果蝇唾腺染色体的制片与观察

果蝇唾腺染色体的制片与观察果蝇唾腺染色体的制片与观察第1页一、试验目标1.了解唾腺CS特点2.学习分离唾腺技术3.掌握唾腺CS制片方法果蝇唾腺染色体的制片与观察第2页二、试验原理永久间期CS复制而不分开体细胞联会横纹结构果蝇唾腺染色体的制片与观察第3页果蝇唾腺染色体特点：1.巨大染色体：这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约400um，相当于普通染色体100—150倍，因而又称为巨大染色体。果蝇唾腺染色体的制片与观察第4页2.多线染色体：果蝇唾腺细胞停顿在分裂间期（永久间期），染色体核蛋白纤维不停复制，平行排列形成巨大而伸展多线染色体唾腺染色体经过屡次复制而并不分开，每条染色体大约有1000—4000根染色体丝拷贝，所以又称多线染色体(polytenechromosome)。果蝇唾腺染色体的制片与观察第5页2.体联会：类似有丝分裂中同源染色体联会。因为同源染色体紧密配对几乎相互融合，使果蝇唾腺染色体只有二倍体染色体数目标单元数。果蝇唾腺染色体的制片与观察第6页3.横纹结构：染色体上有横纹结构，这些横纹数目和位置往往是恒定，代表着果蝇等昆虫种特征；可用于基因定位；4.Puff结构：幼虫不一样发育期，浓缩染色质纤维会成群解旋、松开，形成泡状涣散结构，使对应基因得以表示，这种泡状结构称Puff结构，亦称染色体疏松。果蝇唾腺染色体的制片与观察第7页三、试验材料、器具、药品试剂大果蝇(D.virilis)活体三龄幼虫解剖镜,显微镜,培养箱;培养瓶,解剖针,镊子,载片,盖片,吸水纸0.7％NaCl,1molHCl;醋酸洋红;培养基果蝇唾腺染色体的制片与观察第8页四、试验步骤1.

三龄幼虫培养

营养丰富

1518℃

肥大,大唾腺果蝇唾腺染色体的制片与观察第9页培养要求①饲料松软,含水量较高,营养丰富,发酵良好②追加酵母液③控制幼虫密度④低温培养果蝇唾腺染色体的制片与观察第10页2.解剖幼虫肥大幼虫,洗去杂物1d0.7%NaCl左手持解剖针压住虫体后端1/3处,右手持针扎住头部,适当用力向前拉,唾腺随头部拉出果蝇唾腺染色体的制片与观察第11页果蝇唾腺染色体的制片与观察第12页唾液腺解剖针解剖针果蝇唾腺染色体的制片与观察第13页唾液腺头部口器脂肪带挑出唾液腺果蝇唾腺染色体的制片与观察第14页唾腺肠道唾腺与肠道区分头尾唾腺果蝇唾腺染色体的制片与观察第15页注意:剥离过程中,不能让载片上生理盐水干涸果蝇唾腺染色体的制片与观察第16页剔除脂肪果蝇唾腺染色体的制片与观察第17页3.解离和染色剥离唾腺置载片中央,加一滴HCl,解离23吸去HCl,冲洗23次,吸干;加1d染液,染色5果蝇唾腺染色体的制片与观察第18页4.压片及观察载片置平整处,加盖片,轻敲;压片低倍至高倍镜检果蝇唾腺染色体的制片与观察第19页果蝇唾腺染色体的制片与观察第20页果蝇唾腺染色体的制片与观察第21页五、注意事项1.水不可太多,不然幼虫会漂浮而且活跃2.一定加生理盐水,不然唾腺易干3.将脂肪组织去除洁净4.吸水时勿将唾腺一起吸走5.染色时间不可过长,不然背景也着色6.压片时要揉,用力要均匀果蝇唾腺染色体的制片与观察第22页六、作业1.制效果很好唾腺CS暂时片1-2张2.真实绘制观察到唾腺CS绘图3.思索题P661-2果蝇唾腺染色体的制片与观察第23页操作步骤幼虫→清