健康食品之安全性与功效性评估投影片

健康食品之

安全性與功效性評估健康食品之安全性與功效性評估投影片第1页

1.申請廠商基本資料表及健康食品查驗登記表2.產品原料成份規格含量表。3.產品之安全評估報告。4.產品之保健功效評估報告。5.保健功效成份鑑定報告及其檢驗方法。6.保健功效安定性試驗報告。7.產品製程概要。8.良好作業規範之證明資料。9.產品衛生檢驗規格及其檢驗報告。10.普通營養成份分析報告。11.相關研究報告文獻資料。12.產品包裝標籤及說明書。13.申請者營利事業登記證影本。14.完整樣品及審查費。15.磁碟片乙片。

健康食品之申請健康食品之安全性與功效性評估投影片第2页

健康食品之申請廠商應本身先確定產品功效及安全性函詢歸屬於那一類健康食品若為中草藥性質，則轉送至行政院衛生署中醫藥委員會，判定是否為食品依據分類，執行相關安全性與功效性評估健康食品之安全性與功效性評估投影片第3页安全性評估之主要性生物安全性試驗評估對人體保護以細胞或實驗動物為模式，以評估測試物質毒理性質及其與劑量相關性；並預知其毒性程度、毒性標器官、毒性復原性及毒性遲發性。用以建立臨床人體試驗安全劑量及各項毒性反應指標及檢測參數。健康食品之安全性與功效性評估投影片第4页生物安全性評估系統應用領域包裝材料醫療器材化學製品工業環境健康食品新藥開發安全性評估健康食品之安全性與功效性評估投影片第5页安全性評估之主要性

藥物開發臨床前試驗當開發或設計分子，証實含有醫療潛力，即步入臨床前評估階段。為一系列體內、體外之測試，以決定安全性及藥物活性。藥物療效與活性:藥物動力學(pharmacokinetics)、療效(efficacy)、吸收、分佈、代謝、排除(absorption,distribution,metabolism,excretion)安全性:生物安全性評估(bio-safetyassessment)動物試驗:非臨床/臨床前(PreclinicalTrial)人體試驗:即為臨床試驗(ClinicalTrial)

健康食品之安全性與功效性評估投影片第6页實驗動物使用與安全性評估動物實驗管理小組(IACUC)InstitutionalAnimalCareandUseCommittee3R原則---取代化(Replacement)、精緻化(Refinement)及減量化(Reduction)健康食品之安全性與功效性評估投影片第7页健康食品安全性評估法規衛生署:藥品非臨床試驗安全性規範衛生署:健康食品安全性評估方法健康食品之安全性與功效性評估投影片第8页健康食品-安全性評估

安全性評估分類

健康食品之安全評估分為四個類別

第一類：屬以下二種情形之一者，得免再進行毒性測試。產品之原料為傳統食用且以通常加工食品形式供食者。產品含有完整之毒理學安全性學術文獻報告及曾供食用之紀錄，且其原料、組成成份及製造過程與所提具之學術文獻報告完全相符者。

第二類：產品之原料為傳統食用而非以通常加工食品形式供食者，應檢具以下項目之毒性測試資料。基因毒性試驗28天口服毒性試驗健康食品之安全性與功效性評估投影片第9页

第三類：產品之原料非屬傳統食用者，應檢具以下項目之毒性測試資料。基因毒性試驗90天口服毒性試驗致畸試驗

第四類：

產品之原料非屬傳統食用且含有致癌物之類似物者，應檢具以下項目之毒性測試資料。基因毒性試驗90天口服毒性試驗致畸試驗致癌性試驗繁殖試驗健康食品-安全性評估

安全性評估分類健康食品之安全性與功效性評估投影片第10页健康食品安全性評估

投與方式

RoutesAdministration/TreatmentPer-oral【p.o.;胃導管餵食（intragastricintubation）】Incorporatedwithfeed健康食品之安全性與功效性評估投影片第11页

安全性試驗之分類普通毒性試驗(Generaltoxicitystudy)單劑量急性毒性試驗（14天）重覆劑量亞急性（28天）與亞慢性（90天）毒性試驗慢性毒與致癌性毒性試驗（24~30個月）特殊毒性試驗(Specifictoxicitystudy)基因毒性試驗生殖與發育毒性試驗皮膚、眼球、免疫、神經及其它毒性試驗健康食品之安全性與功效性評估投影片第12页健康食品安全性評估試驗1.基因毒性試驗

