药物分析维生素专家讲座

维生素类药品分析概述维生素A维生素D维生素E维生素B1维生素C练习与思索返回主目录基本要求药物分析维生素第1页基本要求一、掌握维生素类药品结构特点与分析方法之间关系。二、掌握维生素类药品判别原理与方法。三、掌握三点校正法测定维生素A原理、测定方法与计算方法。四、掌握维生素DHPLC含量测定法和维生素EGC含量测定法。五、掌握维生素B1非水溶液滴定法与维生素C碘量法测定原理、方法与注意事项。六、熟悉本类药品其它含量测定方法。七、熟悉本类药品杂质检验方法。八、了解维生素A三点校正法推导过程。返回药物分析维生素第2页概述维生素：是维持人体正常代谢机能所必需微量营养物资。人体不能合成维生素。药物分析维生素第3页VitA、D2、D3、

E、K1

等脂溶性水溶性VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。分类按溶解度分返回药物分析维生素第4页-H维生素A醇-COCH3维生素A醋酸酯-COC15H31维生素A棕榈酸酯R:第一节维生素A药物分析维生素第5页为一个含有共轭多烯侧链环己烯（一）结构与性质一、

含有UV吸收

存在各种立体异构化合物药物分析维生素第6页VitA2VitA3

易发生脱氢、脱水、聚合反应药物分析维生素第7页鲸醇药物分析维生素第8页△或有金属离子存在时氧化↑共轭多烯侧链易被氧化（二）药物分析维生素第9页环氧化物VitA醛VitA酸药物分析维生素第10页三氯化锑反应（一）条件无水无醇CHCl3

判别试验二、药物分析维生素第11页蓝色紫红药物分析维生素第12页（BP（））λmax为326nm一个吸收峰UV法（二）λmax为350～390nm三个吸收峰药物分析维生素第13页去水VitA（VitA3）↓VitA药物分析维生素第14页药物分析维生素第15页USP显色剂磷钼酸要求斑点颜色和Rf值BP

杂质对照品法显色剂三氯化锑TLC法（三）药物分析维生素第16页立体异构体氧化降解产物合成中间体UV法（一）含量测定三、维生素A2维生素A3环氧化物维生素A醛维生素A酸药物分析维生素第17页三点校正法（法定方法）1.原理：（1）杂质吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，且随波长增大吸收度减小；（2）物质对光吸收含有加和性。药物分析维生素第18页2.波长选择：（1）1

VitAmax（328nm）（2）23

分别在1两侧各选一点药物分析维生素第19页测定对象VitA醋酸酯第一法等波长差法=12nm药物分析维生素第20页第二法等吸收比法测定对象VitA醇1=325nm,2=310nm,3=334nm药物分析维生素第21页测定法（1）基本步骤:第一步A选择选择依据：所选A值中杂质干扰已基本消除药物分析维生素第22页注意：

C为混合样品浓度第二步求药物分析维生素第23页第三步求效价换算因数由纯品计算而得：药物分析维生素第24页药物分析维生素第25页药物分析维生素第26页第四步：求标示量％药物分析维生素第27页

方法：（2）

第一法维生素A醋酸酯药物分析维生素第28页

判断是否在326～329nm之间在326～329nm之间改用第二法是否

求算并与要求值比较药物分析维生素第29页

要求值差值药物分析维生素第30页

判断差值是否超出要求值有一个以上超出无超出

计算A328（校正）

用A328计算药物分析维生素第31页药物分析维生素第32页03%－15%－3%第二法第二法药物分析维生素第33页讨论VA醋酸酯吸收度校正公式是用直线方程式法（即代数法）推导而来；VA醇吸收度校正公式是用相同三角形法（几何法或称6/7定位法）推导而来。在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波优点测定外，其余两点均在最大吸收峰两侧进行测定。在测定前务必要校正波长。测定样品应不得少于两份。药物分析维生素第34页VitAD胶丸中VitA含量测定

