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文档简介

一教学要求巩固细胞免疫的相关知识学习免疫细胞分离的原理及方法掌握巨噬细胞的分离方法实验5小鼠腹腔巨噬细胞收集

及形态观察.二实验原理巨噬细胞（MΦ）发育：骨髓多能干细胞→定向干细胞（髓样干细胞）→单核母细胞→前体单核细胞→单核细胞→血液→组织（分化为巨噬细胞）MΦ分布：单核细胞主要于血液中，巨噬细胞几乎存在于所有表皮和黏膜下组织。MΦ形态：有伪足，马蹄状单核，细胞形体大。MΦ分离纯化：小鼠和大鼠腹腔内有丰富的巨噬细胞，可用腹腔清洗的方法获得较多细胞悬液。正常小鼠每只可收集腹腔渗出细胞106，其中30%为巨噬细胞，如果给小鼠腹腔注射某中刺激物，可使巨噬细胞渗出增加，易于分离更多的巨噬细胞。

纯化：巨噬细胞易于沉降和贴壁，对X射线不敏感，而淋巴细胞和成纤维细胞对X射线敏感。

.三材料与器材（略）.四操作步骤（1）将小鼠以颈椎脱臼法处死，仰卧，固定四肢。（2）依次用碘酒及酒棉球消毒腹部，以镊子提取腹壁，剪去一小块皮肤，继以镊子提取腹腔。剪一小口。以注射器注入少量冲洗液。用滴管吸出，再注入冲洗液并吸出，滴管在腹腔内各个位置吸取液体，冲洗每只小鼠腹腔约共5mL

（3）将腹腔细胞悬液滴于干净玻片上，置37℃湿盒内。1～2h后倾去玻片上的液体。并用腹腔冲洗液轻洗玻片，即可见玻片上有毛玻璃样的单层核巨噬细胞粘附，巨噬细胞含量可达90%。（4）在显微镜下计算巨噬细胞的百分比，以检测分离结果。

.五注意事项（1）皮肤和腹膜要分别剪开，并确保皮肤血液不流入腹腔。（2）腹腔内的冲洗液要全部吸干。（3）腹腔冲洗液洗玻片时要适量，既要保证将盐分清洗干净，又不将细胞洗脱。.六

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