--Genemutationtestwithbacteria--Chromosomalaberrationwithmammaliancellsinculture--Micronucleustestwithrodents2.單劑量急性毒性試驗3.28天重複劑量亞急性毒性試驗4.90天重複劑量亞慢性毒性試驗5.致畸性試驗6.慢性/致癌性試驗7.繁殖毒性試驗健康食品之安全性與功效性評估投影片第13页健康食品安全性評估

特殊毒性試驗基因毒性試驗(Genotoxicity):評估測試物質直接或間接引發基因傷害程度。沙門氏菌逆突變分析(Amestest):使用已突變需靠外界提供組胺酸(histidine)才能生存之沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)試驗菌種，若試驗菌種能在缺乏組胺培養基中產生菌落，表示有致突變物質存在。健康食品之安全性與功效性評估投影片第14页染色體結構異常分析

(ChromosomalAberrationTest)染色體結構異常分析(chromosomalaberration):是搜集分裂中期之細胞，製作染色體玻片，在顯微鏡下觀察染色體(chromosome)之形態並分析結構異常之百分比。健康食品之安全性與功效性評估投影片第15页微小核分析

(MicronucleusAssay)動物體內微小核分析(Micronucleusassay):採用分析周邊血液內網狀紅血球(reticulocyte)含微小核(micronuclei)之頻率，並計算網狀紅血球佔全體紅血球之百分比以作評估（利用鏡檢觀察）。

網狀紅血球：為骨髓新生之紅血球健康食品之安全性與功效性評估投影片第16页健康食品安全性評估

普通毒性試驗測試物質經投予後，對實驗動物可能產生之毒性影響，以瞭解毒性變化之產生，或同時測定無毒性顯示之劑量(no-observed-adverse-effect-level;NOAEL或no-observed-effect-level;NOEL)及其致癌性。健康食品之安全性與功效性評估投影片第17页急性毒試驗(Acutetoxicitystudy)目标:了解測試物質過量可能引發之急性毒性，及顯示測試物質目標器官與遲發毒性建立重覆劑量毒性評估時，劑量範圍之選擇LD50方法:惯用囓齒類動物，經單一劑量投予，並觀察14天預試驗正試驗觀察臨床症狀、解剖及肉眼病理檢查、如有必要並做目標器官之組織病理診斷單劑量急性毒試驗普通毒性試驗健康食品之安全性與功效性評估投影片第18页亞急性毒試驗(Subacutetoxicitystudy):天天連續28天投與亞慢性毒試驗(Subchronictoxicitystudy):連續3個月投與目标:

評估測試物質重覆使用所造成累積性毒性、測試物質毒性標器官、及毒性之復原性方法:

持續不一样時間內，重覆給予動物試驗物質觀察臨床症狀與毒性反應臨床病理檢驗組織病理診斷重覆劑量毒試驗普通毒性試驗健康食品之安全性與功效性評估投影片第19页目标:

在1至2年(囓齒類動物)試驗期間中，確定長期投與測試物質在動物身上造成腫瘤可能性，以評估測試物質是否可長期使用。方法:

需使用兩種以上囓齒類動物動物觀察臨床症狀與毒性反應臨床病理檢驗組織病理診斷致癌性試驗(Carcinogenicity)普通毒性試驗健康食品之安全性與功效性評估投影片第20页臨床前試驗-安全性評估

生殖與發育毒性試驗

致畸胎性試驗

(Teratogenicity)

器官發生期，評估試驗物質對胚胎發育之影響及造成畸胎之可能性。動物:

小鼠、大鼠；雌雄1:1共居一飼養箱中；每組共20對；兔子則為每組共12對。投藥期:

雌大鼠、小鼠為第6-15懷孕日雌兔為第7-16懷孕日

觀察項目:於第20懷孕日(兔子則第29懷孕日)，以安樂死解剖。算出胚胎死亡、妊娠成立數目等。檢查產仔數、測生存胎兒稱重、性別判斷、檢查外表、內部器官等。新生兒進行骨骼與內臟組織檢查。健康食品之安全性與功效性評估投影片第21页臨床前試驗-安全性評估

生殖與發育毒性試驗

繁殖試驗(Fertilityandreproductivetoxicity)

