抗肿瘤药的药效

抗肿瘤药的药效抗肿瘤药的药效第1页2

抗肿瘤新药主要

药效学和毒理学研究李波中国药品生物制品检定所国家药品安全评价监测中心抗肿瘤药的药效第2页3

新药开发过程$600millions6to12YearsDrugDiscoveryNon-ClinicalDevelopment

ClinicalTrialsPhaseIIIPhaseIIPhaseIMarketLaunchCSFHDPDSubmissionamToxicology/ADME抗肿瘤药的药效第3页4抗肿瘤药品分类(1)细胞毒类药品(cytotoxicagent)：包含干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统药品等(2)

生物反应调整剂(biologicalresponsemodifier)(3)

肿瘤耐药逆转剂(resistancereversalagent)(4)

肿瘤治疗增敏剂(oncotherapysensitizer)(5)

肿瘤血管生成抑制剂(tumorangiogenesisinhibitor)(6)

分化诱导剂(differentiationinducingagent)(7)生长因子抑制剂(growthfactorinhibitor)(8)反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide)

抗肿瘤药的药效第4页5抗肿瘤药品药效学包含体外抗肿瘤试验，体内抗肿瘤试验评价药品抗癌活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确结论。I类抗肿瘤新药应进行药品作用机制初步研究。

抗肿瘤药的药效第5页6体外抗肿瘤活性试验试验目标

对候选化合物进行初步筛选了解候选化合物抗瘤谱为随即进行体内抗肿瘤试验提供参考，如剂量范围、肿瘤类别等

抗肿瘤药的药效第6页7

试验方法选取10-15株人癌细胞株依据试验目标选择对应细胞系及适量细胞接种浓度，按常规细胞培养法进行培养推荐使用四氮唑盐MTT还原法、XTT还原法、磺酰罗丹明B(SRB)染色法、或51Cr释放试验、集落形成法等测定药品抗癌作用。药品与细胞共培养时间普通为48-72小时，贴壁细胞需先贴壁24小时后再给药。试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照。

抗肿瘤药的药效第7页8测定细胞生长和存活方法MTT法和XTT法是代谢测定法，没有颜色tetrazoliumsalt(MTT和XTT)被细胞还原，产生含有颜色与活细胞数成百分比formazan，比色测定。为了简化MTTsolubilization步骤，发展了XTTtetrazolium测定方法，MTT还原产生不溶性formazan,比色测定前溶解于DMSO，XTT试剂可被活细胞直接代谢成水溶性formazan，不需深入处理培养细胞，便能够马上读取光密度。方便简单，其缺点是可产生相对比较高背景数据，同时也含有MTT不稳定终点特征。

抗肿瘤药的药效第8页9测定细胞生长和存活方法对系列蛋白质染色剂进行试验，发觉磺酰罗丹明B（sulforhodamineB）(SRB)可替换tetrazoliumassay方法，含有最好燃料结合强度，信噪比率，而且和细胞数含有很好线形关系，SRB是一亮粉色染料，在稀醋酸中，可结合于TCA固定细胞碱性氨基酸上。含有十分稳定终点。抗肿瘤药的药效第9页10

评价标准以同一样品不一样浓度对肿瘤细胞抑制率作图可得到剂量效应曲线采取Logit法计算半数有效浓度(IC50值或EC50值)。体外试验最少重复一次。抗肿瘤药的药效第10页11体内抗肿瘤试验体内抗肿瘤试验必须选取三种以上肿瘤模型动物肿瘤移植模型人类肿瘤裸鼠移植瘤模型重复试验勉励使用人类肿瘤裸鼠移植瘤模型和各种类移植瘤模型、原位接种模型和中空纤维测定(hollow-fiberassay)等方法。抗肿瘤药的药效第11页12

动物动物要求健康，符合等级动物要求，有试验动物合格证。雌雄均可，但同一批试验中动物性别必须相同。小鼠鼠龄为5-6周，体重为18-22克。评价同一物质活性时，不一样批次试验必须采取同一品系小鼠。

