器官移植配型专题宣讲

器官移植配型理论与技术器官移植配型专题宣讲第1页基本概念广义器官移植：用本身或异体正常器官、组织或细胞置换病变或功效缺失器官、组织或细胞，以维持和重建机体生理功效。影响移植成功关键原因是可能发生免疫排斥反应；器官移植配型专题宣讲第2页一.基本概念人人猪相关概念同种异体移植异种移植同系移植移植自体移植器官移植配型专题宣讲第3页引发排斥反应抗原ABO血型抗原；组织特异性抗原；主要组织相容性抗原(MHA,majorhistocompatibilityantigen)，又称人类白细胞抗原（HLA）;次要组织相容性抗原（mHA,minorhistocompatibilityantigen）H-Y抗原;器官移植配型专题宣讲第4页HLA基因结构、抗原结构及特点由第6号染色体短臂21.31区编码，按功效分为HLA-I,Ⅱ,Ⅲ三个区域，其中I,Ⅱ区编码抗原与移植关系亲密。HLA-I类抗原主要由A、B、C位点编码；HLA-Ⅱ类抗原由DR、DP、DQ位点编码；器官移植配型专题宣讲第5页HLA-I类抗原是由第6号染色体对应I类基因编码α链与第15号染色体编码β2微球蛋白非共价键结合糖蛋白，主要表示在有核细胞表面；HLA-Ⅱ类抗原由第6号染色体对应Ⅱ类基因编码α链和β链非共价键结合糖蛋白，主要表示在抗原递呈细胞，胸腺上皮细胞表面；器官移植配型专题宣讲第6页HLA抗原生物学功效1.参加蛋白质抗原处理与递呈；2.调整免疫应答；3.参加T细胞分化过程；4.介导同种免疫应答；器官移植配型专题宣讲第7页HLA基因遗传特点1.高度多态性；HLA基因展现多位点复等位特点；2.共显性遗传：每对等位基因同时表示；3.单倍型遗传：位于同一条染色体上HLA各位点基因组合；4.连锁不平衡：单倍型基因非随机分布现象；器官移植配型专题宣讲第8页2.传统HLA分型技术血清学分型:补体依赖细胞毒试验;待测淋巴细胞与已知抗体孵育，再加入补体，若该抗体与淋巴细胞膜上HLA分子相匹配，则激活补体系统造成待测细胞膜破坏，不然细胞膜完整不受影响。不足：需要活淋巴细胞；存在交叉反应；隐蔽抗原无法识别；人为影响原因多质控难做；器官移植配型专题宣讲第9页细胞学分型：混合淋巴细胞培养技术；受者淋巴细胞与已知类型淋巴细胞或者供者淋巴细胞混合培养，两种细胞HLA分子表型假如相同则不能刺激淋巴细胞增殖，反之则刺激淋巴细胞增殖，分为单双向两种类型。不足：需要活纯合子表型淋巴细胞；增殖检测方法要用到同位素；器官移植配型专题宣讲第10页分子生物学技术分型HLA抗原蛋白分子多态性取决于对应编码基因多态性；RFLP/PCR-RFLP/PCR-SSP;PCR-SSCP;PCR-Sequencing；PCR-SSO/基因芯片技术；流式细胞仪技术；氨基酸残基配型标准分析技术；器官移植配型专题宣讲第11页聚合酶链反应（PCR）

在多聚合酶，引物，底物和模板参加下经过变性，退火，延伸三个循环步骤在短时间内到达对目标片断大量扩增，是基因分型基础。器官移植配型专题宣讲第12页RFLP/PCR-RFLP/PCR-SSP/

基因组DNA提取酶切电泳分析（RFLP）

DNA扩增（共性引物/特异性引物）

(限制性内切酶酶切)

电泳检测(PCR-RFLP/PCR-SSP)

器官移植配型专题宣讲第13页PCR-SSCP（单链构象多态性）提取基因组DNAPCR扩增（特异引物）变性(双链单链)聚丙烯酰胺凝胶电泳依据带型可检出基因多态性又可检出点突变，有利于发觉新等位基因器官移植配型专题宣讲第14页PCR-sequencing提取基因组DNAPCR扩增（非特异/特异引物）DNA测序最可靠、直接、准确HLA分型方法；临床上应用限制了供体起源；在确定等位基因多态性、发觉新位点、基因定位等研究领域应用较多；器官移植配型专题宣讲第15页PCR-SSO（序列特异性寡核苷酸探针杂交）/基因芯片技术正向杂交：提取基因组DNAPCR扩增（共性引物）将PCR产物固定在固相支持载体上并进行变性处理与标识特异性寡核苷酸探针变性杂交依据杂交信号判断HLA类型；反向杂交：将特异性寡核苷酸探针固定在固相载体上与标识PCR产物（已经变性处理）杂交依据杂交信号判断HLA类型；基因芯片技术是一个反向PCR-SSO方法，含有高通量、缩微化、自动化程度高、准确性高等优势；器官移植配型专题宣讲第16页流式细胞仪技术提取基因组DNA非特异性PCR扩增变性处理与包被了特异性HLA探针微球结合洗脱处理经过流式细胞仪检测利用流式细胞仪技术将反向固相PCR－SSO技术变为液相检测分析技术；每种包被了不一样类型HLA－DNA探针微球对应一个荧光染色能够被流式细胞仪识别；含有高通量、准确快速优势；器官移植配型专题宣讲第17页氨基酸残基配型标准分型技术依据HLA分子346个氨基酸残基中对移植物排斥与存活率含有主要影响关键氨基酸，当供受者关键氨基酸残基相同，尽管接收HLA抗原部分错配供体，产生免疫反应性依然是低反应性或无免疫反应性，从而使移植物得以长久存活。器官移植配型专题宣讲第18页HLA分型技术临床应用评价1.在器官移植中含有主要临床意义；

六位点配型标准：HLA-A/B/DR2.合理选择HLA基因分型技术；

各种方法相互补充，难以相互替换，根据不一样需求选择不一样方法器官移植配型专题宣讲第19页方法血清学分型/细胞分型基因分型(SSP/SSOP/SB)识别位点HLA分子抗原特异性，一些氨基酸残基位点DNA序列差异分辨率低（抗原特异性）HLA-A01低（抗原特异性）/中等（集团特异性）/高（等位基因特异性）HLA-A*01；HLA-A*0101/0102/0103；HLA-A*01010203抗原法/基因法器官移植配型专题宣讲第20页字母HLA代表染色体上一段特殊遗传区域（人类白细胞表面抗原区域）；A/B/DR代表该区域某一详细基因座位；数字代表