细菌内毒素检查法专家讲座

细菌内毒素检验法王思理细菌内毒素检查法专家讲座第1页较95版药典修改关键点新增加三个定义1.细菌内毒素检验用水2.鲎试剂灵敏度3.反应终点浓度细菌内毒素检查法专家讲座第2页其它增加内容序言：细菌内毒素国家标准品用途增加了复核鲎试剂灵敏度。试验准备：增加了试验所和器皿应确证无干扰细菌内毒素检验。鲎试剂灵敏度复核:增加了2管阴性对照。供试品干扰试验:增加了标准对照检验法:鲎试剂支数由原来4支增加为5支结果判断:

细菌内毒素检查法专家讲座第3页细菌内毒素检验法应用指导标准

1.细菌内毒素限值确实定：L=K/M2.干扰试验3.标准物质4.鲎试剂5.细菌内毒素检验用水细菌内毒素检查法专家讲座第4页细菌内毒素定量测定法

（比浊法和显色基质法）

1.标准物质2.细菌内毒素检验用水3.鲎试剂：应符合定量测定要求。4.试验准备：同细菌内毒素检验法。细菌内毒素检查法专家讲座第5页细菌内毒素定量试验方法1.标准曲线可靠性试验:r<-0.982.供试品干扰试验:MVD=L.C/λ1 3.测定及判断:回收率50%-200%4.供试品定量测定：测定结果与L比较细菌内毒素检查法专家讲座第6页细菌内毒素检验法应用指导标准指导意义

1.明确指明了制订指导标准目标是“为了将细菌内毒素检验法广泛应用于药品、生物制品质量控制”讲非常明确。2.首次从官方文件中必定了细菌内毒素定量测定法，这对促进“定量法”在我国应用将起重大促进作用。细菌内毒素检查法专家讲座第7页细菌内毒素检验法应用指导标准指导意义

3.指导标准对细菌内素限值作出了非常明确要求：1、细菌内毒素限值确实定药品、生物制品细菌内毒素限值(L)普通按以下公式确定：L=K/M4.在这次指导标准中只字未提热源与细菌内毒素两法改变中对比试验，即今后在两法改换中无须再做对比试验。这么必将大大加速我国两法改换进程。细菌内毒素检查法专家讲座第8页细菌内毒素检验法应用指导标准指导意义

5.指导标准中明确要求：“标准物质试验中所用细菌内毒素标准物质应使用由中国药品生物制品检定所研制、标定和分发细菌内毒素国家标准品和工作标准品。”6.伴随定量法在我国得到必定、应用和推广，它还将有力地推进促进细菌内毒素检验法在我国新进展。细菌内毒素检查法专家讲座第9页细菌内毒素国家标准品981研制

细菌内毒素检查法专家讲座第10页概况1.我国细菌内毒素国家标准品从1979年研制成功并正式建立至今共研制分发了六批。2.现行细菌内毒素国家标准品981研制与考评时间3.研制分四个阶段细菌内毒素检查法专家讲座第11页细菌内毒素国家标准品981特点

1.细菌内毒素精品提取2.细菌内毒素国家标准品赋形剂3.候选品生产4.候选品考评5.协作标定---新国际标准品IS2为基准细菌内毒素检查法专家讲座第12页细菌内毒素国家标准品981特点6.标定方法---凝胶法和定量法7.协作标定后结果经数据处理和教授讨论8.报中检所学术委员会审定9.长久稳定性考评与分装后稳定性考评10.标准品使用期细菌内毒素检查法专家讲座第13页细菌内毒素检验法考查汇报

1.王思理等一行4人于1998年1月16日-27日首次赴美国进行细菌内毒素检验法专题考查。2.我们这次考查作了充分准备,是带着问题而去,在出访前又集中讨论了要了解重点问题.3.这次考查将对我国细菌内毒素检验法发展起到良好作用.细菌内毒素检查法专家讲座第14页考查主要收获

一.鲎试剂生产与管理1.鲎试剂生产企业生产试剂均须按照美国联邦法律相关要求进行质量控制并送FDA检验经过后方可销售。2.生产企业在批批送检时须呈交全部质量控制和原始统计。3.在对鲎试剂灵敏度进行标定时需同进使用美国内毒素国家标准品和鲎试剂参考标准品。细菌内毒素检查法专家讲座第15页考查主要收获

二.内毒素标准品管理1.美国FDA负责管理内毒素国家标准品(EC系列)和鲎试剂参考品,政府无偿提供内毒素国家标准品和鲎试剂参考品给鲎试剂生产厂家用于灵敏度标定。2.工作标准品(CSE)由厂家自行生产和发放,政府不核发相关执照。细菌内毒素检查法专家讲座第16页

考查主要收获

三.细菌内毒素检验法用于药品生产过程及最终产品质量控制细菌内毒素检查法专家讲座第17页考查主要收获

四.由热原检验法改为细菌内毒素检验法

1.细菌内毒素限值计算2.由热原检验法转换为细菌内毒素检验法条件是供试品在一定条件下不干扰鲎试验，每个厂家每个品种做3批供试品干扰试验即可，无须进行对比试验。细菌内毒素检查法专家讲座第18页考查主要收获