懷孕前至懷孕早期，評估試驗物質對雌、雄兩性動物生殖力及對受精卵運送著床影響。動物:

小鼠、大鼠；雌雄1:1共居一飼養箱中；每組共20對。投藥期:

雄鼠(約5-6周齡)，天天投藥共60天，在進行交配期間內亦天天投藥，至交配成功為止。雌鼠為性成熟(約9-10周齡)，投藥兩周，然後進行交配，交配期間亦天天投藥，至交配成功後，持續投藥至胚胎器官形成期(約為6th懷孕日)觀察項目:雄鼠交配成功後，以安樂死解剖，觀察睪丸與副睪。雌鼠懷孕第21天，以安樂死解剖，檢查卵巢黃體數目，胚胎著床與被吸收數目，及胚胎死亡率。健康食品之安全性與功效性評估投影片第22页健康食品安全性評估

試驗技術與項目動物飼養與臨床觀察動物房環境與進出管控，動物房保持在溫度23±2℃、濕度50±10%及光照12小時亮、12小時暗。試驗期間之動物臨床觀察包含眼睛檢查、使用檢眼鏡檢查眼睛外部及內部構造。定时之飼料攝取、體重增減紀錄試驗工作、藥物投與健康食品之安全性與功效性評估投影片第23页健康食品安全性評估

試驗技術與項目臨床病理血液檢驗:hematocrit、hemoglobin、erythrocytecount、totalanddifferentialleukocytecounts及凝血因子(比如clottingtime、prothrombintime、activatedpartialthromboplastintime)等之測量。血清生化檢驗:血清生化檢驗內容包含電解質平衡、醣類代謝、及肝與腎功效等。尿液檢驗:顯微鏡觀察尿沈渣，測量尿液之量、酸鹼值與比重，並測量尿液中之protein,glucose,ketones,bilirubin與occultblood等。健康食品之安全性與功效性評估投影片第24页健康食品安全性評估

試驗技術與項目肉眼觀察試驗期間進行臨床觀察，並記錄動物是否有臨床症狀或其它異常。動物飼養期間如有死亡狀況時或飼養期間結束時得以安樂死人道處理（euthanasia）犧牲剖檢動物，並找出致死原因（causeofdeath）並計算動物存活率（survivability）。屍體剖檢時，肉眼觀察及記錄動物器官與組織之變化，並測量主要臟器重量。器官絕對重量值(absolutevalue)與相對重量值(relativevalue)(v.s.brain)。健康食品之安全性與功效性評估投影片第25页組織病理診斷試驗結束後，將各組動物以乙醚麻醉犧牲後剖檢，取出臟器稱重後以10％中性福馬林緩衝液固定保留，經組織固定、脫水及蠟浸潤處理，再以組織包埋機製作成組織蠟塊，組織蠟塊以旋轉式切片機切成厚度約為2-4μm石蠟薄片，經H.E.（hematoxylinandeosinstain）染色、封片製作成組織病理切片後，由毒性病理師做顯微鏡觀察診斷。健康食品安全性評估

