病毒感染的检查方法与防治原则专家讲座

病毒感染检验方法与防治标准病毒感染的检查方法与防治原则第1页重点及难点标本采集和送检病毒分离培养方法病毒感染血清学诊疗方法人工主动免疫和被动免疫及其惯用制剂病毒感染的检查方法与防治原则第2页第一节病毒感染检验方法标本采集与送检病毒分离与判定病毒感染诊疗病毒感染的检查方法与防治原则第3页一、标本采集与送检采集急性期标本使用抗生素冷藏保留，快速送检采集双份血清病毒感染的检查方法与防治原则第4页二、病毒分离与判定（一）病毒分离培养动物接种鸡胚培养细胞培养病毒感染的检查方法与防治原则第5页动物接种病毒感染的检查方法与防治原则第6页应用：无敏感细胞培养病毒优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：要有喂养条件，费用高，有潜伏病毒，对许多人类病毒不敏感动物接种病毒感染的检查方法与防治原则第7页鸡胚培养优点：对各种病毒敏感，条件易控制，操作简单，成本较低缺点：无病毒增殖指标；有些病毒可致鸡胚死亡病毒感染的检查方法与防治原则第8页鸡胚接种部位示意图病毒感染的检查方法与防治原则第9页单层细胞悬浮细胞依据细胞生长情况原代细胞二倍体细胞传代细胞系依据细胞起源、染色体特征及传代次数细胞培养病毒感染的检查方法与防治原则第10页1.原代细胞primarycells对各种病毒敏感起源困难,获取成本高可携带潜伏病毒病毒感染的检查方法与防治原则第11页2.二倍体细胞diploidcells对各种病毒敏感不带病毒，无致癌潜能用于病毒疫苗生产病毒感染的检查方法与防治原则第12页

3.传代细胞continuouscell对各种病毒敏感繁殖能力高，传代时间长不能用于病毒疫苗生产病毒感染的检查方法与防治原则第13页病毒在培养细胞中增殖指征:细胞病变红细胞吸附病毒干扰作用细胞代谢改变病毒感染的检查方法与防治原则第14页细胞病变效应cytopathiceffect,CPE

正常细胞细胞病变早期细胞病变晚期病毒感染的检查方法与防治原则第15页

红细胞吸附hemadsorption

带有血凝素病毒感染细胞后，能与脊椎动物红细胞结合鸡红细胞吸附于流感病毒感染细胞病毒感染的检查方法与防治原则第16页

风疹病毒

人胚肾细胞CPE(－)埃可病毒

人胚肾细胞CPE(＋)人胚肾细胞埃可病毒CPE(-)CPE(+)待检标本风疹病毒(-)风疹病毒(+)病毒干扰作用viralinterference

一些病毒不引发CPE,但可干扰感染同一细胞另一病毒增殖，抑制该病毒CPE。病毒感染的检查方法与防治原则第17页（二）病毒判定形态学判定血清学判定分子生物学判定病毒感染的检查方法与防治原则第18页1.形态学判定光学显微镜巨细胞病毒包涵体透射电镜SARS病毒病毒感染的检查方法与防治原则第19页Ab

方法包含Ag

2.血清学判定用已知特异性抗体对病毒进行种、型和亚型判定ELISA中和试验血凝抑制试验补体结合试验病毒感染的检查方法与防治原则第20页

方法包含3.分子生物学方法判定对病毒蛋白抗原、核实进行检测蛋白印迹技术核酸扩增核酸杂交基因芯片基因测序病毒感染的检查方法与防治原则第21页新病毒判定核酸类型测定理化性状检测基因测序和生物对比病毒感染的检查方法与防治原则第22页（三）病毒数量与感染性测定50%组织细胞感染量红细胞凝集试验空斑形成试验病毒感染的检查方法与防治原则第23页

1.50％组织细胞感染量

50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50原理：测定50%细胞出现CPE最小病毒量以CPE作指标，判断病毒感染性和毒力测定活病毒数量病毒感染的检查方法与防治原则第24页