五.细菌内毒素检验法1.鲎试剂灵敏度复核目标不是考查灵敏度是否准确，而且考查操作是否准确，以及工作标准品是否准确。2.0.1ml规格鲎试剂生产与使用应与国际接轨。3.对供试品进行常规检验时，阳性对照对4个浓度，最少有两个浓度，即2λ和0.25λ。同时供试品阳性对照不可缺乏。每个浓度平等做两管。4.．用于配制调整供试品酸碱度氢氧化钠溶液、盐酸溶液、缓冲溶液等均严格要求细菌内毒素检验用水。细菌内毒素检查法专家讲座第19页考查主要收获

六.其它1．在计算大输液内毒素限值时，M普通定为10ml/kg/hr。2.FDA关于细菌内毒素检验法Guldeline(指南)不含有法律效应，它不是Regulation。3.美国药典收裁细菌内毒素检验法法定方法为凝胶法，其它两种方法能够采取，但需做比较试验。4.新药在生产过程中和最终产品质量控制均须要求采取细菌内毒素检验法。细菌内毒素检查法专家讲座第20页几点提议1.抓紧修订和完善中国药典附录细菌内毒素检验法。2.制订细菌内毒素检验法应用指导标准，统一规范检验中相关问题。3.对鲎试剂实施批批检定或统一发放细菌内毒素工作标准品，提议中检所研究处理。4.扩大品种应用，提议药典会制订标准，宜先将中国药典95年版中要求进行热原检验法品种改为细菌内毒素检验法，新药应主动推广使用细菌内毒素检验法。细菌内毒素检查法专家讲座第21页关于怎样在我国将热原检验法改为细菌内毒素检验法记得提议细菌内毒素检查法专家讲座第22页提议一.首先应该明确将热原检验法改为细内菌毒素检验法不要做“兔法”与“鲎试验法”对比试验。对比试验严重地影响了我国在药品热原检验中改为细菌内毒素检验进度，大大落后了美国，这个历史才识必须吸收。细菌内毒素检查法专家讲座第23页提议二.要在我国大量品种实施细菌内毒素检验法一个主要任务是必须要作好细菌内毒素检验法系统工程标准化工作。

细菌内毒素检查法专家讲座第24页细菌内毒素检验法系统工程标准化内容1.《细菌内毒素检验法》修订2.细菌内毒素检验法扩大应用指导标准制订3.细菌内毒素检验法标准化操作规范(SOP)制订4.细菌内毒素国家标准品研制5.鲎试剂内在质量研究细菌内毒素检查法专家讲座第25页细菌内毒素检验法系统工程标准化内容6.鲎试剂部颁标准修订7.鲎试剂国家对照品研制8.细菌内毒素工作标准品研制9.细菌内毒素检验用水研制10.细菌内毒素定量法研究等十项内容细菌内毒素检查法专家讲座第26页提议三.明确了上述两个问题，其首要详细问题就是要科学地合理地确定细菌内毒素限值。四.将热原检验法改为细菌内毒素检验法，而且确定了内毒素限值后，关键总是就是作好干扰试验。五.做好品种选择工作细菌内毒素检查法专家讲座第27页提议

六.要在我国实施热原检验法改为细菌内毒素检验法规范化。1.要求内毒素限值(L)2.由药厂和鲎试剂厂相结合，共同做好供试品干扰试验，实现两个方法转换。3.要求各级药检所，做好配合和复核工作。细菌内毒素检查法专家讲座第28页提议

七、由药典会制订两法转换申报程序

总之为使药典能有较多品种采取细菌内毒素检验法，必须抓紧时间，充分利用这个良好机遇，做好品种汇总申报和审批工作。

细菌内毒素检查法专家讲座第29页论药品生物制品细菌内毒素检验限值确实定细菌内毒素检查法专家讲座第30页我国细菌内毒素检验法建立现实状况能够概括说：慢！主要原因：1.怎样将热原检验法改为细菌内毒素检验法或者说怎样以细菌内毒素检验法代替热原检验法？至今还没有一个明确要求。2.假如科学地合理地确定细菌内毒素检验限值？还未得到应有重视。细菌内毒素检查法专家讲座第31页一、怎样科学地合理地确定细菌内毒素检验限值

L=K/MK值确实定M值确实定细菌内毒素检查法专家讲座第32页二、当前国内在细菌内毒素限值确定中存在问题1.采取热原检验剂量就会造成细菌内毒素检验内毒素限值要求过严。2.细菌内毒素限值L确定后，就依据L值进行稀释和做干扰试验。这么它们结果也需重新考虑了。3.当前大量细菌内毒素限值实际确定、鲎试验、发表文章、上报结果等多用“热原检验剂量”或“L=K/（fM），f为安全系数，普通为3~10”来确定L值。细菌内毒素检查法专家讲座第33页再论细菌内毒素限值确实定细菌内毒素检查法专家讲座第34页当前细菌内毒素限值确定存在问题主要问题是对“M为人用每千克体重每小时最大剂量”作了以下解释：1.把最大剂量解释成“热原检验法剂量”。2.把最大剂量解释成“每小时人用量f倍”。3.把最大剂量解释成“热原剂量或人用最大剂量”。细菌内毒素检查法专家讲座第35页笔者认为科学地合理地确定细菌内毒素限值不但对我国建立细菌内毒素检验法至关主要，对确保被检药品安全使用也十分主要。而且它还直接关系到判断药品合格是否