精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.07985g/丸）内容物0.1287g至10ml烧杯中，加环己烷溶解并定量转移至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在以下波优点测得吸收度为药物分析维生素第35页A300：0.374A316

：0.592A328：0.663A340：0.553A360：0.228A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.834A360/A328：0.344求本品中维生素A占标示量百分含量？药物分析维生素第36页A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.834A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299+0.01－0.010+0.02+0.04－－－－－=====A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)=3.52(2×0.663–0.592–0.553)=0.637药物分析维生素第37页A328(校正)–A328(实测)A328(实测)×100=0.637–0.6630.663×100=-3.92E1%1cm(328nm)=A328(校正)100ms/D=0.637100×0.1287/1250=61.87药物分析维生素第38页供试品中维生素A效价=E1%1cm(328nm)×1900=61.87×1900=117553（IU/g）标示量%=VA效价(IU/g)×每丸内容物平均装量(g/丸)标示量(IU/丸)×100%=117553×0.0798510000×100%=93.9%药物分析维生素第39页适合用于维生素A醇（等吸收比法）

第一法无法消除杂质干扰时用此法[皂化法、6/7A法]（3）第二法药物分析维生素第40页水溶性脂溶性药物分析维生素第41页

判断max是否在323～327nm之间取未皂化样品采取色谱法纯化后再测定

计算是否药物分析维生素第42页

判断A300/A325是否大于0.73是否取未皂化样品采取色谱法纯化后再测定

计算A325(校正)药物分析维生素第43页药物分析维生素第44页03%－3%药物分析维生素第45页三氯化锑比色法（二）优点简便快速λmax618nm～620nm标准曲线法缺点呈色不稳定（5~10s内）水分干扰与标准曲线温差≤1℃专属性差三氯化锑有腐蚀性（二）蓝色+3SbClVitA返回药物分析维生素第46页第二节维生素D维生素D2一、结构与性质药物分析维生素第47页维生素D3药物分析维生素第48页开环甾体：含有甾类化合物显色反应，可用于判别。手性碳原子：含有旋光性，可用于判别。

多烯：可进行紫外检测。

药物分析维生素第49页二、判别试验1.显色反应醋酐--硫酸反应D2

黄红紫绿

D3

黄红紫、蓝绿绿三氯化锑反应橙红色渐变粉红三氯化铁反应橙黄色二氯丙醇和乙酰氯反应绿色药物分析维生素第50页2.比旋度判别维生素D2维生素D3溶剂

浓度比旋度值无水乙醇无水乙醇40mg/ml5mg/ml+102.5°～+107.5°+105°～+112°注意事项：应于容器开启30分钟内取样，在溶液配制后30分钟内测定。药物分析维生素第51页

3.区分反应：以96%乙醇为溶剂，加乙醇和85%硫酸，D2显红色，在570nm处有最大吸收，D3显黄色，在495nm处有最大吸收。

4.其它方法：

TLC、HPLC、制备衍生物测熔点

药物分析维生素第52页三、杂质检验维生素D2中麦角甾醇检验：加洋地黄皂苷溶液，混合，放置18h不得发生浑浊或沉淀。前维生素D光照产物药物分析维生素第53页四、含量测定方法

中国药典（年版）采取正相高效液相色谱法测定维生素D含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为三个方法。