++++++++++++++++++--2.红细胞凝集试验redcellagglutinationtest

原理：测定使红细胞发生凝集最小病毒量测定病毒总量（活病毒+死病毒）凝集效价：能使红细胞呈++凝集病毒最高稀释度为凝集效价，该稀释度记为一个血凝单位病毒感染的检查方法与防治原则第25页3.空斑形成试验plaqueformationtest原理：将适量病毒接种单层细胞，病毒增殖使感染细胞脱落，形成肉眼可见空斑空斑形成单位（plaqueformattingunit，PFU）：由一个感染病毒增殖所致测定活病毒数量病毒感染的检查方法与防治原则第26页三、病毒感染诊疗形态学检验病毒成份检测血清学诊疗病毒感染的检查方法与防治原则第27页（一）形态学检验电镜和免疫电镜检验光学显微镜检验病毒感染的检查方法与防治原则第28页（二）病毒成份检测病毒蛋白抗原检测EIA、FIA、Wb病毒核酸检测核酸扩增技术核酸杂交技术基因芯片技术基因测序技术病毒感染的检查方法与防治原则第29页（三）血清学诊疗中和试验血凝抑制试验补体结合试验凝胶免疫扩散试验特异性IgM抗体检测病毒感染的检查方法与防治原则第30页血清学诊疗用途分离病毒为时已晚无法分离或难以分离病毒证实分离病毒临床意义血清流行病学调查病毒感染的检查方法与防治原则第31页原理：病毒＋中和抗体病毒失去感染性1.中和试验neutralizingtest检测血清中抗体水平判定未知病毒对病毒进行半定量较少用于临床诊疗，用于人群免疫情况调查病毒感染的检查方法与防治原则第32页原理：病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞

不凝集带血凝素病毒感染辅助诊疗判定病毒型和亚型2.血凝抑制试验Hemagglutinationinhibitiontest

病毒感染的检查方法与防治原则第33页343.补体结合试验Complementfixationtest原理：用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中对应补体抗体特异性低，抗体出现早，消失快近期感染指标病毒感染的检查方法与防治原则第34页第二节病毒感染特异性预防人工主动免疫人工被动免疫病毒感染的检查方法与防治原则第35页1.人工主动免疫灭活疫苗减毒活疫苗亚单位疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗核酸疫苗病毒感染的检查方法与防治原则第36页2.人工被动免疫免疫球蛋白血清丙种球蛋白细胞免疫制剂细胞因子病毒感染的检查方法与防治原则第37页逆转录病毒复制示意图第三节病毒感染治疗病毒感染的检查方法与防治原则第38页第三节病毒感染治疗抗病毒化制剂干扰素和干扰素诱生剂中草药新抗生素类治疗性疫苗治疗性抗体基因治疗剂病毒感染的检查方法与防治原则第39页抗病毒化学制剂核苷类药品阿昔洛韦、利巴韦林、拉米夫定等非核苷类反转录酶抑制剂奈韦拉平、吡啶酮、甲酸磷霉素蛋白酶抑制剂塞科纳瓦、英迪纳瓦、瑞托纳瓦其它抗病毒药品金刚烷胺、甲酸磷霉素病毒感染的检查方法与防治原则第40页41干扰素和干扰素诱生剂干扰素干扰素诱生剂PolyI:C、甘草甜素、芸芝多糖病毒感染的检查方法与防治原则第41页42以流感病毒为例，试述病毒分离培养普通程序。病毒感染血清学诊疗惯用方法及原理？病毒感染早期试验室快速诊疗有哪些方法？病毒分离培养时对临床标本采集和送检有哪些要求？病毒检测和细菌检测有什么区分？复习思索题病毒感染的检查方法与防治原则第42页中英文关键词红细胞吸附hemadsorption血清学检测serologicaldiagnosis细胞病变效应

cytopathiceffect,CPE血凝抑制试验

hemagglutinationinhibitiontest50%组织细胞感染量

50%tissuecultureinfectiousdose,TCID50

病毒感染的检查方法与防治原则第43页[1]NealNathanson.ViralPathogenesisandImmunity.(secondedition)，北京：科学出版社，。[2]Martín-CarboneroL,PovedaE.HepatitisBViru