試驗技術與項目健康食品之安全性與功效性評估投影片第26页健康食品管理

衛生署認定之保健功效調節血脂功效腸胃道功效改进免疫調節功效調節血糖功效護肝功效（針對化學性肝損傷）改进骨質疏鬆功效抗疲勞功效延緩衰老功效不易形成體脂肪功效調節血壓功效促鐵吸收功效輔助調整過敏體質牙齒保健功效健康食品之安全性與功效性評估投影片第27页調節血脂功效進行最少「人體實驗」或「動物實驗」之一人體實驗必須委託國內外大學食品營養、醫藥等相關研究所、醫學中心或其它中央衛生主管機關認可之研究機構執行，需有醫師參與。每組人數≧8人。實驗期≧4週。實驗採自體比較方式，若其於實驗後比實驗前有明顯(P<0.05)改进，則可認定該產品含有該項生理功效。健康食品之安全性與功效性評估投影片第28页動物實驗動物必須來自公立研究機構、公私立大學或其它中央衛生主管機關認可之實驗動物中心。每組動物≧8隻。建議實驗飼料應有2-3組高低不一样欲測保健食品劑量進行實驗。實驗期4-8週或是視實驗需要而定。實驗必須記錄每隻動物之體重改變與平均每日飼料攝取量。檢測項目：三酸甘油酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)值健康食品之安全性與功效性評估投影片第29页腸胃道功效改进進行最少「人體實驗」或「動物實驗」之一若廠商所提產品相關科學研究證據不明確或不足時，須同時進行「人體實驗」和「動物實驗」，以加強證據之可信度。改进胃腸功效必須明確含有以下五種功效指標之ㄧ。促進消化吸收改进腸內細菌菌相幫助（改进）胃腸運動有助於胃黏膜之保護作用抑制幽門螺旋桿菌人體實驗必須委託國內外大學食品營養、醫藥等相關研究所、醫學中心或其它中央衛生主管機關認可之研究機構執行，需有醫師參與。每組人數≧8人，且必須有控制組。實驗期≧2週。健康食品之安全性與功效性評估投影片第30页促進消化吸收消化酵素活性測定：如trypsin,chymotrypsin,amylase,lipase,leucineaminopeptidase,disaccharidase。觀察食慾、食量、體重、血紅素、胃腸腹脹感、糞便形狀及次數、胃腸運動及小腸吸收等指標變化。等指標變化。改进腸內細菌菌相檢測益生菌：Bifidobacterium檢測有害（或無益）菌：Clostridiumperfringens幫助（改进）胃腸運動，促進腸道正常機能之維持胃腸運動(活性碳、腸鋇計檢查或核子醫學檢查)、胃黏膜保護觀察糞便之乾重、粒數、水分及形狀有助於胃黏膜之保護作用，維持腸道正常機能（動物實驗）離體實驗：培養鼠胃黏膜細胞，測定胃黏膜細胞之存活率（viability）變化（MTTassay）。活體實驗：胃酸分泌測定：雄性實驗絕食老鼠（24小時），胃部幽門結紮，再给予縫合復原，搜集胃液並定量胃液體積，並以0.1NNaOH溶液滴定，求其實驗組及控制組之總酸度之變化若p<0.05，即可判定測試食品含有胃黏膜保護作用之功效。減少胃內幽門螺旋桿菌（人體實驗）篩去習慣特異及健康不良參與者。進行尿素呼氣試驗（ureabreathtest），以得13CO2/12CO2比值（即ΔUBT值）。就ΔUBT值決定受試對象（建議ΔUBT＞10％O者）。健康食品之安全性與功效性評估投影片第31页免疫調節功效進行最少「人體實驗」或「動物實驗」之一實驗動物：建議選用小鼠，惯用Balb/c或是B6小鼠皆可，6-8週大，雄鼠或雌鼠皆可，每組隻數為單一性別最少10隻。非特異性免疫反應脾臟或是淋巴結細胞增殖反應抗體分泌實驗細胞激素分泌實驗分離脾臟細胞及表面標記分析自然殺手細胞活性吞噬細胞活性特異性免疫反應OVA誘發特異性抗體產生OVA-特異性T細胞增殖反應OVA-特異性細胞激素製造遲發性過敏反應（delayed-typehypersensitivity）檢測動物實驗人體實驗方法與動物實驗相同健康食品之安全性與功效性評估投影片第32页調節血糖功效進行最少「人體實驗」或「動物實驗」之一若廠商所提產品相關科學研究證據不明確或不足時，須同時進行「人體實驗」和「動物實驗」，以加強證據之可信度。動物實驗實驗動物遺傳性自發高血糖動物（肥胖小鼠）化學物誘導糖尿病動物（STZ誘導）檢測項目空腹血糖值測定葡萄糖氧化酵素法(glucoseoxidaseassay)己糖激酵素法(hexokinaseassay)葡萄糖去氫酵素法(glucosedehydrogenaseassay)葡萄糖耐量測定(Glucosetolerancetest)其它測定尿糖值、餐後血糖值、空腹及餐後血漿胰島素…等健康食品之安全性與功效性評估投影片第33页空腹8小時後之葡萄糖耐量試驗或飲食耐量試驗醣化血色素(glycosylatedHb)測定比色法：醣化血紅素經氧化、水解使變成為5-hydroxymethylfufural，此物再和2-thio-barbituricacid產生顏色反應，比色而測得HbA1。電泳法：利用agarosegel、pH6.3，進行血色素電泳分析。圓柱層析法：利用KCN和醣化血色素反應產生CN-醣化血色素，然後通過陽離子交換樹脂圓柱層析，在適當pH下，使醣化血色素先析出，以比色法測出各醣化血色素之百分比。陽離子交換高效液相層析法(HPLC法)：利用phosphatecyanide緩衝液、Bio-Rex70陽離子交換樹脂及400psi壓力，分離各種HbA1。普通生化測定血糖、血脂、血紅蛋白、總蛋白測定、尿酸和酮體…等（應視產品特征及相關考量加測，以增強實驗報告之效力）。人體實驗健康食品之安全性與功效性評估投影片第34页護肝功效-針對化學性肝損傷只有「動物實驗」評估方法動物實驗實驗動物四氯化碳誘發大（小）白鼠慢性肝損傷實驗模式檢測項目血清：測定與肝傷害相關之成份或酵素活性GOT(AST)、GPT(ALT)、TG、Cholesterol肝臟：測定各種與抗氧化功效相關之成份或酵素活性Glutathione(GSH)Glutathionereductase(GSHRd)Glutathioneperoxidase(GSHPx)Superoxidedismutase(SOD)Catalase病理切片觀察健康食品之安全性與功效性評估投影片第35页改进骨質疏鬆功效進行最少「人體實驗」或「動物實驗」之一若廠商所提產品相關科學研究證據不明確或不足時，須同時進行「人體實驗」和「動物實驗」，以加強證據之可信度。人體實驗每組人數≧30人，受試者宜為健康之成年人，男女各半（≧15人），女性受試者必須非懷孕、非授乳者。實驗得選擇以下「鈣質生物利用率測定」或「骨質密度測定」，能同時進行二者更佳。動物實驗宜採成熟或年老之大白鼠(rats)為實驗動物，性別視實驗需要而自行擬定，但以年老或卵巢切除之雌性動物為佳。進行股骨（femur）、脛骨（tibia）或其它適當骨骼切片，計算其骨小樑數目；亦可測股骨或其它適當骨骼骨質密度（質量/體積）、灰分與鈣質。健康食品之安全性與功效性評估投影片第36页抗疲勞功效進行最少「人體實驗」或「動物實驗」之一若廠商所提產品相關科學研究證據不明確或不足時，須同時進行「人體實驗」和「動物實驗」，以加強證據之可信度。現階段健康食品抗疲勞功效，乃針對經過運動測試後，延緩運動期間疲勞發生或促進運動後疲勞消除之評估。人體實驗人數12人，受試者必須為健康之成年人