固定相：硅胶

流动相：正己烷-正戊醇（997：3）药物分析维生素第54页第一法：用于无维生素A醇及其它杂质干扰情况，步骤以下：

1．系统适用性试验：测定重复性和分离度。

药物分析维生素第55页2．测定校正因子：

AS/mS

f1=--------

Ar/mr

f2=（ASmr-f1mSAr1）/（Ar1mS）

3．含量测定：

mi=（f1Ai1+f2Ai2）mS/AS药物分析维生素第56页第二法：用于有杂质干扰情况，步骤以下：

1．皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙醚、制备供试液A。

2．净化：供试液A经液相色谱分离，准确搜集含有维生素D及前维生素D混合物全部流出液，制备成供试液B。

固定相：ODS

流动相：甲醇-乙腈-水（50：50：2）

3．含量测定：取供试液B按第一法测定。

药物分析维生素第57页第三法：用于经第二法处理后仍有杂质干扰情况。步骤以下：1．制备供试液：取供试液A，净化，水浴加热，得供试液C。

制备对照液：对照品贮备液：稀释、加热。

2．含量测定：在第一法色谱条件下，交替精密进样对照液和供试液，按外标法定量。返回药物分析维生素第58页苯并－二氢吡喃醇第三节维生素E

药物分析维生素第59页名称R1R2相对活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1***药物分析维生素第60页dl－α－生育酚醋酸酯药物分析维生素第61页结构与性质一、苯环+二氢吡喃环+饱和烃链1、UV2、乙酰化酚羟基易水解緘緘緘瑌]O[醌型化合物△生育酚緘緘緘緘畗緘-+orOHHVitE杂质，需检验药物分析维生素第62页緘]O[生育红（一）硝酸反应橙红色判别二、75℃15′緘緘緘畗緘HNO3VitE生育酚药物分析维生素第63页（橙红色）生育红生育酚HNO3强氧化剂药物分析维生素第64页三氯化铁－联吡啶反应（二）药物分析维生素第65页生育酚对-生育醌[O]弱氧化剂药物分析维生素第66页血红色药物分析维生素第67页=41.0～45.5λmax=284nmλmin=254nm0.01%无水乙醇中UV法（三）药物分析维生素第68页薄层板硅胶G展开剂环己烷-乙醚（4：1）显色剂硫酸（105℃5′）VitERf

=0.7-生育酚Rf

=0.5-生育醌Rf

=0.9TLC法（四）药物分析维生素第69页2.游离生育酚

杂质检验

三、原理酸度

以NaOH滴定液（0.1mol/L）体积控制。药物分析维生素第70页（M生育酚=430.8）例

取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过1.0ml。药物分析维生素第71页≤2.15％限量药物分析维生素第72页四、含量测定GC法（法定方法）（一）GC特点1、选择性好灵敏度高速度快分离效能好挥发性低、不稳定、极性强→衍生化易受样品蒸气压限制药物分析维生素第73页载气→N2固定液→硅酮（OV-17）担体→硅藻土或高分子多孔小球柱温→265℃检测器→氢火焰离子化检测器(FID)内标→正三十二烷

