细菌扩散并进入毗邻细胞淋巴组织含有耐酸应答基因使细菌在胃和吞噬体酸性环境得到保护氧化酶、超氧化物歧化酶保护细菌不被胞内杀菌原因杀伤伤寒沙门菌希氏沙门菌Vi抗原抗吞噬,阻挡抗体、补体肠杆菌科讲解第74页2.内毒素沙门菌死亡后释放内毒素引发宿主KT,WBC大剂量造成中毒症状和休克激活补体替换路径产生C3a、C5a等诱发免疫细胞、分泌TNF-α、IL-1、IFN-γ等细胞因子肠杆菌科讲解第75页（二）所致疾病

1.伤寒、副伤寒沙门菌－肠热症2.食物中毒（急性胃肠炎）3.败血症

炎症出血性坏死4.无症状带菌者肠杆菌科讲解第76页

三、微生物学检验法

（一）细菌学检验

1.标本采集

（1）肠热症：1血2便3检尿，要检骨髓全知道

（2）食物中毒：呕吐物、可疑食物、粪便（3）其它标本

：胆汁、脑脊液、胸腹水，应离心后沉淀，供培养用；中耳分泌物、渗出液、脓液、咽喉、阴道等可用拭子采集。注意事项：病晚期或用药，阳性率↓

病早期阳性率不高肠杆菌科讲解第77页①采集时机②用药前③新鲜标本，马上送检（如不能马上送检应保留在冰箱、冰壶内，但不得超出2h）④血液标本应在出现症状后尽早静脉采血5ml。肠杆菌科讲解第78页2.检验方法

（1）分离培养与增菌培养①增菌培养îíì孔雀绿氯化镁四硫磺酸盐普通沙门菌亚硒酸盐甲副伤寒增菌液不一样沙门菌应选择不一样－、：－、温度选择伤寒－37℃其它沙门菌－40～43℃为好②

ïïîïïíìîíì--îíì麦康凯中国蓝产选择亚硫酸铋琼脂琼脂强选择种各选培养基一次一次次进行分离培养、、EMB、HE.SSA)1(h48h24~162肠杆菌科讲解第79页（2）初步判定-主要依据是生化和血清学两个方面①菌落特点：从选择性培养基上挑选菌落是一个主要步骤，稍一疏忽则易遗漏a.菌落以无色、光滑、较透明、扁平为主要特征，大小则往往不一。b.EMB-靠近大肠埃希菌者可呈深蓝色c.SSA-产生H2S者带黑心d.对可疑菌落用笔圈出（便于复查）②生化判定

凡可疑之每型菌落均要挑取1~2个，分别接种于KIA和MIU。

肠杆菌科讲解第80页本属内细菌判定

肠杆菌科讲解第81页先用A~F群多价O诊疗血清做玻片凝集试验盐水+无效（S→R相关）盐水-多价O血清+沙门菌盐水-多价O血清-生化反应不经典－阴性生化反应经典－Vi-AgcH若H2S+葡⊕尿素-→初步考虑（3）最终判定①全方面生化反应→îíì枸橼酸菌属沙门菌亚属Ⅰ、Ⅲ肠杆菌科讲解第82页②血清学判定a.先用A~F群多价O血清做玻片凝集T-确定是否是在A~F群内（因95%以上沙门菌均属A~F群）b.再分别用代表6个O群单价因子血清做玻片凝集T进行分群

c.再用鞭毛Ag确定菌种

肠杆菌科讲解第83页4.判定依据

（1）沙门菌判定主要靠

（2）血清型确实定

（3）检验过程中必须配合形态与染色检验，以排除肠球菌和其它肠道内细菌（4）也可用噬菌体判定

ïîïíì生化反应综合判定式相同菌株则需借助对于型相结合综合决定其血清相和第H因子血清第血清决定定群Ag③ⅡⅠ②①O肠杆菌科讲解第84页（二）血清学检验——肥达（Widal）反应

1.原理

人患伤寒、副伤寒后，普通于1~2周后在血清中出现特异性Ab（凝集素），3、4、5周后达高峰，以后迟缓下降。依据此道理，用已知伤寒沙门菌TO、TH和副伤寒PA、PB、PC菌液做Ag，与病人血清做凝集反应来测定病人血清中有没有对应特异性抗体定量凝集试验。依据抗体凝集价增加情况，以做伤寒、副伤寒辅助诊疗。

2.方法——试验课做。

肠杆菌科讲解第85页3.结果判断必须结果临床、病期及地域而定（1）效价地域性（2）注意病程（3）相关TH与TO改变评价①出现速度②交叉反应或非特异性回想反应（4）注意区分非特异性回想反应