抗肿瘤药的药效第12页13肿瘤模型小鼠肿瘤模型

淋巴细胞白血病腹水瘤L1210和P388、白血病L-615、宫颈癌U14、肝癌H22、Lewis肺癌、黑色素瘤B16、网织细胞瘤M5076、肠癌26、肠腺癌38、乳腺癌CD8F1、艾氏腹水瘤（EAC）、肉瘤-180等，以及各种小鼠肿瘤亚型和耐药株等。

抗肿瘤药的药效第13页14肿瘤模型人类肿瘤裸鼠移植模型

应选取体外试验敏感细胞株进行体内抗人类肿瘤裸鼠移植试验。

抗肿瘤药的药效第14页15缺点个别模型极难构建，皮下抑制肿瘤极少转移，生存时间不适合作为试验终点优点可预测细胞毒类化合物活性有利于筛选化合物，为临床用药程序和联适用药方案提供参考可用于研究取得性药品抗性人癌移植模型抗肿瘤药的药效第15页16人癌移植模型NCI回顾性研究：多个人癌移植模型试验阳性结果可在一定程度上提醒临床有效性非小细胞肺癌移植模型含有临床相关性

通常移植临床拟治疗肿瘤细胞抗肿瘤药的药效第16页17人类肿瘤裸鼠移植模型建立时注意点

移植瘤普通由对应细胞株移植而建立，对细胞株和移植瘤化疗敏感性应予了解。移植瘤复苏后普通应传2-3代后再用于体内抗肿瘤试验。对模型生长情况应全方面了解，尤其是生长快模型为了保持移植瘤生物学特征和遗传特征，复苏后移植瘤体内传代应少于

15-20代

抗肿瘤药的药效第17页18人类肿瘤裸鼠移植模型建立时注意点细胞要求到达最低质量确保标准（支原体、MAP、人类同功酶、核型和体内致瘤性检验）、适应同一培养液以及含有可重复生长和药品敏感特征。制备大量保种细胞，并冷冻保留，用于药品筛选过程中细胞经20代传代后替换。全部细胞在筛选过程中均要进行详细特征确认，如组织病理、超微结构、免疫细胞化学，以确定和证实组织和肿瘤类型。

抗肿瘤药的药效第18页19肿瘤模型产生免疫原性表现近交系动物遗传特征发生漂移，对肿瘤模型产生免疫性。产生免疫性表现有：1.在传代和对照组中出现肿瘤消退，假如肿瘤出现溃疡、消退和再生长，可能是感染造成，假如是溃疡、消退，而且不再生长，通常是因为免疫原性引发。假如用60mg同种肿瘤攻击动物，结果没有生长，基础能够必定产生了免疫性。抗肿瘤药的药效第19页20肿瘤模型产生免疫原性表现2.在化疗试验中有大于2个剂量水平治愈时，应怀疑有免疫原性在起作用。3.在生命延长久试验中，存活动物生命延长增加百分率应小于250%，假如大于250%应怀疑有免疫原性在起作用。4.缺乏显著侵袭性和转移，可能是因为肿瘤恶性程度比较低，也可能是因为免疫性问题造成。抗肿瘤药的药效第20页21肿瘤模型产生免疫原性表现5.对药品反应性改变表明免疫原性形成。6.肿瘤在后期阶段比早期阶段反应更加好，必定表明是免疫性参加，对于均质性肿瘤模型而言，开始给药时间越早，肿瘤反应越好，免疫反应要经反抗原识别和处理后才能产生。给予小鼠两次用X-射线杀死肿瘤细胞，间隔10天，再10天后，给处理和没有处理小鼠移植活肿瘤细胞，检测免疫性产生是一个很好方法，费时、费劲。抗肿瘤药的药效第21页22试验过程肿瘤接种方法皮下接种腹腔接种原位接种

抗肿瘤药的药效第22页23皮下肿瘤模型选择肿瘤生长旺盛且无溃破荷瘤小鼠，颈椎脱臼处死，在无菌条件下（超净台或接种罩），用碘酒、酒精或新洁尔灭消毒动物皮肤，切开皮肤，剥离肿瘤。将瘤组织剪成1.5mm3左右，用套管针接种于动物一侧或双侧腋窝皮下；或制成细胞悬液，然后按一定百分比加入无菌生理盐水，普通每只小鼠接种肿瘤细胞数量为（1-5）×106。