n≥500R≥2VitE测定色谱条件2、内标法加校正因子药物分析维生素第74页内标法供试液（样品+内标）内标物对照液（对照+内标）是样品中不存在物质与被测组分峰靠近能与各组分完全分离与被测组分量靠近药物分析维生素第75页校正因子：药物分析维生素第76页WWKK%VitE%10012=稀释倍数稀释倍数样对实际工作中计算方法××××药物分析维生素第77页（二）HPLC法外标法另外，还有铈量法、比色法和荧光法返回药物分析维生素第78页氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)第四节维生素B1HClCl-药物分析维生素第79页（一）溶解性1、易溶于水2、水溶液呈酸性（二）UV共轭双键λmax=246nm结构与性质一、药物分析维生素第80页与生物碱↓→↓（三）硫色素反应（四）嘧啶环——噻唑环——（五）盐酸根呈氯化物反应，用于判别。药物分析维生素第81页ChP判别试验二、（一）硫色素反应药物分析维生素第82页药物分析维生素第83页硫色素＋2H药物分析维生素第84页VitB1H+H+H+H+（二）沉淀反应药物分析维生素第85页S元素反应Cl-反应（三）其它反应()瘆緘緘緘緘緘21PbSNaSVitBNO3PbNaOH药物分析维生素第86页三、含量测定喹那啶红－亚甲蓝（紫红→天蓝）（一）非水溶液滴定法药物分析维生素第87页反应摩尔比为1：2药物分析维生素第88页UV法（二）药物分析维生素第89页片剂、注射剂=421（每片）相当于标示量%=A=ECL规格g/片g/100mlgChPWEA%cmD10011磢××%100标示量平均片重××药物分析维生素第90页（每ml）相当于标示量%=规格g/mlml%VEA%cm100110011磢磢磢×标示量稀释倍数××药物分析维生素第91页畗（三）硫色素荧光法原理1、荧光硫色素异丁醇铁氰化钾緘緘畗緘緘緘緘畗1VitBNaOH药物分析维生素第92页特点2、（1）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物不干扰，适合用于体液分析药物分析维生素第93页第五节维生素CL－抗坏血酸药物分析维生素第94页1、易溶于水2、水溶液呈酸性结构与性质一、（一）溶解性药物分析维生素第95页二烯醇结构二酮基结构二烯醇结构（二）还原性药物分析维生素第96页有活性有活性无活性药物分析维生素第97页△糖类显色反应50℃结构与糖类相同（三）具糖性质药物分析维生素第98页C3－OHpKa=4.17C2－OHpKa=11.57酸性（四）一元酸药物分析维生素第99页L(+)－抗坏血酸活性最强手性C（C4、C5）（五）光学活性**药物分析维生素第100页与碱反应（六）水解性药物分析维生素第101页药物分析维生素第102页与氧化剂反应（一）判别试验二、去氢抗坏血酸緘緘畗緘]O[VitC药物分析维生素第103页1、与AgNO3反应2、与2，6-二氯靛酚反应(ChP)氧化型玫瑰红色还原型蓝色OHˉ(ChP)药物分析维生素第104页（玫瑰色）（无色）药物分析维生素第105页3.其它氧化剂反应：亚甲蓝或高锰酸钾试剂褪色

碱性酒石酸铜砖红色沉淀

磷钼酸钼蓝

药物分析维生素第106页糖类反应（二）或盐酸50℃吡咯USP药物分析维生素第107页药物分析维生素第108页（蓝色）(糠醛)（戊糖）50℃(吡咯)药物分析维生素第109页UV（三）BP0.01mol/LHCl药物分析维生素第110页三、杂质检验1.溶液澄清度与颜色：有色杂质分光光度法

2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法药物分析维生素第111页指示剂淀粉指示液原理1、碘量法（一）含量测定四、药物分析维生素第112页H+药物分析维生素第113页

取本品约0.2g，精密称定，加新沸过冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，马上用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mgC6H8O6方法2、药物分析维生素第114页（1）酸性环境d.HCl

（2）新沸冷H2O减慢VitC被O2氧化速度讨论3、（3）马上滴定赶走水中O2降低O2干扰药物分析维生素第115页（4）附加剂干扰排除片剂——滑石粉——过滤注射剂——抗氧剂——丙酮甲醛Na2SO3NaHSO3

Na2S2O3Na2S2O5药物分析维生素第116页CHHOOaS3aSO+H2NHON2252HONHCOS3a药物分析维生素第117页2，6-二氯靛酚钠滴定法法（二）USPJP原理1、酚亚胺二氯靛酚緘緘畗，-62VitC药物分析维生素第118页本身指示终点法方法2、药物分析维生素第119页（2）快速滴定2min内

（1）酸性环境HPO3-HAc

稳定VitC预防其它还原性物质干扰（3）剩下比色测定

（定量过量）（测剩下染料）讨论3、药物分析维生素第120页（4）缺点

需经常标定贮存≤一周不稳定干扰多氧化力较强药物分析维生素第121页

公元前3500年-古埃及人发觉能防治夜盲症物质，也就是以后维A。

1600年-医生勉励以多吃动物肝脏来治夜盲症。

1747年-苏格兰医生林德发觉柠檬能治坏血病，也就是以后维C。

1831年-胡萝卜素被发觉。

1905年-甲状腺肿大被碘治愈。

1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。

1915年-科学家认为糙