肠杆菌科讲解第86页

本菌在自然界中分布很广，主要存在于饮水、污水中。在动物中存在于家畜、家禽、鼠、鸽、蛙、蜗牛和虾蟹排泄物中。在食品（乳、乳制品、蛋、肉、冰琪淋等）常检出。猪是带菌者。经苍蝇、蚤、蟑螂、蜚蠊带菌等媒介传输，为人兽共患病原菌之一。(三)致病性肠杆菌科讲解第87页第四节其他菌属

一、克雷伯菌属（Klebsiella）

肺炎克雷伯菌菌属(K·pneumonia)

产酸（催娩）克雷伯菌

(K·oxytoca)

解尿氨酸克雷伯菌(K·ornithinolytica)植生克雷伯菌(K·planticola)土生克雷伯菌(K·terrigena)臭鼻克雷伯菌(K·ozaenae)鼻硬结克雷伯菌(K·rhinoscleromatis)

本属菌包含7个种肠杆菌科讲解第88页本属细菌符合肠杆菌科普通特征。其属共同特征为：1.G—短杆菌，无芽胞，无鞭毛有荚膜2.营养要求不高普通培养基即可生长3.生化反应较活泼（1）可发酵各种糖类葡

乳

麦

甘

蔗

其它糖醇（阿拉伯、木、棉子、海藻、阿糖醇）⊕+++++（2）触酶

氧化E脂EH2S明胶

硝酸盐

尿素V-PONPG肌醇+－

－

－

－+++++4.均为周围环境及人呼吸道常居菌群，为条件致病菌，当前引发感染日益增多。其代表菌为肺炎克雷伯菌。

共同特征肠杆菌科讲解第89页(一)生物学性状

肺炎克雷伯菌1.形态与染色（1）G-卵圆或球杆菌，常成双排列（2）菌体外绕以宽厚荚膜（3）无芽胞、无鞭毛、无动力、有菌毛（4）培养物菌体长，常呈多形性，有时可见丝状物肠杆菌科讲解第90页肠杆菌科讲解第91页2.培养特点（1）需O2或兼性厌O2（2）对营养要求不高，普通培养基即可生长（3）在普通琼脂和血平板

灰白色、圆形、光亮较大凸起,粘液状，菌落易相互融合，用接种环挑易拉成丝状较大菌落。（4）在肠道选择培养基上呈乳糖发酵产酸菌落，与大肠埃希菌相同但色泽较淡，较为饱满而凸起。（5）液体培养基——混浊生长、农厚，有菌膜，管底有粘液性沉淀。

35℃

24h肠杆菌科讲解第92页肠杆菌科讲解第93页（6）生化反应本菌IMVC－－++，其它，如丙二酸盐+（7）Ag结构O、K两种AgK-Ag为分型依据（8）抵抗力不强

对普通消毒剂敏感对热敏感56-60℃即死对普通抗生素均敏感，但易产生抗药性肠杆菌科讲解第94页

(二)临床意义

本属细菌多感染重病老人及幼儿，死亡率很高。也是医院感染常见菌。

肠杆菌科讲解第95页二、变形杆菌属（Protens）

普通变形杆菌（P.vulgaris）变形杆菌属奇异变形杆菌（P.mirabili产粘变形杆菌（P.myxofaciens）潘纳变形杆菌（P.penneri）（一）生物学性状1.形态与染色（1）G-中小杆菌，菌端钝圆（2）无芽胞、无荚膜、周身鞭毛，运动活泼。（3）含有显著多形性，多呈球状或丝状，在活泼运动培养物中多为较长而弯曲杆菌。

肠杆菌科讲解第96页肠杆菌科讲解第97页2.培养特点（1）需O2，或兼性厌O2。（2）营养要求不高，在普通或综合培养基上均可发育，但大部分需要菸草酸（3）有迁徒状生长现象（movinggrow）。

（4）产粘变形杆菌能形成很粘薄膜层，且能溶血。（5）在肠道选择性培养基上可形成圆、扁、无色半透明乳糖不发酵菌落。在SSA上-产H2S菌株菌落带黑心（6）液体培养基—均匀混浊，液面有菌膜、管底有沉淀。肠杆菌科讲解第98页肠杆菌科讲解第99页3.生化反应

共同点：

肠杆菌科讲解第100页4.Ag结构与分型

Ag结构与分型依据菌体（0）Ag分群依据鞭毛（H）分型每种变形杆菌都分许多血清型。产粘变形杆菌Ag结构还未测定当前有100多个血清型肠杆菌科讲解第101页这里值提出是：在普通变形杆菌与奇异变形杆菌二类中还有些特殊菌株OX19、OX2、OXK与一些立克次体有共同抗原成份，故可代替立克次体作为抗原与一些立克次体病患者血清作凝集反应，以辅助诊疗一些立克次体病，此称为外-斐（Weill-felix）反应.肠杆菌科讲解第102页（二）致病性变形杆菌属细菌普通不致病，但在一定条件下有