无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证

无菌区与设备清洗消毒灭菌设计及验证钱应璞5月20日济南2023/4/231无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第1页无菌药品工艺再验证主要内容验证类型验证内容再验证周期药监部门或法规要求强制性无菌操作培养基灌装试验最少二次/年计量器具强制检定一次/年设备清洗验证，高效过滤器检漏一次/年发生变更时“改变”性工艺参数改变或工艺路线变更原料、包装材料质量标准改变或产品包装形式设备改变生产处方修改或批量级改变常规检测表时系统存在着影响质量变迁迹象每隔一段时间进行“定时”关键洁净区空调净化系统与工艺用水系统二次/年无菌药品生产过程中使用灭菌设备二次/年2023/4/232无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第2页设备、器具清洗消毒灭菌目标确立可靠清洁方法和程序，以预防药品在生产过程中受到污染和交叉污染。标准设备设计、选型、安装、改造和维护必须符合预定用途，应尽可能降低发生污染、交叉污染、混同和差错，便于操作、清洁、维护，以及必要时进行消毒或灭菌。要求要求详细而完整清洁方法、清洁用设备或工具、清洁剂名称和配制方法、保护已清洁设备在使用前免受污染方法、已清洁设备最长保留时限、使操作者能以可重现、有效方式对各类设备进行清洁。2023/4/233无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第3页设备、器具清洗消毒灭菌对设备消毒或灭菌，应要求消毒或灭菌详细方法、消毒剂名称和配制方法；设备生产结束至清洁前所允许最长间隔时限；范围通常只有接触产品设备表面清洁规程需要验证。非接触产品部分也应考虑；验证阶段选定清洁方法，制订清洁规程（开发阶段）；制订验证方案（参考物、取样点、合格标准、取样方法和检验方法）；实施验证，获取数据，评价并提出结论；监控及再验证。2023/4/234无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第4页欧洲清洁与清洁验证相关法规介绍生产设备设计应使其能被易于并彻底清洁，其清洁应该依据详细与书面化程序进行，并只能储备在清洁与干燥环境中。清洗与清洁设备选择与使用不应使其成为污染起源；应进行清洁验证，以确认清洁程序有效性。在设定产物残余物，清洁剂与微生物污染限定值时，其合理性应科学地基于所包括各种材料特征；使用对于检测残余物或污染物含有敏感性，经验证分析方法，每一分析方法检测范围应足以每感地检测到抵达一定水平残余物或污染。2023/4/235无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第5页设备、器具清洗清洁从设备表面去除可见及不可见物质过程：活性成份及活性物质衍生物；清洁剂（来自清洁过程）；微生物（来自物料污染、清洁污染）；消毒剂；润滑剂；环境污染物质；设备运行过程中释放出异物；冲洗水中残留异物。清洁验证去除上述污染物，预防可能发生污染和交叉污染（混同）2023/4/236无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第6页设备、器具清洗清洁方法分类手工清洗由操作人员拆、擦洗或用高压水枪清洗；机械磨擦，效果很好，但重现性差；自动清洗由自动控制进行冲洗清洗，有带干燥功效；溶解、冲击法去污，有些部位不轻易清洁，但重现性好；半自动清洗以上两种方式相结合清洗过程；2023/4/237无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第7页设备、器具清洗清洗原理基础溶剂移动到表面扩散与对流溶剂和尘垢“反应”反应产物经过扩散与对流进行远离表面移动；清洗程序拆卸方法预洗/检验要求清洗（清洁剂、方法、时间、温度范围）淋洗（用符合药典标准水、固定方法和固定时间）装配：按说明书、示意图要求装配）2023/4/238无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第8页设备、器具清洗干燥：明确方式和参数检验；符合设定标准，包含目检贮存：保持设备及系统完好状态方法，如倒置、放在层流罩下、在线灭菌、要求存放时间；在线清洗系统设计必须满足特定工艺清洁要求；在线清洗溶液与全部被污染表面接触并连续补充溶关键变量自动控制。浓度（在线清洗溶液）；温度；时间（在线清洗溶液暴露）；压力；2023/4/239无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第9页器具清洗与灭菌工艺设计思绪器具清洗关键是应含有“可重复性”，为得到可重现和一致结果和清洗结果方便列入文件，GMP要求在生产过程中全部接触药品部件，如玻璃器皿，容器，桶，管道，灌装部件等，都必须采取“可重复”，“能被统计”清洁方式来去除残留杂质。