双黄连注射剂的工艺与质量标准研究

双黄连注射剂工艺

与质量标准研究

张清波黑龙江省药品检验所

二九年八月十二日

双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第1页主要内容一、双黄连注射剂系列品种概况二、双黄连注射剂系列研究概况三、双黄连注射剂系列指纹图谱研究四、双黄连注射剂系列质量研究五、存在主要问题双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第2页FLOSLONICERAE

RADIXSCUTELLARIAEFRUCTUSFORSYTHIAE

黄芩金银花连翘一、双黄连注射剂系列品种概况

功效与主治:

清热解毒，清宣风热。用于外感风热引发发烧、咳嗽、咽痛。适合用于病毒及细菌感染上呼吸道感染、肺炎、扁桃体炎、咽炎等。

收载标准：

成方制剂十一册、中国药典一部双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第3页一、双黄连注射剂系列品种概况1、生产企业：黑龙江省生产双黄连注射剂企业共有11家（股份制企业5家、民营企业5家、私营企业1家），从业员工1.1万人。这些企业分别建厂于1950年至。有20余年生产双黄连注射剂历史，企业固定资产净值25亿元，年生产能力11.83亿支。2、剂型及规格：现有注射液、粉针剂、冻干粉针剂、滴注剂四个剂型；有20ml、300ml、500ml、0.6g、1.2g。3、生产量：现11家从到底共生产双黄连注射剂2万余批次、27亿支；至生产1.49万批次、20.53亿支。近三年来实现产值13.4亿元、利税2.1亿元，单品种产值占全行业总产值12.96%。4、销售范围：当前这些企业品种销往全国各地，分布最广企业除台湾、香港、西藏外，各省市、自治区、直辖市都有销售和使用。双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第4页二、双黄连注射剂系列研究概况

第一阶段:（～）1、对8家生产企业近100批产品进行了初步质量分析；2、进行企业工艺调研与试验室模拟工艺研究；3、与生产企业沟通，明确生产工艺应严格按照部颁标准执行4、药材样本采集：共实地采集了不一样产地70多批药材；5、考查不一样采收季节、不一样起源，不一样产地药材对指纹图谱影响；6、采取色谱指纹图谱技术，对双黄连注射剂指纹图谱整个获取过程进行了方法学验证并测定了统一工艺路线后样品7、考查了药材、中间体与成品指纹图谱相关性；8、增加了成品中绿原酸、连翘苷含量测定标准。双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第5页二、双黄连注射剂系列研究概况第二阶段（～）：1、依据样品实测情况对双黄连注射液、注射用双黄连指纹图谱评价标准进行了改进；2、增加了异常毒性、降压物质、过敏试验安全性检测标准。3、注射用双黄连指纹图谱已收载于中国药典一部增补本。双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第6页药厂实地调研，考查药材样品采集成品样品搜集试验室模拟工艺小样统一生产工艺（中期会召开）方法学验证双黄连注射剂系列指纹图谱建立中间体指纹谱研究相关性考查前期准备工作文件检索研究计划制订会议召开三、双黄连注射剂指纹图谱研究市场上近100批成品摸底药材指纹图谱研究双黄连注射剂系列质量标准提升指纹图谱条件确实立技术汇报形成征求反馈意见生产工艺追踪工艺参数变动影响双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第7页

统一工艺前八个不一样厂家双黄连注射液指纹图谱比较

从这八个厂家样品色谱图能够看出，不论从色谱峰个数上，还是各峰面积大小和相对百分比，不一样厂家产品质量不尽相同，尤其是保留时间在1020分钟色谱峰个数、510分钟色谱峰面积，厂家之间差异很大。双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第8页金银花与连翘分别煎煮提取与混合煎煮提取对指纹图谱影响

金银花、连翘混提与单提，特征色谱峰之间差异较大，表现在5、6、7号色谱峰在单提液中缺失或减弱。除1、3号色谱峰相对稳定外，大多特征峰相对峰面积比值发生改变，混提比单提有增高趋势，表明混提增加了一些成份溶出量。试验室模拟小样金银花与连翘分别煎煮提取金银花与连翘混合煎煮提取双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第9页金银花、连翘提取不一样煎煮时间对指纹图谱影响

峰号保留时间相对峰面积RSD（%）煎煮2小时/次煎煮1小时/次15.9790.2110.2804.85929.2621.0001.0000.000310.2790.2760.3535.484411.2870.0340.0380.275515.0960.0500.0480.127615.5250.0400.0420.152715.8960.0830.0770.446820.1500.2560.1994.019921.2160.4430.4963.7331022.1710.0600.0580.1481126.0660.5040.5513.317

对金银花、连翘提取煎煮时间分别进行每次煎煮1小时和每次煎煮2小时考查，结果特征峰峰数与峰位没有改变，相对峰面积比值改变不大。双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第10页