(20-40歲)。每位受試者採自體比較方式進行耐力運動能力測定。最大攝氧量(VO2max)測試運動能力測定固定強度與時間之耐力運動能力測試延緩運動期間疲勞之評估、促進運動後疲勞消除之評估運動至力竭之耐力運動能力測定延緩運動期間疲勞之評估、促進運動後疲勞消除之評估四擇一血液分析

血氨、血乳酸、血糖、肌酸激酶、游離脂肪酸健康食品之安全性與功效性評估投影片第37页動物實驗8~10週齡之雄性小鼠、Wistar或SD大鼠游泳測試先進行游泳適應；末次餵食後30~60分鐘，將鼠放入水溫271℃玻璃水缸中，強迫鼠進行游泳掙扎，直到體力消耗殆盡下沉溺死為止。為了縮短試驗時間，可在鼠背部綁上鉛絲進行負重游泳。負重量可依據動物月齡選擇體重2~5%，在試驗前應禁食12~24小時。<注意事項>(1)故以單隻游泳較佳(2)各組水溫應控制一致(3)鉛絲纏繞時鬆緊應適宜。(4)假如鼠漂浮在水面四肢不動，觀察者可用木棒在其附近攪動。跑步機測試先進行跑步機適應；末次餵食後30~60分鐘，在跑步機末端設置電擊區。若鼠落入電擊區，而經過屡次電擊仍無法起身往前跑即判定已經力竭。生化值測定