抗肿瘤药的药效第23页24腹水瘤模型无菌条件下，消毒动物皮肤，吸收生长良好动物腹水，以生理盐水按一定百分比稀释后接种于动物腹腔，接种细胞数量普通为（1-5）×106。抗肿瘤药的药效第24页25原位接种模型原位接种是指未起源于某脏器肿瘤接种在动物某脏器，如将人肝癌接种在裸小鼠肝脏。原位接种不是常规方法，但有其优越性，是勉励使用方法。主要有肺、肝、胃、肠、乳腺、颅内等原位接种方法

抗肿瘤药的药效第25页26试验设计试验设阴性对照组、阳性对照组、治疗组。治疗组设高、中、低三个剂量组。小鼠肿瘤和腹水瘤接种后次日将动物随机分组，裸鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100—300mm3后将动物随机分组。动物数普通小鼠每组10只，裸鼠6只。抗肿瘤药的药效第26页27剂量设置治疗组设高、中、低剂量治疗组，普通按4:2:1设置，高剂量使用最大耐受量或LD10剂量。阴性对照组给予对应溶剂；阳性对照药选取对该动物敏感、临床应用抗肿瘤药品，如受试物为一抗癌药品衍生物或类似物时，必须选取该抗癌药品作为阳性对照药。

抗肿瘤药的药效第27页28阳性对照药选择标准疗效确切与被试物质化学结构类似与被试物质有类似作用机理。抗肿瘤药的药效第28页29药品配制溶于水药品，用生理盐水或蒸馏水配制；如用酸、碱溶解者，可先用小量酸(0.1-0.5NHCl)或碱(NaHCO3、Na2CO3、NaOH)溶解，调整pH在4.5-9.0范围内。用乙醇、丙二醇、吐温80、DMSO助溶药品，或用吐温60、吐温80、2-3%淀粉、0.5%羧甲基纤维素制成混悬液药品，可腹腔注射或口服，但必须设相同浓度溶剂对照组。用注射用花生油配制溶液或乳剂可口服、皮下或肌肉注射。抗肿瘤药的药效第29页30给药方案和给药路径分组当日开始给药，依据不一样药品代谢动力学和毒性反应等确定给药方案。给药路径应与推荐临床用药路径相同。给药次数较多，或被试物质溶解性较差，静脉给药有困难时，可考虑使用腹腔给药，但在评价药效时要注意这两种给药路径是有差异。可采取瘤周、瘤内、肌肉、皮下给药路径。腹水瘤试验时普通不能应用腹腔给药路径。抗肿瘤药的药效第30页31评价标准

腹水瘤模型接种给药后，观察和统计动物死亡时间，计算生存天数。如阴性对照组20%动物存活时间超出4周，表明腹水瘤生长不良，试验作废。抗肿瘤药的药效第31页32评价标准

裸鼠移植瘤模型推荐使用测量瘤径方法，动态观察受试物抗肿瘤效应。肿瘤直径测量次数依据移植瘤生长情况而定，普通为每七天2-3次,每次测量同时还需称鼠重。抗肿瘤药的药效第32页33评价标准肿瘤体积(tumorvolume,TV)计算公式为：V=1/2×a×b2或π/6×a×b×c其中a、b、c分别表示长宽高。两公式相关性极好，可采取任一公式。依据测量结果计算出相对肿瘤体积（relativetumorvolume，RTV），RTV=Vt/V0。其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时肿瘤体积。抗肿瘤药的药效第33页34评价标准抗肿瘤活性评价指标为相对肿瘤增殖率T/C（%） TRTVT/C%=────×100%CRTVTRTV：治疗组RTV；CRTV：阴性对照组RTV。疗效评价标准：T/C%>60%为无效；T/C%≤60（42？）%，并经统计学处理P<0.05为有效。抗肿瘤药的药效第34页35评价标准（小鼠肿瘤模型）生长较慢小鼠肿瘤采取与裸鼠移植瘤一样测量瘤径评价方法。生长较快小鼠肿瘤可采取称瘤重方法评价。试验结束后处死动物，称体重，解剖剥离瘤块，称瘤重。阴性对照组肿瘤平均瘤重小于1克，或20%肿瘤重量小于400毫克，表示肿瘤生长不良，试验作废。抗肿瘤药的药效第35页36评价标准（小鼠肿瘤模型）疗效评价公式：