金银花、连翘提取各步骤对指纹图谱影响

峰号保留时间醇沉纯化稀配RSD(%)15.9830.2800.1500.05511.295

29.2361.0001.0001.0000.000310.2670.3530.1960.11412.184411.3300.0380.0210.0200.989515.1140.0480.0370.0350.689615.5440.0420.0320.0310.624715.9250.0770.0410.0352.286820.1640.1990.1030.1364.846921.1830.4960.3240.3349.6491022.1970.0580.0420.0361.1401126.0610.5510.3320.28214.292

重点考查醇沉、纯化、稀配这三步留样。HPLC分析结果显示，特征色谱峰峰数与峰位无大区分，即成份未有改变，但来自金银花药材2号特征峰（绿原酸）及1、3、9、11号特征峰峰面积伴随一步步生产而降低，其它特征峰相比受影响较小。醇沉纯化稀配双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第11页金银花、连翘提取不一样醇沉温度对指纹图谱影响

峰号保留时间相对峰面积RSD（%）20OC醇沉40OC醇沉60OC醇沉15.9860.1360.0820.0813.13229.2001.0001.0001.0000.000310.2670.1640.1670.1630.190411.2800.0250.0260.0260.019515.0830.0490.0660.0471.056615.5170.0420.0440.0420.070715.8920.0610.0630.0600.126820.1300.2560.2650.2530.607921.1640.4500.4680.4461.1381022.1660.0550.0560.0540.0811126.0550.3970.4070.3930.74240CO20CO60CO

对金银花、连翘提取进行20C、40C、60C不一样醇沉温度考查，结果特征峰峰数与峰位没有改变，相对峰面积比值改变较小（RSD小于3%）双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第12页金银花、连翘提取中冷藏放置与冷冻放置对指纹图谱影响

峰号保留时间相对峰面积RSD（%）冷藏冷冻15.9830.2720.2800.57629.2711.0001.0000.000310.2750.3340.3531.352411.2960.1590.0388.575515.1000.0470.0480.080615.5290.0430.0420.053715.9040.0810.0770.274820.1540.2170.1991.293921.2080.4880.4960.5721022.1710.0720.0580.9831126.0660.5630.5510.848

对金银花、连翘药材水煎、浓缩后进行冷藏放置与冷冻放置对比考查，结果除4号特征峰差异较大外（冷藏峰面积增值较大），其它均相差无几。双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第13页以上研究结果表明：1、金银花、连翘药材合煎与分煎对一些成份溶出有较大影响；2、生产工艺各步骤一致性也是取得稳定双黄连注射液指纹图谱关键原因；3、在一定范围内，不一样煎煮时间、不一样醇沉温度对双黄连注射液指纹图谱影响不大。三、双黄连注射剂指纹图谱研究双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第14页双黄连注射剂药材指纹图谱研究连翘药材【中国药典】连翘为木犀科（Oleaceae）连翘属植物连翘Forsythiasuspensa（Thunb.）Vahl.干燥果实。秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称“青翘”；果实熟透时采收，晒干，除去杂质，习称“老翘”。双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第15页22批连翘药材质量情况起源水分（%）连翘苷含量（%）三精6.90.134晨星6.00.295乌苏里江7.30.252福和华星6.10.183齐齐哈尔7.00.088哈中药二厂6.40.115浙江药检所提供（山东产）6.10.126河南淅川5.30.152三精河北安国（10月上旬）6.40.200三精山西降县（10~11月）7.10.068山西（青翘）12.10.612山西6.90.111山西陵川（老翘）6.60.098栾川县（伏牛山北）（11月）7.10.083栾川县（伏牛山北）（青翘9~10月）6.60.079辉县南塞镇（太行山老翘）7.70.047辉县南塞镇（青翘水煮后晒干）5.30.206辉县南塞镇（太行山老翘）7.60.312陕西商洛市山阳县玉竹乡7.20.091陕西临汾（青翘）6.50.122商洛市商州县（）7.00.043双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第16页编号保留时间山西陕西栾川辉南陵川812.74144.809254.42321.266115.767136.2261013.663160.6315.233395.051110.449214.5821214.5621385.105170.253135.429248.32470.0872021.346888.85232.18599.311824.281273.4932424.43514758.922557.8072055.913498.953993.9252625.76385.36559.82653.66944.99553.7362726.814616.897199.472263.935241.897317.0283637.035379.5276.96655.552230.448261.9013737.924962.039158.784100.574394.731207.0874440.924125.83273.951172.306104.606236.1944842.587264.63489.187159.407268.868474.2765244.23123.37159.18163.377218.658196.2245646.695414.1669.53982.698134.358177.1015949.95262.156150.72761.458145.694568.693不一样产地青翘指纹图谱双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第17页编号保留时间山西栾川辉南02辉南03陵川112.746244.096105.838148.517402.338292.936213.673333.769131.911174.775478.842359.515314.56969.824110.50642.545173.50191.267421.359173.135449.678398.463953.514421.195524.4821218.2141574.895741.3191671.2941519.973626.848161.595136.62656.855181.487168.898727.351102.1432.99759.298164.022150.951837.037216.25876.14348.68193.45103.987937.927228.20291.31248.804317.689201.4771040.903118.25768.01588.394197.192131.6021142.573274.572237.432164.058221.832458.2151249.951223.584106.84145.13684.168114.063不一样产地老翘指纹图谱双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第18页