人工清洗无法验证和重复，全部直接或间接接触药液容器具均采取CIP或器具清洗机清洗，以防止难以验证手动清洗；经过初步手工清洗后，放入器具清洗机进行清洗。之后进行装配，全部器含有灭菌前，都应使用适合用于蒸汽和环氧乙烷两种方法灭菌呼吸材料进行适当无菌包装。再进入湿热灭菌柜灭菌。对需要传入A/B级使用器具也必须进行双层包装。2023/4/2310无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第10页经典工艺系统清洗清洁方法在线清洗（CIP）-设备处于原位，通常可自动控制也可半自动，比如多个容器洗涤采取洗涤CIP机组清洗；离线清洗-小型设备和工器具适合。取清洗残余水样确认参考清洗验证标准残留物小于等于10ppmpH值：与原来注射用水一致；杂菌小于25cfn/ml;内毒素小于0.25EU/ml；2023/4/2311无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第11页工艺系统清洗确认清洁验证中常见参考方法加参考品法加入轻易测试（化合物）成份方法，经清洁后测残留；程度试验法在注射用水中加入理论计算量组分，使之刚好是残留控制标准，然后将淋洗水样用同一方法进行比较；参考物增量法将某个要控制组分量加大，处理量小无法测试问题，再测清洁后残留；浓缩法将样品浓缩，测试后计算。2023/4/2312无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第12页工艺系统清洗确认最难清洗产品活性物质溶解度（水/清洗剂）；剂型；活性物质在产品中浓度；辅料物理及化学性质；一些特殊工艺过程（加热、匀化、混合等）；清洗工经验。2023/4/2313无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第13页工艺系统清洗确认确定最难清洁部位和取样点死角清洁剂不易接触到部位；压力小、流速很低部位；轻易吸附残留物部位；残留物程度确实定最小批量；最含有活性产品；最大日服用剂量。2023/4/2314无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第14页工艺系统清洗确认清洗程度检测清洁后设备目检化学检验棉签擦拭取样，确定残留在设备表面活性物质浓度；冲洗溶剂取样，确定残留在设备表面活性物质浓度，适合用于棉签无法取样部件；最终冲洗水取样，确定残留在设备表面全部水溶性物质及清洁剂残留量。微生物检验棉签取样检验最终冲洗水取样检验总有机碳（TOC）测试测量擦洗或冲洗后水样中总有机碳量。2023/4/2315无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第15页工艺系统清洗确认分析方法确认分析方法：能够检测出残留物或污染物。特定物质能够检出；在允许清洁程度内能够检出（灵敏度）灵敏度和特殊性HPLC、GC、光谱法、TOC；验证分析方法应该包含：精密度、线性和选择性；回收率；再现性；检测限能够检测出已确定程度残留物/污染物。2023/4/2316无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第16页

消毒灭菌方法设计与确认2023/4/2317无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第17页药品无菌性形成原理无菌相关术语无菌确保值（SAL）：指经灭菌后非无菌品概率。最终灭菌产品非无菌吕概率不超出百万分之一，即SAL≤10-6；非最终灭菌产品非无菌品概率不超出千分之一，即SAL≤10-3

Z值：当某种微生物D值下降（或上升）一个对数单位时，其温度应升高（或降低）度数。FT：指T摄氏度下灭菌时间；F0：指标准灭菌时间。将121℃作为标准灭菌温度，当Z设定为10℃时，灭菌程序赋予被灭菌品121℃下等效灭菌时间；2023/4/2318无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第18页药品无菌性形成原理D值-微生物耐热参数

