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马立克病的实验室诊疗琼扩试验马立克病的实验室诊疗琼扩试验第1页掌握鸡马立克病试验室诊疗方法实训目标马立克病的实验室诊疗琼扩试验第2页10×100mm试管若干只、玻璃棒（直径6～8mm、圆头长约16cm）4～6只。胶头吸管18～20只、烧杯或搪瓷缸4～6个，玻璃平皿、精制琼脂粉、打孔器（直径3mm和6mm）、8%pH7.2～7.4钠、钾磷酸盐缓冲液、标准抗原、阳性血清等仪器材料马立克病的实验室诊疗琼扩试验第3页方法步骤（一）1%琼脂平板制备（二）加样（三）反应（四）结果分析马立克病的实验室诊疗琼扩试验第4页（一）1%琼脂平板制备制板：用8～10%氯化钠溶液配制1%琼脂溶液，电炉加热使充分溶化后，倒入直径90mm培养皿，制成厚度为2.5～3mm琼脂平板；平置，在室温下冷却凝固后打孔。打孔：在琼脂板上按7孔一组梅花形打孔（中间1孔，周围6孔），孔径5mm，孔距2～5mm，将孔内琼脂用针头斜面向上轻轻将琼脂挑出，勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。封底：用酒精灯轻烤平皿底部至微烫，封闭孔底部，以防侧漏。编号：将周围孔编号1～6马立克病的实验室诊疗琼扩试验第5页（二）加样1．检测羽髓中马立克病病毒抗原（MDV抗原）向中央孔加MD阳性血清向周围1、4孔加标准MD琼扩抗原向周围2、3、5、6孔加待检羽髓浸提液，选拔受检鸡含羽髓丰满羽毛数根（幼鸡8根以上，成鸡3～5根），将带有羽髓毛根剪集于试管内，每管滴加2～3滴生理盐水，用玻璃棒将羽毛根压集于管底，以适当压力转动玻棒10屡次，待浸提液充分浑浊后，倾斜试管，以玻棒引流将浸提液导至管口，另一人用吸管将之移加入该孔内。马立克病的实验室诊疗琼扩试验第6页2．检测血清抗体（被检鸡血清）向中央孔滴加标准琼扩抗原向周围孔滴加待检血清和有一孔加阳性血清均以加满而不溢出为度马立克病的实验室诊疗琼扩试验第7页将加样后琼脂平皿加盖后倒置平放于加盖湿盒内，置37℃温箱中孵育，8～24h内观察并统计结果。（三）反应马立克病的实验室诊疗琼扩试验第8页被检样品孔与中心孔之间形成清楚沉淀线，并与周围已知抗原和阳性血清孔沉淀线相互融合者，判为阳性不出现沉淀线判为阴性；已知抗原与阳性血清之间所产生沉淀线末端变向被检样品孔内侧时，则该被检样品判为弱阳性。有被检材料可能会出现两条以上沉淀线，其中一条与已知抗原——阳性血清沉淀性融合者，仍判为阳性。（四）结果分析马立克病的实验室诊疗琼扩试验第9页上述方法可用于20日龄以上鸡羽髓MDV抗原检测和1月龄以上鸡血清抗体检测（五）注意事项马立克病的实验室诊疗琼

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