有3对相同产地青老翘，分别是山西、栾川、陵川，把它们图谱进行比较发觉：1、山西青老翘在色谱峰保留时间和峰数上较为一致，只是峰面积有所增减，如老翘中10.919、12.737、13.662峰面积稍有增加，而14.562、18.850、21.323、46.666和37.902（连翘苷）峰面积显著降低；2、栾川青老翘在色谱峰保留时间和峰数上也较为一致，老翘色谱峰除了12.737、13.662峰面积降低外，其它色谱峰无显著改变；3、陵川老翘则在10.919、49.944峰面积显著降低，其它峰面积无显著改变。

总之，相同产地老翘大部分色谱峰峰面积均比青翘降低。相同产地青、老翘指纹图谱双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第19页双黄连注射剂药材指纹图谱研究黄芩药材【中国药典】黄芩为唇形科植物黄芩ScutellariabaicalensisGeorgi干燥根，春秋二季采挖，除去须根和泥沙，晒后撞去粗皮，晒干。

药材样品搜集双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第20页黄芩药材匹配结果双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第21页双黄连注射剂药材指纹图谱研究金银花药材【中国药典】本品为忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.、红腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq.、山银花LoniceraconfusaDC或毛花柱忍冬LoniceradasystylaRehd.干燥花蕾或带初开花。夏初花开放前采收，干燥。金银花质量情况双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第22页金银花同山银花比较双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第23页7批金银花药材图谱比较

忍冬与红腺忍冬区分双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第24页1、不一样品种药材得到指纹图谱不一样；2、不一样产地药材得到指纹图谱不一样；3、不一样采收季节药材得到指纹图谱不一样4、要取得到稳定、均一成品指纹图谱，固定药材品种、产地、采收季节是不可忽略原因之一。双黄连注射剂药材指纹图谱研究双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第25页金银花中间体在金银花药材中追踪三、双黄连注射剂指纹图谱研究金银花中间体金银花药材双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第26页连翘提取物三、双黄连注射剂指纹图谱研究连翘中间体在连翘药材中追踪连翘药材双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第27页5批黄芩提取物匹配结果

三、双黄连注射剂指纹图谱研究黄芩中间体在黄芩药材中追踪双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第28页三、双黄连注射剂指纹图谱研究1、中间体各特征峰均可在药材指纹图谱中得到追踪；2、药材经过适当方法提取纯化后HPLC谱图中色谱峰比中间体多；3、中间体色谱图与相对应药材色谱图在对应峰量上有所改变。4、建立指纹图谱能够很好地控制药材、中间体乃至成品质量。双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第29页样品测定10个厂家21批样品6个厂家18批样品双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第30页从整个色谱峰面积看：1、各厂家黄芩苷投料比较稳定（10号峰峰面积RSD值最小）；2、属于连翘5、6号色谱峰和属于金银花及连翘7号峰，属于黄芩及连翘8号峰峰面积即使不大，也相对比较稳定；3、属于金银花1-4号和9号峰改变较大；结果表明，确保不一样厂家生产出相同质量产品关键是1-4号和9号这5个色谱峰峰面积相对稳定，即金银花质量和生产工艺同一性。三、双黄连注射剂指纹图谱研究双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第31页三、双黄连注射剂指纹图谱研究21批双黄连注射液指纹图谱相同度输出黄芩苷信号未输出黄芩苷信号双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第32页11批双黄连注射液指纹图谱相同度（未输出黄芩苷信号）

双黄连注射液对照指纹图谱（未输出黄芩苷信号）双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第33页双黄连注射液药材与成品、中间体相关性

双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第34页色谱峰描述

共有10个特征峰，分为两部分，保留时间在15分钟以前是1—4号峰，不应有多峰现象，其中2号峰为绿原酸，其分离度高，峰面积积分值适中，作为参考峰（S）；1—3号峰来自金银花药材；4号峰为连翘药材中含有成份，同时也是工艺过程中转化产物。保留时间在15分钟以后是5—10号峰，其中5、6号峰为连翘药材特征峰，7号峰为连翘和金银花药材所共有，8号峰为连翘和黄芩药材所共有，9号峰为金银花药材特征峰，10号峰为黄芩苷，10号峰之后有一组黄芩药材特征峰。

双黄连注射液对照指纹图谱金银花连翘黄芩双黄连注射剂的工艺与质量标准研究第35页注射用双黄连对照图谱色谱峰