在特定灭菌条件下，使微生物杀灭90%（下降一个对数单位）所需分钟数。影响D值原因：使用微生物；微生物贮存条件；复苏和培养条件；灭菌柜工作时间；起始温度；培养基悬置及复苏类型；灭菌后段连续时间及温度；蒸汽饱和度；包装情况。2023/4/2319无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第19页注射剂无菌性形成原理注射剂无菌性形成三种主要工艺湿热灭菌工艺；干热灭菌工艺；除菌过滤工艺。2023/4/2320无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第20页注射剂无菌标准最终灭菌产品普遍接收无菌标准灭菌后，最终灭菌注射剂或其它关键设备微生物存活概率到达10-6，即一百万个已灭菌物品或制剂中存活微生物低于一个。非最终灭菌产品无菌标准产品中微生物存活概率到达10-3，即确保1000个制剂中存活微生物数低于一个。2023/4/2321无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第21页湿热灭菌工艺湿热灭菌工艺用途药品小容量注射剂玻璃瓶；塑料瓶；软包装材料。器材：过滤器；胶塞；工器具；配料罐、接收罐；药液、工艺用水管道；灌装用具；无菌工作服、口罩、手套。2023/4/2322无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第22页干热灭菌工艺干热灭菌工艺用途金属、玻璃制品/工具和干粉灭菌与除热原干热灭菌参考温度干热灭菌中孢子D值是改变；干热灭菌温度分布均一性及穿透性均不如湿热灭菌；国际上以121℃为标准灭菌温度，对应灭菌时间以F0表示；干热灭菌普通取170℃为标准参考温度，对应灭菌时间以FH表示；中国药典中要求是：160-170℃2小时以上；170-180℃1小时以上；250℃45分钟以上。2023/4/2323无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第23页干热灭菌工艺干热灭菌与去热原关系去热原工艺条件比孢子杀灭程序要苛刻得多，通常相当于标准干热灭菌进行FH数十倍；假如干热法去热原工艺能使细菌内毒素下降3个对数单位，就无须再进行微生物生物指示剂挑战性试验。2023/4/2324无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第24页洁净/无菌环境消毒灭菌2023/4/2325无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第25页洁净/无菌环境消毒灭菌与微生物监控无菌药品中污染菌起源生产环境；操作人员；原料及内包装材料；工艺用水、氮气、压缩空气；生产设备：药液（粉）接收罐、灌药机、工器具；生产区域使用清洁工具及消毒剂等。以微生物判别系统为调查伎俩API系统（AnalyticalProfileIndex);FDA对菌种属比细菌数量更重视；要求：希望能够最大程度把被污染药品检验出来；要尽可能克服无菌检验不足。2023/4/2326无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第26页洁净/无菌环境消毒灭菌与微生物监控洁净室内人员管理与微生物监控人员行为污染和控制办法人眼可见最小颗粒为30微米；坐着不动能产生100000个颗粒；行走能产生5000000个颗粒；跑动能产生15000000个颗粒；微生物在空气和体内外表面；包含细菌、病毒、霉菌和酵母菌；人体携带微生物数量惊人，且依据个人卫生习惯不一样因人而异。2023/4/2327无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第27页洁净/无菌环境消毒灭菌与微生物监控管理人员应含有能务，资格和经验；组织机构完善、关键岗位人员配置合理；生产，工程，维护，保洁等部门全部员工培训；洁净厂房；卫生学；微生物学；洁净/无菌区域内行为培训。制订健康要求，行为规范，服装规则；控制人员到最小量，出入控制。2023/4/2328无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第28页洁净/无菌环境消毒灭菌与微生物监控洁净/无菌区域消毒灭菌消毒对付微生物一个伎俩；其目标是消除其活性或者破坏微生物；在地上、墙上、玻璃上、固定管路外部、贮罐外部、盥洗盆、人员手表面喷洒消毒剂；注意：消毒能够使孢子、微生物产生耐受性；灭菌：以完全杀灭微生物（包含芽孢和顽固有机体）为目标；毁灭一切有机体以及完全铲除其恢复活性能力伎俩。2023/4/2329无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第29页洁净/无菌环境消毒灭菌消毒剂定义能消除以细胞繁殖形态出现微生物污染化学物质。理想消毒剂抗菌谱广；低毒或无毒；无腐蚀性，无污染；有洗涤作用；稳定性好；作用快速；作用持久；价格低廉；2023/4/2330无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第30页洁净/无菌环境消毒灭菌消毒剂验证经过特定微生物与某消毒剂在要求使用浓度下，接触要求时间后，对微生物进行培养、计数，考查消毒剂消毒/杀菌效果。