给药组平均瘤重-阴性对照组平均瘤重肿瘤生长抑制率

=─────────────────

×100%

阴性对照组平均瘤重

评价标准

肿瘤生长抑制率<40%为无效；肿瘤生长抑制率≥40%，并经统计学处理P<0.05为有效

抗肿瘤药的药效第36页37评价标准（原位接种模型）不一样原位接种模型可采取不一样评价方法，主要有瘤重和生存时间评价法。如肝原位接种可用瘤重评价，颅内接种可用生存时间评价。评价方法、标准和注意事项同腹水瘤模型和小鼠肿瘤模型。

抗肿瘤药的药效第37页38抗肿瘤药品特殊要求I类抗肿瘤新药应进行药品作用机制初步研究。非细胞毒类药品除完成体内外抗肿瘤试验，还应进行特定抗肿瘤作用研究。

抗肿瘤药的药效第38页39生物反应调整剂药效学包含：体内抗癌试验和免疫功效研究。体内抗癌试验注意点：模型：裸鼠是免疫缺点动物，普通应用正常免疫鼠肿瘤模型。给药时间：可按常规给药，也可在接种前预先给药，接种后继续给药或停药。肿瘤细胞接种量：可比细胞毒类药品低一个数量级，普通为(1-5)105个瘤细胞/小鼠。给药方法：可单独给药，也可与其它抗肿瘤药品合并使用，观察增效或减毒作用。抗肿瘤药的药效第39页40生物反应调整剂免疫功效试验方法

含有抑瘤作用生物反应调整剂，还需作免疫功效测定,以明确其抑瘤作用是否与免疫功效调控相关。免疫功效测定包含细胞免疫和体液免疫两方面。

抗肿瘤药的药效第40页41生物反应调整剂免疫功效测定巨噬细胞功效测定天然杀伤细胞(naturalkillcell)

测定淋巴细胞转化试验淋巴因子活化杀伤细胞测定(lymphocyte- activatedkillercell)各种细胞因子测定

IL-2、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α等。迟发型超敏反应检测抗肿瘤药的药效第41页42肿瘤耐药逆转剂体外抗耐药活性试验

选择2-3对肿瘤耐药/敏感细胞株，采取MTT法或SRB法测定细胞毒性。普通在无毒剂量或相当于IC10剂量下设三个剂量，并设置对应阳性和阴性对照组。抗肿瘤药的药效第42页43肿瘤耐药逆转剂评价逆转效果用逆转倍数(foldreversal,FR)表示：FR=IC50(不加逆转剂)/IC50(加逆转剂)。注意方面：

耐药株耐药性：耐药株因传代，尤其是撤药后耐药性可改变或消失；试验前必须对试验耐药株进行耐药倍数(FR)测定，确保试验可靠性，若非逆转多药耐药

(MDR)而是逆转单药耐药，则试验瘤株中需有针对该药耐药细胞株抗肿瘤药的药效第43页44肿瘤耐药逆转剂

阳性对照药提议采取维拉帕米

(verapamil)10μM

环孢菌素A(cyclosporinA)3μM。抗肿瘤药的药效第44页45肿瘤耐药逆转剂体内抗肿瘤耐药活性试验

小鼠敏感和对应耐药肿瘤人癌裸鼠敏感和对应耐药移植瘤耐药基因及其表示产物测定

可测定肿瘤细胞内药品浓度改变和耐药基因及其表示产物，初步明确其逆转耐药机制

包含多药耐药基因及其编码蛋白(multidrugresistancegene/p-glycoprotein,Mdr1/Pgp)、多药耐药相关蛋白(multidrugresistance-relatedprotein,MRP)

肺耐药相关蛋白(lungresistance-relatedprotein,LRP)