血尿素氮試驗、肝醣試驗、血乳酸試驗健康食品之安全性與功效性評估投影片第38页延緩衰老功效動物實驗

（生存及生化）

與人體實驗都要做。若人體試驗沒顯著延緩衰老效果，但動物實驗看到有不錯結果，建議可允許標示為『在動物實驗表明有延長生命作用』。生存實驗：利用生物整個生存過程來觀察受試物對壽命影響。小鼠生存實驗：選用小鼠12月齡小鼠，每組40隻，雌雄各半；大鼠生存實驗：選用大鼠18月齡大鼠，每組30隻，雌雄各半；果蠅生存實驗：選用果蠅Oregen品系。（不一定需進行）生化實驗老齡動物、過氧化損傷處理動物或國際認可之老化模型動物任選其一。過氧化損傷模型動物：D-半乳糖模型、輻照模型、溴代苯模型

受試者：未服用任何藥物身心健康之成年人，需包含部分老年人(六十五歲以上)，需有對照組與實驗組，每組不少於二十人。

動物實驗人體實驗健康食品之安全性與功效性評估投影片第39页氧化指標測定項目：氧化修飾後蛋白羰基功效基含量、血漿蛋白含硫功效基及谷胱甘肽、DNA之8羥基-2’-去氧鳥嘌呤核苷、以血球為模式評估抗氧化製劑對降低自由基氧化損傷、定量磷脂膽鹼過氧化氫（PCOOH）以及磷脂、TBARS含量。判定基準：六項氧化指標中，可任選三項做實驗，最少須要一組實驗為正反應(positivedata)，並且不能有負相反應(negativedata)。以上氧化指標之實驗方法，若有文獻或有其它科學方法佐證之，亦可採用。

生化指標測定項目：超氧化物歧化酵素、葡萄糖六磷酸去氫酵素、觸酵素、麩胱甘肽過氧化酵素、麩胱甘肽還原酵素活性測定方法判定基準：五項生化指標中，最少須要三組實驗為正反應

(positivedata)，並且不能有負相反應(negativedata)。以上生化指標之實驗方法，若有文獻或有其它科學方法佐證之，亦可採用。健康食品之安全性與功效性評估投影片第40页不易形成體脂肪功效肥胖症可分為以下兩種：單純性肥胖(simpleobesity)續發性肥胖(secondaryobesity)本功效評估方法以單純性肥胖症為對象，評估保健食品之不易形成體脂肪功效。人體實驗BMI≧27之單純性肥胖者，無心臟、肝臟、腎臟、內分泌及其它器官之重大疾病，非精神病患者，沒有服用藥物。採用本身對照或組間對照方式，每組必須大於10人，必須採用單盲或雙盲方法。實驗期間最少4週。安全性指標（必測項目）：普通狀況、血液常規檢查、血液生化分析、飲食紀錄。安全性指標（選測項目）：血中酮體濃度及電解質平衡狀態、尿液、心肺功效檢查。功效性指標：BMI、腰臀比、體脂肪。健康食品之安全性與功效性評估投影片第41页動物實驗原理一：以高熱量飼料誘發實驗動物之肥胖症後，投與受試物。原理二：同時投與高熱量飼料與受試物。實驗動物：10~12週齡之雄性SD、Wistar大白鼠或小白鼠。安全性指標（必測項目）血脂質、肝臟脂質、血糖、肝功效、腎功效。安全性指標（選測項目）血中酮體濃度、電解質平衡狀態。功效性指標（必測項目）體重、攝食量及食物利用率、體脂肪量功效性指標（選測項目）脂肪細胞數目及大小、脂肪組織之脂解酶活性、脂蛋白脂解酶(lipoproteinlipase)活性…等。健康食品之安全性與功效性評估投影片第42页調節血壓功效必須進行「人體試食實驗」若廠商所提產品相關科學研究證據不明確或不足時，須同時進行「人體試食實驗」和「動物實驗」，以加強證據之可信度。原理：以受試物給予原發性高血壓動物，觀察受試物對高血壓動物模型收縮壓與舒張壓指標影響，評價受試物調節血壓作用。實驗動物：原發性高血壓老鼠以SHR為主，對照組動物為WKY(WistarKyoto)老鼠。

受試者：參加人體試食實驗之受試者為原發性高血壓患者，收縮壓介於130〜179mmHg，舒張壓介於85〜109mmHg，兩者有一項核實即可確診，且應本著自覺自願原則。受試人數至實驗結束每組最少20人。並於受試前後作血液生化分析（如血球、血脂質、肝、腎功效、血糖、尿酸、電解質….等）。動物實驗人體實驗健康食品之安全性與功效性評估投影片第43页促鐵吸收功效食物鐵可用率評估方法分為體外（invitro）測量