2023/4/2331无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第31页洁净/无菌环境消毒灭菌消毒剂使用无菌区域使用消毒剂须经过0.22微米无菌过滤；为克服耐药性，应轮番使用不一样种类消毒剂；使用消毒剂消毒后，只能用消毒或灭菌清洁工具；使用消毒剂人员要接收相关培训；消毒剂应有专门进入各生产区域路径；异常情况处理方案；带菌试验器具和耗材要灭菌处理。2023/4/2332无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第32页洁净/无菌环境消毒灭菌影响消毒剂使用原因菌种；培养基组分；接触时间；中和剂种类；表面张力；样品量；测试/验证方法；接种；培养时间/温度；pH值；渗透压；回收率；培养基性质。2023/4/2333无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第33页洁净/无菌环境消毒灭菌与微生物监控洁净室惯用消毒剂醇类：醇类消毒剂使微生物蛋白质变性，在没有水情形下，蛋白质不易被变性，在乙醇中加入一些水会使杀菌效力更佳。酚类化合物：广谱抑菌，对革兰氏阳笥细菌和革兰氏阴性细菌以及真菌都有杀伤作用。酚类消毒剂适宜用水溶液或含乙醇水溶液配制。有效浓度为400ppm到1300ppm之间。季铵盐类化合物：季铵盐类化合物在酸性或碱性环境均能杀死细菌或真菌，在碱性环境中杀菌效力稍强一些。如新洁尔灭溶液（0.05%-0.1%苯扎溴铵溶液）。液体灭菌剂和杀孢子剂：次氯酸钠、二氧化氯、过氧化氢、戊二醛、甲醛和过氧乙酸等；消毒剂定时交替使用不一样消毒剂是为了预防环境中微生物对同一个消毒剂产生抗性影响实际消毒效果。2023/4/2334无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第34页洁净/无菌环境消毒灭菌无菌生产场地惯用化学熏蒸对区域进行灭菌，亦称大消毒；灭菌介质甲醛气体/戊二醛；石碳酸与乳酸混合气体（1：1）气化双氧水；臭氧、紫外线；灭菌方法对室内换气速度影响气体熏蒸废气排除速度与熏蒸方法相关；气体熏蒸废气排除与中和处理是否相关；与HVAC系统中排风与新风系统设计相关，通常希望新风在排废气时进风量与回风量相等。与自动控制水平相关。经过化学气体残留测试确认系统是否满足工艺要求灭菌周期。甲醛消毒与排气至人员能够进入周期为二十四小时。2023/4/2335无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第35页洁净/无菌环境消毒灭菌气体灭菌细菌挑战试验方法：每个试验位置配养皿内有含107个枯草杆菌试纸2张；设定灭菌程序熏蒸后取一张试纸作菌检（普通肉汤配养基37℃，72小时），假如无菌则试验完成，但属试验不成功。须降低药量重新熏蒸直至为阳性，即有菌有各另一张试纸作含菌数试验；合格标准：灭菌后枯草杆菌残留104为合格（即下降3个对数单位）；熏蒸无菌后室内残留量测试。应有残余浓度小于1-2ppm。2023/4/2336无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第36页洁净/无菌环境消毒灭菌甲醛或杀孢子空间灭菌效果验证实例经过用生物指示剂进行细菌挑战性试验，消毒剂灭菌前后表面微生物检测，来检验其灭菌效果；接收标准：生产指示剂挑战性试验接收标准：含菌量为105-106和103菌条消毒后，无菌条件下放入配套增菌液中于37℃培养72小时，阳性对照为加入未消毒菌条增菌液，阴性对照为未加指未剂增菌液；空间熏蒸消毒方法：在无菌区有一套独立熏蒸消毒系统，使消毒剂在各房间内形式雾状水气渗透到洁净区每一角落，经过验证确定消毒剂量、空间温湿度、熏蒸时间和雾化程序。2023/4/2337无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第37页洁净/无菌环境消毒灭菌消毒剂用量：37-40%甲醛：12-15ml/m3，中和用25-28%氨水（12-15ml/m3）；杀孢子剂为22%过氧化氢及4.5%过氧乙酸，60ml/m3，5%稀释液（也可依据洁净厂房设施及地面抗氧化能力适当提升浓度）；空间熏蒸消毒条件：调整万级无菌区域空调为消毒状态；甲醛：设定无菌区域温度为35-40℃，湿度为65-75%；熏蒸4小时；杀孢子剂：设定无菌区域温度为20-25℃，湿度为40-50%，熏蒸2小时。2023/4/2338无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证第38页洁净/无菌环境消毒灭菌测试方法生物指示剂挑战性试验：确定生物指示剂摆放位置，放在生产重点区域，及污染高风险区域，防止回风口。消毒前将生物指示剂放入洁净区各个测试点，使菌条暴露在空气下，消毒结束后待洁净区无刺激性气味后进入洁净区收回菌条，无菌条件下依次将菌条放入配套增菌液中，在37培养二十四小时、48小时、72小时，统计结果。同时做阳性对照和阴性对照；表面微生物测试：检测人员分别在消毒前后进入洁净区，对地面、墙面、窗台设备等进行表面微生