其它与耐药相关基因/蛋白及酶等。抗肿瘤药的药效第45页46

抗肿瘤转移药品肿瘤是否转移不但依赖于肿瘤细胞本身含有内在转移潜能，而且也取决于机体抗转移原因消长。所以，抗转移药品只有在动物体内模型上才能得出符合实际结果。

抗肿瘤药的药效第46页47抗肿瘤转移药品体外试验

测定候选化合物作用下肿瘤细胞对基底膜侵袭、粘附和肿瘤细胞趋化性运动能力。抗肿瘤药的药效第47页48抗肿瘤转移药品体内试验

模型：小鼠B16黑色素瘤、小鼠Lewis肺癌等和人癌裸鼠移植高转移瘤模型。接种方法：常见静脉注射方法，也可用皮下接种等方法。

抗肿瘤药的药效第48页49抗肿瘤转移药品

评价指标

接种给药后，观察统计动物死亡时间，计算生存天数。试验结束后，称动物体重、肺重、移植瘤重，解剖显微镜下计数肺转移瘤灶、测瘤径(计算肺转移瘤体积)和病理组织学切片观察等；计算转移率

转移抑制率

=1-(治疗组转移率/对照组转移率)×100%。抗肿瘤药的药效第49页50

肿瘤血管生成抑制剂

体外试验

体外试验模型有:人血管内皮细胞模型：人脐静脉血管内皮细胞和人微血管（肺、皮肤等）内皮细胞。血管形成促进因子等刺激细胞DNA合成、增殖、迁移、血管形成(tubeformation)来观察药品抗血管形成作用。如血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)或碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)抗肿瘤药的药效第50页51肿瘤血管生成抑制剂体外试验肿瘤细胞模型：

主要应用我国已建立人实体癌细胞系，确定VEGF、FGF等高分泌细胞株。检测细胞增殖、转移能力及血管形成因子基因表示情况来评价药品。抗肿瘤药的药效第51页52肿瘤血管生成抑制剂

体内试验

血管抑制试验

经典血管形成评价方法有：鸡绒毛膜尿囊和卵黄膜囊（CAM）、啮齿动物虹膜和角膜等。也可用如皮下移植塑料或多孔polytetrafluoroethylene管、皮下移植无菌海绵；一些自然或化学修饰物质如Matrigel和纤维凝胶等用于体内模型。抗肿瘤试验

经过观察新生血管生成抑制剂体内抗肿瘤效应检测移植瘤血管密度、血管生成因子和抑制因子分泌和表示，以及肿瘤转移情况等综合评价肿瘤血管生成抑制剂作用和作用机制。

抗肿瘤药的药效第52页53分化诱导剂分化诱导剂药效学研究包含体外和体内研究模型；当前药品主要能对急性白血病进行有效分化治疗。阳性对照药选取维甲酸类(retinoid)化合物。抗肿瘤药的药效第53页54分化诱导剂体外试验

白血病分化诱导

常见细胞株有些人急性早幼粒白血病细胞株HL-60、NB4细胞、人红白血病K562细胞等。可选择以下试验方法研究并判断结果：四唑氮蓝(NBT)还原试验：对照组细胞还原能力≤10%，候选化合物还原能力>50%细胞形态学观察：可在光学显微镜与电镜下观察候选化合物作用后细胞形态学改变，对照组早幼粒细胞应>90%-95%，候选化合物组细胞分化，成熟粒细胞占百分比越高，说明该化合物分化效果越好

抗肿瘤药的药效第54页55分化诱导剂实体瘤细胞分化诱导

常见细胞株、试验方法及评价标准：人肝癌HepG2、SMMC7721

主要测定细胞甲胎蛋白(AFP)、白蛋白含量，γ-谷氨酸转移酶(γ-GT)、酪氨酸转氨酶

(TAT)活性及观察细胞形态。分化细胞AFP含量、TAT和γ-GT活性显著降低，白蛋白含量增加，细胞胞质增加、核缩小。抗肿瘤药的药效第55页56分化诱导剂体内试验常见人癌细胞小鼠肾囊膜下移植试验、小鼠髓单核细胞白血病试验和人癌细胞裸小鼠移植瘤模型等。可选两种模型，依据肿瘤鼠生存时间、肿瘤体积及形态改变，观察分化诱导效果。重复试验一次

抗肿瘤药的药效第56页57肿瘤治疗增敏剂增敏剂主要是指放射治疗增敏剂，能增加临床上恶性肿瘤放射治疗或其它治疗疗效及降低治疗后复发率。药效学试验分为体外和体内试验：抗肿瘤药的药效第57页58肿瘤治疗增敏剂体外试验

分别选择对放射、化疗药品含有中、低度敏感人肿瘤细胞株，采取MTT、SRB或细胞集落形成方法进行化合物细胞毒性试验，以IC50值作为评价指标。

抗肿瘤药的药效第58页59

肿瘤治疗增敏剂体内试验

选取对射线及化疗药品敏感性较小三种实体瘤模型进行试验，其中最少有一个人癌裸鼠移植瘤模型。由强致癌物或病毒等原因诱发肿瘤，或者不是在同一品系动物身上移植传代肿瘤往往会出现免疫反应，所以都不能用于肿瘤治疗增敏剂研究。疗效评价可参考体内抗肿瘤试验

抗肿瘤药的药效第59页60

抗肿瘤药品安全性评价抗肿瘤药的药效第60页61非临床安全性评价目标药品筛选和临床研究间过渡预测药品在人体中安全性预测药品毒性靶器官和可逆性判断药品是否可进入临床研究为I期临床研究起始剂量和临床研究方案提供参考抗肿瘤药的药效第61页62细胞毒类抗肿瘤药毒性特点骨髓抑制：5-FU，Taxol肝脏毒性:甲氨喋呤，6-巯基嘌呤胃肠道毒性：5-FU，长春新碱肾毒性：顺铂，甲氨喋呤心脏毒性：白消安，阿霉素呼吸系统毒性：甲氨喋呤，环膦酰胺神经毒性：5-FU，Taxol举例：抗肿瘤药的药效第62页63安全性评价主要内容安全性药理学试验急性毒性试验长久给药毒性试验遗传毒性试验生殖毒性试验致癌性试验抗肿瘤药的药效第63页64安全性药理学试验

新作用机制细胞毒类抗肿瘤药应进行安全性药理学试验（ICH）抗肿瘤药的药效第64页65

试验设计关注点：普通应测定啮齿类和非啮齿类动物MTD或啮齿类动物STD10应采取临床拟用给药路径尽可能采取临床拟用剂型试验恢复期普通应为2~4周FDA：最少一个动物应进行普通行为、摄食量血液学、血液生化学和组织病理学检验提议测定最大耐受剂量下AUC

急性毒性试验抗肿瘤药的药效第65页66

推算临床起始剂量（按体表面积计算）：EMEA:以最敏感动物MTD1/10为I期临床研究起始剂量FDA:（1）若啮齿类动物STD101/10不引发非啮齿类动物产生毒性，以啮齿类动物STD101/10作为I期临床研究起始剂量；（2）若引发毒性，以不引发非啮齿类动物出现严重、不可逆毒性剂量1/6作为I期临床研究起始剂量有文件（1986年）：1/10LD10为I期临床研究起始剂量急性毒性试验抗肿瘤药的药效第66页67叶酸抑制剂不宜使用啮齿类动物铂类化合物有时不宜使用犬急性毒性试验相关动物：抗肿瘤药的药效第67页68采取啮齿类和非啮齿类动物给药频率尽可能与临床一致给药期限为4周（1～2个治疗周期）长久毒性研究可支持药品进行I期和等周期II期临床试验给药期限普通最长不超出6个月恢复期多为6~8周长久毒性试验抗肿瘤药的药效第68页69遗传毒性、生殖毒性和致癌性试验普通不需要在临床研究前完成遗传毒性试验普通不需要进行致癌性试验不一定要求上市前提供生殖毒性试验资料抗肿瘤药的药效第69页70细胞毒抗肿瘤药非临床研究技术要求相关文件美国 （1）ThecurrenttoxicologyprotocoloftheNationalCancerInstitute(LoweMC.,etal,FundamentalsofCancerChemotherapy,McGraw-Hill,1984)

（2）RegulatoryConsiderationsforPreclinicaldevelopmentalofanticancerdrugs(DeGeorgeJJ.,etal,CancerChemotherPharmacol,1998)欧盟

NoteforguidanceonthepreclinicalevaluationofanticancermedicinalproductsCPMP/SWP/997/96(effective:Jan99)中国

细胞毒类抗肿瘤药药效学和毒理学研究技术指导标准卫生部/1993.7日本

正制订指导标准草案，现有“关于支持抗癌药临床试验和上市注册毒性试验问题和解答”